飼料中粗蛋白的測定課件

1、飼料中粗蛋白的測定,1,飼料中粗蛋白的測定,飼料中粗蛋白的測定,2,常用方法,國標(biāo)法 凱氏定氮儀法 強(qiáng)堿直接蒸餾法 雙氧水法,飼料中粗蛋白的測定,3,樣品的采集、制備,生產(chǎn)單位有代表性的原料檢樣：魚粉、玉米蛋白粉、豆粕 采用四分法將檢樣縮至500g，粉碎后通過40目篩，裝于密閉容器中，防止試樣成分變化或變質(zhì),飼料中粗蛋白的測定,4,國標(biāo)法,實驗原理 國標(biāo)法測定試樣中含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化為硫酸銨，加入堿進(jìn)行蒸餾使NH3 逸出，用硼酸吸收后，再用鹽酸滴定，測出含氮量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計算出粗蛋白的含量。,飼料中粗蛋白的測定,5,實驗試劑,硫酸：化學(xué)純

2、，含量為98%，無氮； 混合催化劑：0.4gCuSO4，6gK2SO4 或 Na2SO4 均為化學(xué)純，磨碎混勻； NaOH：40% 水溶液，化學(xué)純； 硼酸：2% 水溶液，化學(xué)純； 混合指示劑； 0.1mol/LHCl標(biāo)準(zhǔn)溶液； 0.02mol/LHCl標(biāo)準(zhǔn)溶液； 蔗糖：分析純； 硫酸銨：分析純，干燥； 硼酸吸收液。,飼料中粗蛋白的測定,6,儀器,實驗用樣品粉碎機(jī)或研缽； 40目分析篩； 分析天平； 電爐； 酸式滴定管； 凱氏蒸餾裝置； 凱氏定氮裝置,飼料中粗蛋白的測定,7,操作步驟,試樣的消化 稱取試樣 0.5 1g（含氮量5 80mg），準(zhǔn)確至0.0002g，小心無損的將樣本放入 100mL

3、洗凈烘干的凱氏燒瓶中。加入 6.4g 混合催化劑與試樣混合均勻，再加入 12mL 硫酸和兩粒玻璃珠。將凱氏燒瓶置于通風(fēng)廚里的電爐上加熱，開始加熱時，先用小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強(qiáng)火力，消化時經(jīng)常轉(zhuǎn)動消化瓶，使全部樣本浸入硫酸內(nèi)，如有黑色油在瓶壁，應(yīng)待燒瓶冷卻后加少量蒸餾水沖洗，再繼續(xù)加熱消化。如有黑炭粒不能全部消化，則待燒瓶冷卻后，補(bǔ)加少量硫酸加熱，直至呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱至消化完畢。,飼料中粗蛋白的測定,8,氨的蒸餾 試樣消煮液冷卻后加入20mL蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL 容量瓶內(nèi)，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，作為試樣分解液。將蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有 20mL 硼酸吸收

4、液和 2 滴混合指示劑的錐形瓶內(nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴、硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液1020mL注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，以防漏氣。蒸餾4min后降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾。,飼料中粗蛋白的測定,9,空白測定 稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按照前面的消化蒸餾方法進(jìn)行空白測定，消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過

5、0.2mL，消耗 0.2mol/L 的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不得超過0.3mL。,飼料中粗蛋白的測定,10,滴定 蒸餾后的吸收液立即用 0.1mol/L 或0.2mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色。同樣滴定試劑空白消化液。,飼料中粗蛋白的測定,11,結(jié)果計算,粗 蛋 白 質(zhì) 含 量（%）= （V-V0 ）N 0.0146.25100 M(V 2V 1) 式中： V滴定樣品吸收液時所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶（mL)； V0 空白測定吸收液所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（mL) ； V1 樣品消化液總的體積（mL）； V2 從100mL消化分解液中吸取的消化液體積（mL)； 0.014氮的毫克當(dāng)量數(shù)； M樣品

6、的質(zhì)量（g）； N鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度,飼料中粗蛋白的測定,12,凱氏定氮儀法,試劑 同凱氏定氮測粗蛋白法 儀器 自動或半自動定氮儀,飼料中粗蛋白的測定,13,操作步驟 試樣的消化 稱取試樣 0.5 1g（含氮量5 80mg），準(zhǔn)確至0.0002g，放入消化管中，加兩片消化片（儀器自備）或6.4g混合指示劑、12mL硫酸，于420在消煮爐上消化1h，取出放涼后加入30mL蒸餾水。,飼料中粗蛋白的測定,14,氮的蒸餾 采用定氮儀，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以 25mL 硼酸為吸收液，加入兩滴混合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消化管中加入 50mL 氫氧化鈉溶

7、液進(jìn)行蒸餾。蒸餾時間以流出的液體呈中性為宜，可用pH試紙測試。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。,飼料中粗蛋白的測定,15,滴定 空白測定 計算 （同國標(biāo)法）,飼料中粗蛋白的測定,16,強(qiáng)堿直接蒸餾法,強(qiáng)堿直接蒸餾法 (Direct Distillation，俗稱DD法)是間接測定飼料中粗蛋白質(zhì)的一種簡便的方法。,飼料中粗蛋白的測定,17,實驗原理,其原理是將粉碎的飼料樣品在強(qiáng)堿中消煮，使飼料中的 - 氨基、酰氨基以及某些特殊基團(tuán)上的氮素在強(qiáng)堿的作用下以氨的形式釋放出來，直接蒸餾到硼酸中，再用鹽酸溶液來滴定，根據(jù)鹽酸消耗量來計算 DD 法所測得的表觀含氮量。但是，由于

8、DD 法測定過程中的氨量的釋放是不定量進(jìn)行的，因此必須根據(jù)經(jīng)典的凱氏定氮法所標(biāo)定的校正數(shù)值，用一定的回歸方程來計算樣品中的粗蛋白質(zhì)的含量。,飼料中粗蛋白的測定,18,試驗步驟,消化 稱量5.000g樣品，粉碎經(jīng)40目篩后放500mL 凱氏燒瓶中，加 50mL 蒸餾水（邊加邊搖），使充分混合。,飼料中粗蛋白的測定,19,蒸餾,向凱氏燒瓶中加入 25mL 10% 氯化鋇溶液，振蕩搖勻，再加120mL 40% 的氫氧化鈉溶液，立即連接蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾。把蒸餾裝置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼酸溶液和 2 滴混合指示劑的錐形瓶中，輕輕搖動凱氏燒瓶使溶液混勻，然后加熱進(jìn)行蒸餾，待蒸餾出的液體

9、體積達(dá)到100mL（總體積達(dá)到150mL）時停止蒸餾。,飼料中粗蛋白的測定,20,滴定,用0.1mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定。,飼料中粗蛋白的測定,21,結(jié)果計算,粗蛋白質(zhì)含量（%）= （V 2V 1）C 0.0146.25 100 M 式中：V2 滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的體積（mL）； V 1滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積（mL）； C鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）； M試樣質(zhì)量（g）； 0.014C(HCl)=1.000mol/L與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 相當(dāng)?shù)?、以g表示氮的質(zhì)量； 樣品中含氮量用以下的回歸方程計算： y=9.2918x-0.2852 式中： x為DD法測定所得到的含

10、氮量； y為樣品的實際含氮量。,飼料中粗蛋白的測定,22,雙氧水法測定,試劑 硫酸：化學(xué)純，含量為98%，無氮； 雙氧水：分析純，含量為30%； 氫氧化鈉：雙氧水：分析純，含量為40%（m/v）； 硼酸：化學(xué)純， 2% 水溶液（m/v）； 混合指示劑；鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液； 鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定液； C（HCl）=0.1mol/L、 8.3mL 鹽酸（分析純）注入 1000mL蒸餾水中； 蔗糖：分析純； 硫酸銨（GB1396）：分析純，干燥。,飼料中粗蛋白的測定,23,儀器,實驗室用樣品粉碎機(jī)或研缽; 分樣篩孔徑 0.45mm（40 目）; 分析天平（感量0.0001g）; 消煮爐或電爐; 10mL、

11、25mL 酸式滴定管；250mL 消化管；150mL ；250mL 錐形瓶 ；定氮儀（以凱氏原理制造的各類型半自動蛋白質(zhì)測定儀）。,飼料中粗蛋白的測定,24,原理,濃硫酸和 30% 濃度的雙氧水都是強(qiáng)氧化劑。飼料中的有機(jī)物接觸到濃硫酸便被脫水炭化。但是在高溫條件下，向未被硫酸完全氧化的飼料中滴加 30% 的雙氧水，會使飼料中的有機(jī)物徹底氧化、分解，放出 CO2 、SO2 ，而釋放出的氨氣則和硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后用半微量凱氏定氮裝置對接收液進(jìn)行蒸餾，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液對接收 定氮裝置對接收液進(jìn)行蒸餾，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液對接收的含量。,飼料中粗蛋白的測定,25,試驗步驟,樣品消化 樣品粉碎后全部通

12、過40目。稱取試樣 0.2 2.0g（含氮量 5 80mg），準(zhǔn)確至0.0002g，放入消化管中，加 10mL 濃硫酸搖勻，管口上放一只小漏斗（在消化過程中起回流作用，以減少硫酸的損失），放在電爐上消煮20min，當(dāng)硫酸大量冒煙、消化液呈醬油色時，將消化管取下稍冷卻（手摸不燙手），向管內(nèi)加雙氧水 10 15 滴，加熱消化。如此反復(fù) 2 3 次，直至管內(nèi)溶液澄清透明為止。取下消化管，冷卻后注入30mL蒸餾水備用。,飼料中粗蛋白的測定,26,氨的蒸餾,采用定氮儀，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以 25mL 硼酸為吸收液，加入兩滴混合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消化管中加入 50mL 氫氧化鈉溶液進(jìn)行蒸餾。蒸餾時間以流出的液體呈中性為宜，可用pH試紙測試。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝