濕熱因素對大鼠胃黏膜水通道蛋白34基因表達(dá)的影響

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減濕熱因素對大鼠胃黏膜水通道蛋白3、4基因表達(dá)的影響(作者：單位：郵編：)作者：韋嵩 勞紹賢 黃志新 劉正 胡斌 王健華【摘要】：目的 探討濕熱因素對大鼠胃黏膜水通道蛋白(AQP)3 4 基因表達(dá)的影響。方法30只大鼠隨機分成3組,造模20 d。對照組 正常喂飼；脾虛組隔日喂飼，非喂飼日灌喂番瀉葉水煎液；模型組20% 蜂蜜水自由飲用，隔日灌服油脂，造模開始后第1620日每日20時 次日8時將大鼠置入人工氣候箱中，造模結(jié)束后，采用FQ-PCR方法測 定各組胃黏膜AQP3 AQP4基因表達(dá)。結(jié)果 模型大鼠在造模過程中出 現(xiàn)濕熱證的特征性表現(xiàn)；模型組 AQP3 AQ

2、P4基因表達(dá)水平高于對照 組、脾虛組(P0.05)。結(jié)論 通過對大鼠施加內(nèi)、外濕因素的造模方法 可復(fù)制出濕熱證的證候特征；AQP3的異常表達(dá)可能是濕熱證的發(fā)生 機制之一。【關(guān)鍵詞】濕熱證水通道蛋白動物模型胃黏膜Abstract : Objective To establish the animal model of damp-heat syndrome (DHS) and explore the expression ofaquaporin (AQP) 3, 4 gene in gastric mucosa. Methods Thirty SDrats were ran domized int

3、o 3 groups and observed for 20 days. Group A (n ormal group, NG) was fed with rout ine method. Group B (Pi deficie ncy syn drome group, PDS) was fed alter natively with routine method and aqua of cassia angustifoliaVahl. GroupC (DHS) was fed with fat, honey liquid and treated with damp-heat en vir o

4、nment. The expressi on of AQP 3, 4 gene in the3 groups were determ inedby fluoresce neequa ntitativepolymerase cha in reacti on (FQ-PCR). Results The symptoms and sig ns in Group C were simiar to the cli nical DHS. Expressi on of AQP3 gene in DHS was statistically significant higher than that in PDS

5、 and NG (P0.05). Con clusi on The method of feedi ng fat and honey under damp-heat environment is effective to copy DHS. Abno rmal expressi on of AQP3 gene maybe one of the DHS pathoge nesis.Key words : damp-heat syndrome ; aquaporin ; animal model ; gastric mucosa通過對模型大鼠施加內(nèi)濕、外濕因素的方法復(fù)制濕熱證動物模型， 模擬出臨床

6、濕熱證的主要證候；通過測定模型大鼠胃黏膜水通道蛋白 (AQP)3、4基因表達(dá)，探討AQP在濕熱證發(fā)病機制中的作用。1實驗材料1.1動物SPF級SD大鼠30只，雌雄各半,體重(180 士 20)g,廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。合格證號：粵檢證字 2004A014號。1.2藥物及試劑番瀉葉100 g,制備成1 g/mL水煎劑,4 C冰箱保存?zhèn)溆?。TRIzol Reagent（美國 Invitrogen 公司）；瓊脂糖凝膠 Agarose（美因 Sigma公司）；Taq DNAPolymerase（廣州中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心）； MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶（廣州中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心）;dNTPs上海

7、華美 生化試劑有限公司）；DEPC美因Sigma公司）；逆轉(zhuǎn)錄buffer（德國 Qiagen公司）；定量PCR buffer試劑盒（美國ABI公司）。1.3儀器LRH-800-GS人工氣候箱為廣東省醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；Y C-DZOZ亞都超聲加濕器為北京亞都科技股份有限公司產(chǎn)品。人工氣候箱溫度設(shè)定 （32 士 2）C ,相對濕度設(shè)定95% RCF測定主要設(shè)備：PE7000全自動熒 光定量PCF儀（美國Perkin Elmer公司）；PE9600PC基因擴(kuò)增儀（美 國 Perkin Elmer 公司）；UNIVERSAL 16R低溫離心機（美國 Hettich 公司）；PCA-300多用垂直電泳儀

8、（美國BIO-RAD公司）；UV mini1240 紫外分光光度儀（日本SHIMADZ公司） ； ABI 3900臺式高通量DNA合 成儀（美國Perkin Elmer 公司）。2實驗方法2.1分組SD大鼠30只，雌雄各半，分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，隨機分為3組, 即正常對照組（對照組）、脾虛證組（脾虛組）、濕熱證組（模型組）,每 組10只。2.2造模對照組正常喂飼 20 d ;脾虛組隔日喂飼，非喂飼日灌喂番瀉葉水 煎液1 mL/100 g體重，喂飼日飼料量不限，造模20 d。模型組20%蜂 蜜水自由飲用，隔日灌服油脂1 g/100 g體重，造模開始后第1620 日每日20時次日8時將大鼠置入人工氣候箱中，造模20 d。2.3標(biāo)本采集處理實驗結(jié)束,禁食12 h后以烏拉坦腹腔注射麻醉，頸椎脫臼處死， 心臟采血,剖腹,沿胃大彎側(cè)剪開鼠胃，取胃體、胃竇組織黏膜各約0.5 cmx 0.5 cm二塊,-80 C冰箱保存。2.4觀察指標(biāo)及檢測方法觀察大鼠外觀、精神狀態(tài)及食量、飲水量、體重、糞便，每日測大鼠體重、進(jìn)食量、飲水量；參考文獻(xiàn)1方法,采用熒光