染色體核型分析PPT課件(實(shí)用課件)

1、染色體核型分析PPT課件(實(shí)用課件) 一、名詞解釋一、名詞解釋 二、染色體標(biāo)本制備二、染色體標(biāo)本制備 三、染色體核型分析三、染色體核型分析 實(shí)驗(yàn)耗材 前期處理 實(shí)驗(yàn)步驟 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)、合格指標(biāo) 染色體核型排列 核型檢測的可重復(fù)性 2 一、名詞解釋 核型核型 分裂相分裂相 一個(gè)體細(xì)胞中的全部染色體，按其大小、形態(tài)特征順序排列所構(gòu) 成的圖像。 小鼠： 40，XY 、 40，XX 人類： 46，XY 、 46，XX 細(xì)胞分裂過程中每個(gè)時(shí)期的細(xì)胞形態(tài)特征，包括細(xì)胞的總體形狀和遺 傳物質(zhì)的變化。 3 一、名詞解釋 數(shù)量變異 （性染色體丟失/增加、近端著絲粒染色體 三體） （中期）分裂相（中

2、期）分裂相 核型核型 結(jié)構(gòu)變異 （缺失、重復(fù)、倒位、易位） 4 二、染色體標(biāo)本制備 實(shí)驗(yàn)耗材實(shí)驗(yàn)耗材 儀器設(shè)備： 超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、離心機(jī)、光學(xué)顯微鏡、刻度離 心管、乳頭吸管、棕色試劑瓶、載玻片、吹風(fēng)機(jī)、玻片架、染色缸 主要試劑： 秋水仙素、低滲液、卡諾氏固定液、吉姆薩染液、胰酶、1N HCl、1N NaOH、MEF培養(yǎng)基、PBS 5 二、染色體標(biāo)本制備 前期處理前期處理 樣品要求：對(duì)數(shù)期生長，狀態(tài)良 好，緊密度高，折光性好，細(xì)胞 量T25 / 60 mm平皿 差速貼壁法去除MEF（ KSR培養(yǎng) 體系除外） 終止培養(yǎng)前12小時(shí)，加入秋水仙素秋水仙素（100ug/ml），最終濃

3、度為 0.10.2ug/ml。 作用：破壞紡錘體 防護(hù)：有劇毒、無揮發(fā) 性 因素：時(shí)間、濃度 6 二、染色體標(biāo)本制備 固定固定 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 7 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 消化并收集細(xì)胞至離心管，吹打成單細(xì)胞懸液， 250 g，5 min離心，棄上清 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 8 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 加入37預(yù)熱的低滲液（低滲液（0.075 mol/L）5 ml，吹打 至均勻，37水浴15-20 min。

4、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 9 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 加入37預(yù)熱的低滲液低滲液（0.075 mol/L）5 ml，吹打 至均勻，37水浴15-20 min。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 配制： 0.075 mol/L KCl溶液 作用：低滲作用 因素：時(shí)間、溫度、濃度 10 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 離心棄上清，將細(xì)胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地 重懸細(xì)胞。沿管壁緩慢加入固定液固定液0.5-1.0 mL，邊滴加 邊震蕩均勻，靜置5 min后離心棄上清。 11 二

5、、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 離心棄上清，將細(xì)胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地 重懸細(xì)胞。沿管壁緩慢加入固定液固定液0.5-1.0 mL，邊滴加 邊震蕩均勻，靜置5 min后離心棄上清。 配制：甲醇：冰乙酸= 3：1， 現(xiàn)用現(xiàn)配。 作用：固定并維持染色體結(jié)構(gòu) 的完整性 防護(hù)：甲醇毒性， 冰乙酸刺激性和腐蝕性 12 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 （1）加入3ml固定液固定液，靜置30min，離心棄上清； （2）再次加入3ml固定液固定液，吹打均

6、勻并靜置30min 13 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 離心棄上清液，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量情況，加入12 mL固定液， 吹打細(xì)胞制成懸液，懸液呈微白色時(shí)為最佳。 14 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 用滴管吸取細(xì)胞懸液，高空滴在冰凍玻片冰凍玻片上，立即在酒 精燈的火焰下過火幾次，置80烤箱中烤片2h。 15 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 用滴管吸取細(xì)胞懸液，高空滴在冰凍玻片

7、冰凍玻片上，立即在酒 精燈的火焰下過火幾次，置80烤箱中烤片2h。 要求：潔凈、冰凍 處理：逐片清洗（洗潔精超 聲波自來水純水），95% 乙醇浸泡24 h，純水逐片刷洗， 放置于裝有純水的器皿中，4 保存。 16 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 預(yù)熱胰蛋白酶胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。 清水沖洗染液，用吹風(fēng)機(jī)吹干。 17 二、染色體標(biāo)本制備 細(xì)胞收獲細(xì)胞收獲 制片制片 固定固定 預(yù)固定預(yù)固定 低滲處理低滲處理 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 預(yù)熱胰蛋白酶胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。

8、 清水沖洗染液，用吹風(fēng)機(jī)吹干。 要求：0.25%， pH6.87.2 作用：去除染色 體上的蛋白質(zhì)， 便于染色。 配制： Giemsa原 液：磷酸緩沖液 （pH 7.4）= 1：9， 現(xiàn)用現(xiàn)配。 18 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 玻片顏色 藍(lán)紫色 玫紅色 著色淺 解決方案 配制新的染液； 適當(dāng)提高胰酶消化玻片的時(shí)間。 19 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 細(xì)胞密度 過密 適中 過稀 解決方案 制備玻片時(shí)，對(duì)每一個(gè)樣品都先進(jìn)行試片，并在鏡下 觀察細(xì)胞密度，從而調(diào)整懸液密度。 20 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 分裂相密度 足

9、夠 稀少 解決方案適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例；制備較多的玻片 21 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 分裂相形態(tài)-緊密度 過密 適中 過散 解決方案 過密：適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例； 過散：適當(dāng)降低固定液中冰醋酸比例。 22 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 分裂相形態(tài) 過密 適中 過散 解決方案 過密：適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度； 過散：適當(dāng)降低固定液中冰醋酸比例，減小滴片高度。 23 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 分裂相形態(tài) 解決方案 盡量將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液； 滴片時(shí)勿重復(fù)滴加同一區(qū)域。 重疊 24 三、染色體核型分析 玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)玻片標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià) 染色體形態(tài) 適中 短小 過長 扭曲交聯(lián) 消化過度 25 三、染色體核型分析 計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn) 合格指標(biāo)合格指標(biāo) 分裂相需完整獨(dú)立，染色體不過于松散，周圍無其他距離很近的分裂 相。 染色體形態(tài)適中，不過度短小或纖長，染色體彼此間無交聯(lián)纏繞或者 交聯(lián)的染色體能明確的區(qū)分。 染色體G顯帶普遍較清晰，質(zhì)檢人員能夠精確的判斷核型位置。 計(jì)數(shù)30個(gè)分裂相，正常比例50% 數(shù)量是否異常 暫不涉及核型排列 結(jié)構(gòu)是否異常 26 三、染色體核型分析 染