中樞神經(jīng)興奮藥LD50的篩選

1、 中樞神經(jīng)興奮藥LD50的篩選 二級學(xué)院藥科學(xué)院專 業(yè)藥學(xué)（醫(yī)院藥學(xué)方向）班 級2010（1）姓 名黃妙梅學(xué) 號 2012年11月 中樞神經(jīng)興奮藥LD50的篩選【摘要】：通過本實驗，讓我們自主完成從選題，實驗設(shè)計，親自動手操作到結(jié)果分析和完成論文，使學(xué)到的基礎(chǔ)理論知識與實踐的感性認(rèn)識更好地結(jié)合，培養(yǎng)和提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題、提出問題、分析問題和解決問題的能力，并且有助于提高學(xué)生的動手能力、實踐能力和團隊能力。從未知藥物篩選出具有中樞神經(jīng)興奮作用的目標(biāo)藥物，并測定其LD50，以評價該藥物的安全性。方法 腹腔注射未知藥物觀察小鼠反應(yīng)，初篩選出中樞神經(jīng)藥物并探索0和100動物死亡范圍。將實驗小鼠隨機分為6

2、組，每組8只，分別腹腔注射目標(biāo)藥物不同濃度的藥物，觀察小鼠反應(yīng)，計算小鼠死亡率。采用Biss法計算目標(biāo)藥物的LD50。 結(jié)果 在第一次預(yù)實驗中確定我們組興奮藥的最大劑量750 mg/kg和最小劑量250 mg/kg，根據(jù)正式實驗得到得數(shù)據(jù)經(jīng)計算，得出我們組受試藥品的LD50為362.0408mgkg結(jié)論 該中樞神經(jīng)興奮藥的LD50為362.0408mgkg 【關(guān)鍵詞】LD50 中樞興奮藥 死亡率1. 前言 作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要是影響遞質(zhì)和受體，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)不但神經(jīng)遞質(zhì)種類較多,而且神經(jīng)激素及神經(jīng)調(diào)質(zhì)等亦起重要作用。目前作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物種類很多，如抗焦慮藥、抗抑郁藥、催眠藥、抗

3、震顫麻痹藥和抗精神失常藥等。這類藥物用藥時間長，副作用出現(xiàn)頻率高，有可能出現(xiàn)不可逆的后遺癥；有的藥物過量服用，還能引起致死性中毒。對此必須高度重視。對制藥行業(yè)來說，年銷售規(guī)模達到650億美元的作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）藥物或許是最具挑戰(zhàn)性，同時又是回報最豐厚的市場之一?？焖僭龅腃NS藥物市場中，仍有許多尚未得到滿足的臨床需求以及新的治療方法，對那些已經(jīng)積極介入或正在考慮介入該市場的制藥公司來說，CNS藥物市場無疑是一塊極具吸引力的蛋糕。1近年來,研究人員針對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的特點開發(fā)了多種療效高、使用方便的藥物新制劑,主要劑型有口服制劑(包括口服緩、控釋制劑)、長效注射劑、透皮控釋貼片和直腸

4、用凝膠等。專業(yè)人士分析，抑郁是最常見的精神疾病，據(jù)統(tǒng)計，全球約有1.2億人罹患此病，世界衛(wèi)生組織（WHO）預(yù)測，到2020年，抑郁癥將成為人們失去生活能力的一個主要原因。在CNS藥物市場中最大一部分是抑郁癥藥物市場。2.材料 器材：鼠籠、電子天平、注射器、針頭、小燒杯、苦味酸（標(biāo)記用）藥品：中樞性藥物（包括興奮藥和抑制藥）、生理鹽水、蒸餾水動物：1822g健康的小鼠（預(yù)實驗18只，正式實驗50只），雌雄各半，實驗前禁食12 小時，不禁水。3.方法一、預(yù)實驗：確定正式實驗做的藥物，探索該興奮藥物的0%和100%有效動物反應(yīng)的劑量范圍，以便正式實驗時確定各組劑量。實驗過程： 1）同學(xué)們事先想好實驗

5、方案，如何測定藥物L(fēng)D50。實驗課上由老師講解，布置任務(wù)，如何篩選藥物等事項；2）開始實驗，有三組不同編號的試樣藥物，通過現(xiàn)象自己做判定得結(jié)果。取小鼠18只，到動物電子天平分別稱其體重，標(biāo)記并且記錄各自的重量；3）從18只老鼠中隨機選取3只小鼠，用于母液的篩選，計算好劑量，分別注射三組試樣藥物，觀察現(xiàn)象并做好記錄，判定哪個編號是何種藥物，從中選擇一種藥物作為我們組正式實驗時要做的。經(jīng)討論，確定做中樞興奮藥；4）剩下的15小鼠，分為5組，每組3只小鼠，進行興奮藥物的研究。母液為750mg/kg，等比進行稀釋，稀釋后的濃度分別是第一組：750 mgkg，第二組：375 mgkg,第三組：250 m

6、gkg,第四組：185 mgkg,第五組：150 mgkg，5）稀釋溶液：第一組：1.2ml母液第二組：0.6ml母液+0.6ml蒸餾水第三組：0.4ml母液+0. 8ml蒸餾水第四組：0.3ml母液+0.9ml蒸餾水第五組：0.24ml母液+0.96ml蒸餾水6）根據(jù)小鼠的體重以0.1ml/10g的藥劑量腹腔注射藥物的不同濃度，觀察一段時間內(nèi)小鼠出現(xiàn)的癥狀，并做好記錄各組出現(xiàn)死亡的鼠數(shù)；7）通過實驗現(xiàn)象觀察，得出結(jié)果，找到了我們組興奮藥能引起小鼠的0%和100有效率劑量及其所在的范圍。二、正式實驗 ：按預(yù)計實驗的實施方法進行，完成所選興奮藥物的LD50的測定。實驗劑量的計算：r=(Dmin/

7、Dmax)(1/(n-1)根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，Dmax=750 mg/kg及Dmin=250 mgkg，設(shè)正式實驗的劑量組數(shù)n=6，劑量公比r=0.8027，則各組劑量為：1)750 mgkg2) 750*0.8027 =602 mgkg3) 750 mgkg *0.80272=483mgkg4) 750 mgkg *0.80273=388 mgkg5) 750 mgk*0.80274=311 mgkg6) 750 mgkg*0.80275=250 mgkg實驗過程：1）取小鼠50只，稱重，標(biāo)記，隨機分為6組，使不同性別和體重能均勻分配于各組，每組8只，進行下一步實驗；2 )稀釋藥物：各組所需的體

8、積（ml)為 第一組 第二組 第三組 第四組 第五組 第六組 33 r 3 r2 3r3 3 r4 3 r5 母液總體積（V）=3x(1+r+r2+r3+r4+r5)總藥量（M)=母液總體積（V）x Dmax/(10ml/kg)計算出V=11.9ml M =892.5mg取藥量892.5mg 用生理鹽水稀釋至 11.9ml , 用移液管精密吸取各組所需的母液，加生理鹽水稀釋至3ml,即為各組試驗藥液 3）小鼠注射體積按0.1ml10g進行腹腔注射，觀察各組小鼠的變化并記錄；三、數(shù)據(jù)處理根據(jù)實驗所得的數(shù)據(jù) ，采用Biss法計算目標(biāo)藥物的LD504.結(jié)果表1 預(yù)實驗篩選藥物情況組別 編號 現(xiàn)象 藥

9、物1 4 小鼠變得很暴躁，上下跳動，異常活潑，呼吸加快，最后死亡 興奮藥2 5 小鼠變得安靜嗜睡，呼吸微弱，20min后死亡 抑制藥3 6 沒出現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象 生理鹽水 表2 預(yù)實驗的實驗結(jié)果組別 劑量（mgkg） 現(xiàn)象 死亡率（）1750375250187150三只小鼠全部死亡兩只小鼠強直跌倒，一只小鼠死亡三只小鼠都強直跌倒，都有呼吸三只小鼠都強直陣攣三只小鼠都沒有任何變化100330002345表3 正式實驗的實驗結(jié)果組別劑量（mgkg）現(xiàn)象死亡小老鼠數(shù)1234567506024833883112508只小老鼠全部死亡7只小老鼠只， 1只存活5只小老鼠死亡，3只存活4只小老鼠死亡，4只存活

10、2只小老鼠死亡，6只存活0只小老鼠死亡, 8只存活875420 表4 中樞神經(jīng)興奮藥LD50的篩選組別劑量（mg/kg）總動物死亡動物數(shù)死亡率（%）劑量對數(shù)概率單位（P+5）175088100.02.87532.96826028787.52.780652.6845.32043888450.02.5895.00053118225.02.4934.33062508002.3980.003回歸方程為：Y=-125.6651+51.0658X;(r=0.7628)a=0.01時，查得的r為：0.9170（其中Y為概率單位加5后的值，X為劑量的對數(shù)logx）所以LD50=362

11、.0408 mgkg置信系數(shù)a=0.05時的置信區(qū)間為：226.5267LD50578.6228,0.20365.討論這是我們第一次做自主設(shè)計性實驗，在這次實驗中，鍛煉了我的綜合實驗技能，很大程度上提高了我的動手能力和思考能力。 本實驗是作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的設(shè)計性實驗，我們首先要做的就是了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的特點。作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物從作用機制上來看，絕大多數(shù)藥物的作用方式是通過影響突觸化學(xué)傳遞的某一環(huán)節(jié)（如影響遞質(zhì)的生成、貯存、釋放和滅活的過程；激動或阻斷受體）而產(chǎn)生藥理效應(yīng)；尚有少數(shù)藥物是通過一般地影響神經(jīng)細(xì)胞的能量代謝或膜穩(wěn)定性而產(chǎn)生作用。作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物產(chǎn)生中樞興奮效應(yīng)

12、時的表現(xiàn)為欣快、失眠、不安、幻覺、妄想、躁狂、驚厥等；出現(xiàn)中樞抑制效應(yīng)時則表現(xiàn)為鎮(zhèn)靜、抑郁、睡眠、昏迷等。 預(yù)實驗時，觀察三組試樣藥物注射完后小鼠的表現(xiàn)，第一只小鼠變得很暴躁，上下跳動，異?；顫姡粑涌?，最后死亡。第二只小鼠變得安靜嗜睡，呼吸微弱，20min后死亡。第三只小鼠沒出現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象。由此推斷三種藥物分別是興奮藥，抑制藥，生理鹽水。 我們都知道，藥物劑量是影響藥物效應(yīng)的重要因素。不同的劑量可以激活劑量相關(guān)靶點,所以同一種藥物的多種作用及其不良反應(yīng)與劑量有著密切的關(guān)系。藥物劑量與藥物發(fā)現(xiàn)存在著相互聯(lián)系。一種藥物在使用過程中,由于劑量的不同,會出現(xiàn)新的藥物效應(yīng),有利于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點,加快藥物發(fā)現(xiàn)的速度。藥物發(fā)現(xiàn)的研究方法,尤其是涉及藥物安全性評價的方法,直接影響