參桂膠囊防治心功能不全研究報告123

1、參桂膠囊防治心功能不全研究報告研究單位：中國中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院委托單位：（加拿大）上海玉丹藥業(yè)公司參桂膠囊對大鼠實驗性心肌梗死后心功能影響的研究劉穎,徐慧,繆宇,張穎,殷惠軍,蔣躍絨(中國中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院心血管病研究室，北京，100091)1.材料與方法 1.1 實驗材料1.1.1實驗動物：選用健康wistar大鼠(180220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動物研究所提供，合格證號：京動許字，2000-013-058。1.1.2實驗藥物：參桂膠囊由（加拿大）上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號：20030801，規(guī)格：0.3g/粒。1.2 實驗方法1.2.1 動物模型建立與分組：大鼠乙醚麻醉，然后

2、經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動脈前降支(于分支起點處約1-2mm)造成ami模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動脈外，其余操作與ami模型組動物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，st段弓背抬高示ami形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組：即正常對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；模型對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；假手術(shù)組10只：常規(guī)飼養(yǎng)；陽性藥開搏通對照組10只，5mg/kg/d開搏通溶液；參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/kg/d；參桂膠囊中劑

3、量組10只，參桂膠囊0.9g/kg/d；參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2血液動力學(xué)及心功能的測定：連續(xù)灌胃8周后，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯溶液(0.07ml/kg)進(jìn)行麻醉，分離右頸總動脈，插入充滿37肝素生理鹽水溶液的導(dǎo)管，用nihon kohoen rm06018型多導(dǎo)生理記錄儀描記動脈收縮壓(sbp)及舒張壓(dbp)。將導(dǎo)管進(jìn)一步插入左心室，記錄左室收縮末壓(lvesp)和左室舒張末壓(lvedp)，觀察左室心臟功能的改變。1.2.3 左室重量及心臟指數(shù)的測定：多導(dǎo)生理記錄儀描記各項參數(shù)完畢，立即開胸取出心臟稱重

4、。用電子天平稱心臟重量 及左心室重量，并計算心臟指數(shù)(體重與心臟重量之比，mg/g)。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：所有計量資料以均數(shù)!標(biāo)準(zhǔn)差()表示，用phs軟件進(jìn)行f檢驗。2 結(jié)果2.1 參桂膠囊對大鼠左室重量及與心臟指數(shù)的影響手術(shù)前及手術(shù)后8周后各組大鼠體重均無明顯差別(p0.05)，模型組大鼠左室重量及心臟指數(shù)(心臟重mg/體重g)大于假手術(shù)組(p0.01)；參桂膠囊大、中劑量組及開搏通組左室重量和心臟指數(shù)較模型組明顯減小(p0.05和p0.01)。結(jié)果見表1。表1. 參桂膠囊對大鼠左室重量及與心臟指數(shù)的影響 ()組 別 劑 量 體 重(g) 左室重量(g) 心臟指數(shù) (mg/g)空白對照組 1

5、0ml/kg 338.4217.71 0.810.11* 2.800.21*假手術(shù)組 10ml/kg 333.2314.55 0.820.09* 2.810.19*模型組 10ml/kg 330.9016.08 1.140.20 3.000.22參桂膠囊組 30g生藥/kg 345.5713.66 0.860.15* 2.800.17*15g生藥/kg 346.6920.52 0.910.10* 2.900.22* 7.5g生藥/kg 331.7119.23 1.030.12 3.010.25開搏通組 5mg/kg 349.1920.31 0.840.13* 2.490.23* 注：與模型組相

6、比，*p0.05，*p0.01 2.2 參桂膠囊對ami大鼠左室功能的影響 與模型組相比較，參桂膠囊大、中劑量組和開搏通組lvedp明顯降低(p0.05和 p0.01)；參桂膠囊大劑量組和開搏通組lvesp和模型組相比亦有顯著增加(p0.01), 參桂膠囊各組+dp/dtmax與模型組相對比較均有增加（p0.01,p0.05）。結(jié)果見表3。 表2. 參桂膠囊對大鼠左室心功能的影響 (xs)組 別 劑 量 sbp dbp lvesp lvedp +dp/dtmax kpa kpa kpa kpa kpa/s空白對照組 10ml/kg 17.842.41 9.99 2.09* 19.111.60*

7、 0.300.19* 559.7669.69* 假手術(shù)組 10ml/kg 18.094.02* 10.251.34* 18.081.58* 0.390.28* 556.2860.75* 模型組 10ml/kg 15.791.93 9.091.46 14.091.36 1.240.57 311.1045.97參桂膠囊組 30g生藥/kg 18.101.37 9.591.64 17.291.72* 0.600.47* 509.7873.45* 15g生藥/kg 17.191.85 10.191.89 15.901.49 0.860.54* 459.3654.09* 7.5g生藥/kg 16.532

8、.56 10.011.53 15.871.78 1.090.52 422.5247.52*開搏通組 5mg/kg 15.662.84 8.891.36 16.551.73* 0.460.31* 469.5445.38* 注: 與模型組比較: *p0.05 , * * p0.01 3.結(jié)論31參桂膠囊對心肌梗死范圍的影響：參桂膠囊大、中劑量組及開搏通組左室重量和心臟指數(shù)較模型組明顯減小，表明參桂膠囊有較好的抑制ami大鼠心肌代償性肥厚增生的作用。32參桂膠囊對血液動力學(xué)的影響：lvedp、lvesp和+dp/dtmax是反映心臟收縮和舒張功能的敏感參數(shù)，是判斷ami后患者預(yù)后的重要指標(biāo)。結(jié)果表明

9、，參桂膠囊和開博通皆有一定的降低ami大鼠lvedp和升高lvesp、+dp/dtmax的作用。說明參桂膠囊的益氣通陽、活血化瘀作用可干預(yù)ami大鼠心室重構(gòu)的病理過程，防止ami后心室的進(jìn)一步擴(kuò)大和心力衰竭的發(fā)生。參桂膠囊對心肌梗死后心功能不全大鼠et、ang的影響的研究劉穎，張穎，殷惠軍，蔣躍絨（中國中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院心血管病研究室，北京，100091）1.材料與方法 1.1 實驗材料1.1.1實驗動物：選用健康wistar大鼠(180220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動物研究所提供，合格證號：京動許字，2000-013-058。1.1.2實驗藥物：參桂膠囊由（加拿大）上海玉丹藥業(yè)公司提供

10、，產(chǎn)品批號：20030801，規(guī)格：0.3g/粒。1.2 實驗方法1.2.1 動物模型建立與分組：大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動脈前降支(于分支起點處約1-2mm)造成ami模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動脈外，其余操作與ami模型組動物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，st段弓背抬高示ami形成。造模成功后，大鼠隨機(jī)分為7組：即正常對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；模型對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；假手術(shù)組10只：常規(guī)飼養(yǎng)；陽

11、性藥開搏通對照組10只，5mg/kg/d開搏通溶液；參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/kg/d；參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/kg/d；參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周1.2.2內(nèi)皮素(et)、ang的測量： 經(jīng)右總頸動脈取血，用放射免疫法檢測et、ang含量，試劑藥盒由中國人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：所有計量資料以均數(shù)!標(biāo)準(zhǔn)差()表示，用phs軟件進(jìn)行f檢驗。2結(jié)果：21 參桂膠囊對ami大鼠血漿et、ang含量的影響手術(shù)后8周，模型組大鼠血漿et、ang含量明顯上升，與空白對照組和假

12、手術(shù)組比較差異顯著(p0.01)，參桂膠囊大、中劑量組和開搏通組血漿et含量皆較模型組明顯減少(p0.01)。參桂膠囊大劑量組和開搏通組血漿ang含量亦較模型組明顯減少(p0.05和p0.01)。結(jié)果見表1： 表1. 參桂膠囊對大鼠et、ang的影響 ()組 別 劑 量 et(pg/ml) ang(pg/ml)空白對照組 10ml/kg 283.3456.07* 690.0330.91 假手術(shù)組 10ml/kg 309.0945.61 709.9043.33 模型組 10ml/kg 329.6766.10 692.2333.65 參桂膠囊組 30g生藥/kg 244.4435.21* 595.

13、9230.65* 15g生藥/kg 263.7043.26* 629.4738.58 75g生藥/kg 295.1134.51 690.3940.12開搏通組 5mg/kg 231.4141.72* 567.2034.66* 注：與模型組相比，*p0.05，*p0.01 3討論：是引起心肌缺血壞死重要的細(xì)胞因子之一。缺血、缺氧、血管剪切力、凝血酶原激活、轉(zhuǎn)化生長因子、腎上腺素和血管緊張素等理化因子作用于局部血管,能促進(jìn)釋放。濃度的增高一方面使心肌耗氧量增加，另一方面使冠脈痙攣，血流減少，心肌缺血缺氧加劇。缺血導(dǎo)致釋放，釋放又進(jìn)一步加重缺血損傷1。ang可以促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、促進(jìn)原癌基因表達(dá)，是一

14、種高效的生長因子，研究發(fā)現(xiàn)心血管組織ang參與心衰等所致心肌細(xì)胞肥大的發(fā)生2。本項研究通過結(jié)扎wistar大鼠冠狀動脈左前降支復(fù)制心功能不全模型，觀察了參桂膠囊對ami后心功能不全大鼠血清et 、ang的影響，實驗表明，ami后大鼠循環(huán)ang、et水平上升，參桂膠囊可明顯降低血清et、ang水平，說明改藥能夠減弱循環(huán)及局部ras對ami后vr的刺激作用；降低循環(huán)中et含量，減少其促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大的作用；增加anp的表達(dá)從而抑制心室重構(gòu)的發(fā)展。參考文獻(xiàn)：1.breich ea,et al.exercise induced cardiac hypertrophy:a correlation of

15、blood flow and microvasculature.j appi physiol 1998;60:1259.2.george kp,et al.the athletic heart syndrome.sports medicine.2001;11:300.參桂膠囊對心肌梗死后心功能不全大鼠心肌細(xì)胞膜na+ -k+atpase、ca2+ -mg2+atpase活性及膜脂質(zhì)過氧化作用的影響劉穎，張穎，殷惠軍，蔣躍絨（中國中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院心血管病研究室，北京，100091） 1.材料與方法 1.1 實驗材料1.1.1實驗動物：選用健康wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由

16、中國科學(xué)院動物研究所提供，合格證號：京動許字，2000-013-058。1.1.2實驗藥物：參桂膠囊由（加拿大）上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號：20030801，規(guī)格：0.3g/粒。1.2 實驗方法1.2.1 動物模型建立與分組：大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動脈前降支(于分支起點處約1-2mm)造成ami模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動脈外，其余操作與ami模型組動物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，st段弓背抬

17、高示ami形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組：即正常對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；模型對照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；假手術(shù)組10只：常規(guī)飼養(yǎng)；陽性藥開搏通對照組10只，5mg/kg/d開搏通溶液；參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/kg/d；參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/kg/d；參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2取材20%氨基甲酸乙酯麻醉大鼠,仰臥固定，0.9%鹽水心臟灌流至流出液肉眼為清液，迅速截取心臟鹽水沖洗，迅速截取左室游離壁和心尖部，放入凍存管內(nèi)，置入液氮內(nèi)保存，備用。1.2.3心肌線粒體制備稱取大鼠左心室心肌0

18、.5g，用tris-hcl緩沖液（20mmol-，ph=7.0）制成10%的組織勻漿，低溫高速離心10min（8000min-）。取上清液再離心15min（14000min-），粗線粒體沉淀,重復(fù)超速離心次，得到較純線粒體沉淀。以lowrry法進(jìn)行蛋白定量。1.2.4心肌線粒體酶活性的測定取少量線粒體沉淀用于測定na+ -k+atpase、ca2+ -mg2+atpase活性，按試劑盒說明進(jìn)行。1.2.5心肌線粒體鈉、鈣、鎂含量測定取少量線粒體沉淀用硝酸消化后，用原子吸收分光光度儀測定其鈉、鈣、鎂含量。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：所有計量資料以均數(shù)!標(biāo)準(zhǔn)差()表示，用phs軟件進(jìn)行f檢驗。2.結(jié)果：2

19、1參桂膠囊對心功能不全大鼠心肌細(xì)胞膜na+ -k+atpase、ca2+ -mg2+atpase活性及膜含量的影響，見表1。表1. 各組大鼠心肌細(xì)胞膜na+ -k+atpase、ca2+ -mg2+atpase活性及膜含量 ()組 別 n 劑 量 ca2+ -mg2+atpase na+ -k+atpase （ mmol.g-1pro-1） （mol-1pro） （mol-1pro）空白對照組 10 10ml/kg 36.323.53* 28.254.12* 5.310.43*假手術(shù)組 8 10ml/kg 34.513.35* 27.244.01* 5.790.37*模型組 7 10ml/kg

20、 23 .333. 61 23. 354 .31 9. 030. 53參桂膠囊組 7 30g生藥/kg 30. 683. 45* 25.833.57* 7.530.52*7 15g生藥/kg 29. 663. 37 * 24.133.34 7.460.52* 7 7.5g生藥/kg 26.483.31 * 23.403.25 8.690.74開搏通組 8 5mg/kg 32.584 .13 * 26.233 73* 8.250.41* 注：與模型組相比，*p0.05，*p0.01 22參桂膠囊對心功能不全大鼠心肌線粒體ca2+ 、na+ 、mg2+含量的影響，見表2。表2 各組大鼠心肌線粒體c

21、a2+ 、na+ 、mg2+含量()組 別 n 劑 量 ca2+ na+ mg2+ （gmg-1） （gmg-1） （gmg-1）空白對照組 10 10ml/kg 5.281.25* 21.844.25* 17.383.35*假手術(shù)組 8 10ml/kg 5.391.26* 21.014.33* 17.763.38*模型組 7 10ml/kg 6.770.55 29.575.86 11.852.68參桂膠囊組 7 30g生藥/kg 5.910.96* 25.264.36* 15.594.19*7 15g生藥/kg 5.910.95* 25.774.33* 15.374.23 * 7 7.5g生

22、藥/kg 6.150.93 26.264.56* 13.954.21*開搏通組 8 5mg/kg 5.350.87* 23.293.83* 16.233.79*注：與模型組相比，*p0.05，*p0.05，*p0.0522參桂膠囊對心功能不全大鼠心肌組織乳酸（ld）代謝的影響，見表1。表2. 各組大鼠心肌組織ld 含量 ()組 別 n 劑 量 ld含量（mmolg-1prot） 空白對照組 10 10ml/kg 0.1280.025* 假手術(shù)組 8 10ml/kg 0.1330.027* #模型組 7 10ml/kg 0.8440.051參桂膠囊組 7 30g生藥/kg 0.2810.035*

23、 #7 15g生藥/kg 0.3070.039* # 7 7.5g生藥/kg 0.3890.039* #開搏通組 8 5mg/kg 0.2920.031* #注：與模型組比* p0.05，*p0.01；與正常組比# p0.053.討論：能量代謝是心肌各種代謝中至關(guān)重要的代謝過程，心臟許多重要活動，如：機(jī)械活動、電活動等都有賴于不斷的能量供應(yīng)。一旦發(fā)生心肌缺血，心肌最重要、最顯著的代謝變化也是能量代謝。能量供應(yīng)不足是心肌缺血引起的心源性休克、心力衰竭等的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。因此，改善能量代謝是心肌缺血防治的重要環(huán)節(jié)之一。缺血涉及的肌纖維收縮性降低，部分是由于心肌組織酸中毒，此外酸中毒又可直接損害心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，因此，改善心肌組織酸中毒也是防治心功能不全的措施之一。本研究結(jié)果