醫(yī)學(xué)交流課件：中醫(yī)藥防治動脈粥樣硬化的系列研究

1、中醫(yī)藥防治動脈粥樣硬化的系列研究中醫(yī)藥防治動脈粥樣硬化的系列研究 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 一、動物模型一、動物模型 二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容 三、研究方法三、研究方法 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 五、展望前景五、展望前景 前 言 v動脈粥樣硬化（動脈粥樣硬化（AS）是主要發(fā)生在全身大、中彈力）是主要發(fā)生在全身大、中彈力 血管處的慢性病變（粥樣斑塊）。血管處的慢性病變（粥樣斑塊）。 vAS與多種因素密切相關(guān)，其中脂質(zhì)代謝異常、血管與多種因素密切相關(guān)，其中脂質(zhì)代謝異常、血管 內(nèi)皮損傷、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、病理性血管生成內(nèi)皮損傷、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、病理性血管生成 都是誘發(fā)都是誘發(fā)AS的中心環(huán)節(jié)。的中心環(huán)節(jié)

2、。 v血液流變學(xué)異常、血小板活化及血管內(nèi)皮損傷是血液流變學(xué)異常、血小板活化及血管內(nèi)皮損傷是AS 血的重要生物學(xué)表現(xiàn)。血的重要生物學(xué)表現(xiàn)。 vASAS斑塊是痰濁與血瘀凝結(jié)的結(jié)果。斑塊是痰濁與血瘀凝結(jié)的結(jié)果。 一、動脈粥樣硬化斑塊動物模型一、動脈粥樣硬化斑塊動物模型 1.國家有關(guān)醫(yī)學(xué)實驗動物管理的有關(guān)法規(guī)是證候模國家有關(guān)醫(yī)學(xué)實驗動物管理的有關(guān)法規(guī)是證候模 型研究中動物選擇的基本依據(jù)。型研究中動物選擇的基本依據(jù)。 v現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物實驗學(xué)有關(guān)從動物生理特性，研究現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物實驗學(xué)有關(guān)從動物生理特性，研究 指標(biāo)，實驗技術(shù)操作，自然發(fā)病等方面選擇動物指標(biāo)，實驗技術(shù)操作，自然發(fā)病等方面選擇動物 的原理為證候模

3、型研究中動物的選擇所遵循。的原理為證候模型研究中動物的選擇所遵循。 v實驗動物在遺傳、微生物質(zhì)量控制方面存在著單實驗動物在遺傳、微生物質(zhì)量控制方面存在著單 純性與代表性的基本矛盾，即動物的品質(zhì)越高，純性與代表性的基本矛盾，即動物的品質(zhì)越高， 實驗結(jié)果就越均一，但其代表性也越弱。實驗結(jié)果就越均一，但其代表性也越弱。 v從作為人類模型這一本質(zhì)屬性來說，實驗動物質(zhì)從作為人類模型這一本質(zhì)屬性來說，實驗動物質(zhì) 量的首要衡量標(biāo)準(zhǔn)是與人類的相似性量的首要衡量標(biāo)準(zhǔn)是與人類的相似性，標(biāo)準(zhǔn)化必，標(biāo)準(zhǔn)化必 須服從于相似性。從標(biāo)準(zhǔn)化出發(fā)進(jìn)行實驗動物的須服從于相似性。從標(biāo)準(zhǔn)化出發(fā)進(jìn)行實驗動物的 遺傳和微生物控制是錯誤的

4、。遺傳和微生物控制是錯誤的。 2.2.建立與中醫(yī)學(xué)相適應(yīng)的，實證的實驗動物評價、管建立與中醫(yī)學(xué)相適應(yīng)的，實證的實驗動物評價、管 理體系理體系 v 證候模型研究的動物選擇應(yīng)從中醫(yī)角度考慮體質(zhì)因素。證候證候模型研究的動物選擇應(yīng)從中醫(yī)角度考慮體質(zhì)因素。證候 模型研究的動物選擇還應(yīng)從中醫(yī)角度考慮技術(shù)因素：模型研究的動物選擇還應(yīng)從中醫(yī)角度考慮技術(shù)因素： v 豬的皮膚結(jié)構(gòu)與人相似，適合制作溫病模型觀察汗出；豬的皮膚結(jié)構(gòu)與人相似，適合制作溫病模型觀察汗出； v 豬的舌象與人相似適合于模型舌象觀察；豬的舌象與人相似適合于模型舌象觀察； v 體形較大的動物適合于做按摩治療研究；體形較大的動物適合于做按摩治療研究

5、； v 豚鼠耳蝸較為敏感，常用于豚鼠耳蝸較為敏感，常用于“腎主耳腎主耳”的研究。的研究。 3.證候模型研究應(yīng)盡量選擇在其日常生活中就能出現(xiàn)證候模型研究應(yīng)盡量選擇在其日常生活中就能出現(xiàn) 相應(yīng)證候的動物。相應(yīng)證候的動物。 v遺傳性證候模型由于具有生物學(xué)特性恒定，重復(fù)性遺傳性證候模型由于具有生物學(xué)特性恒定，重復(fù)性 好的特點，應(yīng)更多地建立。好的特點，應(yīng)更多地建立。 v如在病的基礎(chǔ)上篩選出證候較一致的動物模型，如如在病的基礎(chǔ)上篩選出證候較一致的動物模型，如 自發(fā)性遺傳性糖尿病陰虛證中國田鼠自發(fā)性遺傳性糖尿病陰虛證中國田鼠(Cricetulus griseus)，將健康中國田鼠在兄弟姐妹鼠間交配，將健康中

6、國田鼠在兄弟姐妹鼠間交配， 第三、第四代時出現(xiàn)第三、第四代時出現(xiàn) 自發(fā)性遺傳性糖尿病，自發(fā)性遺傳性糖尿病， 發(fā)生率可達(dá)發(fā)生率可達(dá) 6590%。 4.動脈粥樣硬化動物模型構(gòu)建的方法 5.AS痰濁血瘀證候現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)痰濁血瘀證候現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ) (1)動脈粥樣硬化痰濁證候的生物學(xué)基礎(chǔ)動脈粥樣硬化痰濁證候的生物學(xué)基礎(chǔ) 脂質(zhì)代謝紊亂脂質(zhì)代謝紊亂痰濁痰濁 v從痰證論治從痰證論治AS是具有中醫(yī)特色的一種方法是具有中醫(yī)特色的一種方法 v結(jié)合脂質(zhì)代謝紊亂，尤其是結(jié)合脂質(zhì)代謝紊亂，尤其是HDL-C的膽固醇逆的膽固醇逆 向轉(zhuǎn)運作用，從細(xì)胞和分子水平對痰濁型向轉(zhuǎn)運作用，從細(xì)胞和分子水平對痰濁型AS 的發(fā)病機制進(jìn)行更

7、深入的研究，將有助于揭示的發(fā)病機制進(jìn)行更深入的研究，將有助于揭示 AS痰濁證候的微觀生物學(xué)基礎(chǔ)。痰濁證候的微觀生物學(xué)基礎(chǔ)。 (2)動脈粥樣硬化血瘀證候的生物學(xué)基礎(chǔ)動脈粥樣硬化血瘀證候的生物學(xué)基礎(chǔ) v血瘀證血瘀證:血凝而不行、血泣則不通、凝血蘊血凝而不行、血泣則不通、凝血蘊 里而不散等，說明血在脈中發(fā)生瘀滯的狀態(tài)里而不散等，說明血在脈中發(fā)生瘀滯的狀態(tài) v血行失度、血脈不通皆是產(chǎn)生血行失度、血脈不通皆是產(chǎn)生AS血瘀證候根血瘀證候根 本原因。本原因。 v現(xiàn)代研究表明，血液流變學(xué)異常、血小板活化現(xiàn)代研究表明，血液流變學(xué)異常、血小板活化 及血管內(nèi)皮損傷是及血管內(nèi)皮損傷是AS血瘀證候的重要生物學(xué)血瘀證候的

8、重要生物學(xué) 表現(xiàn)。表現(xiàn)。 v內(nèi)皮細(xì)胞損傷是血管病變的始動因素，內(nèi)皮素內(nèi)皮細(xì)胞損傷是血管病變的始動因素，內(nèi)皮素 (ET)是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷特異性指標(biāo)之一。是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷特異性指標(biāo)之一。 vET、NO及二者的平衡，及二者的平衡， v血栓素血栓素(TXA2)、前列腺素、前列腺素(PGI2)及二者間的平及二者間的平 衡衡(TXA2PGI2)， v組織型纖溶酶原激活劑組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)、組織型纖溶酶、組織型纖溶酶 原激活劑抑制物原激活劑抑制物(PAI)及二者的比值及二者的比值 v炎癥病理和纖維化炎癥病理和纖維化血瘀證機制。血瘀證機制。 v研究證實在研究證實在AS從早期內(nèi)皮被修飾的脂質(zhì)活

9、化到最從早期內(nèi)皮被修飾的脂質(zhì)活化到最 終的斑塊破裂都有炎性反應(yīng)的參與。終的斑塊破裂都有炎性反應(yīng)的參與。 v如：如：AS發(fā)生時諸多細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)與核因子 -B (NF -B)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的開放有關(guān) （3）動脈粥樣硬化痰濁血瘀證與組學(xué)技術(shù)）動脈粥樣硬化痰濁血瘀證與組學(xué)技術(shù) v高脂血癥及高脂血癥及AS不同痰瘀證候可能的血漿標(biāo)志蛋白與不同痰瘀證候可能的血漿標(biāo)志蛋白與 不同的臟腑功能之間存在不同的關(guān)聯(lián)組合。不同的臟腑功能之間存在不同的關(guān)聯(lián)組合。 v采用代謝組學(xué)技術(shù)，探討痰瘀證候的動態(tài)演變、時采用代謝組學(xué)技術(shù)，探討痰瘀證候的動態(tài)演變、時 相特點和由痰致瘀在代謝方面的變化。相特點和由痰致瘀在代謝方面的變

10、化。 v高脂血癥前期以脂質(zhì)代謝紊亂為特點，隨著病程進(jìn)高脂血癥前期以脂質(zhì)代謝紊亂為特點，隨著病程進(jìn) 展，參與血液凝固過程的乙酰糖蛋白出現(xiàn)，同時酮展，參與血液凝固過程的乙酰糖蛋白出現(xiàn)，同時酮 體及乳酸升高。體及乳酸升高。 我們的經(jīng)驗體會我們的經(jīng)驗體會 v無論是大鼠還是小鼠，僅僅用高脂飼料喂養(yǎng)的方無論是大鼠還是小鼠，僅僅用高脂飼料喂養(yǎng)的方 法，只能制造高脂血癥模型（痰濁證）法，只能制造高脂血癥模型（痰濁證） ，很難制，很難制 作出作出AS 斑塊模型（痰濁血瘀證）；斑塊模型（痰濁血瘀證）； v制作出制作出AS 斑塊動物模型，雖然有多種方法，如球斑塊動物模型，雖然有多種方法，如球 囊損傷法，但死亡率高，

11、成本大，操作不易；囊損傷法，但死亡率高，成本大，操作不易； v用用ApoE-/-小鼠小鼠+高脂飼料喂養(yǎng)的方法，成功率高，高脂飼料喂養(yǎng)的方法，成功率高， 成本相對較低，操作相對容易，且符合痰濁血瘀成本相對較低，操作相對容易，且符合痰濁血瘀 證的特征。證的特征。 vApoE-/-小鼠小鼠+高脂飼料喂養(yǎng)的方法，是制作痰濁高脂飼料喂養(yǎng)的方法，是制作痰濁 血瘀證血瘀證AS 斑塊模型的理想方法。斑塊模型的理想方法。 二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容 AS的發(fā)生發(fā)展中具有的發(fā)生發(fā)展中具有諸多因素。諸多因素。 本課題組近年來，采用在體與離體水平相結(jié)合本課題組近年來，采用在體與離體水平相結(jié)合 的方法，的方法， 使用中醫(yī)

12、藥干預(yù)使用中醫(yī)藥干預(yù)AS模型小鼠與細(xì)胞，從抑制氧模型小鼠與細(xì)胞，從抑制氧 化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及減少病理性血管生成等化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及減少病理性血管生成等 方面，進(jìn)行防治方面，進(jìn)行防治AS的系列研究。的系列研究。 冠心病等冠心病等AS疾病屬中醫(yī)胸痹、疾病屬中醫(yī)胸痹、 心悸怔忡、心痛范疇。心悸怔忡、心痛范疇。 其病因病機是本虛標(biāo)實。其病因病機是本虛標(biāo)實。 氣虛、痰瘀互阻是重要的病理氣虛、痰瘀互阻是重要的病理 因素。痰瘀互結(jié)以致病，補氣因素。痰瘀互結(jié)以致病，補氣 活血是主要防治方法?；钛侵饕乐畏椒?。 二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容 基于對冠心病等基于對冠心病等AS疾病病機的充分認(rèn)識，在臨床上采用中藥

13、疾病病機的充分認(rèn)識，在臨床上采用中藥 復(fù)方定心方（復(fù)方定心方（DXR）治療冠心病多年收到了良好療效。）治療冠心病多年收到了良好療效。 DXR重用赤芍和丹參為君，活血化瘀、涼血止痛，取重用赤芍和丹參為君，活血化瘀、涼血止痛，取“去瘀去瘀 生新生新”之義；之義； 以歸心肝經(jīng)之黃連、苦參為臣，解毒清熱，瀉火寧心；以歸心肝經(jīng)之黃連、苦參為臣，解毒清熱，瀉火寧心； 佐以三七、瓜蔞活血祛痰，茯苓、黨參健脾益氣，靈芝、酸棗佐以三七、瓜蔞活血祛痰，茯苓、黨參健脾益氣，靈芝、酸棗 仁養(yǎng)心安神；仁養(yǎng)心安神； 諸藥合而共奏益氣養(yǎng)心、活血解毒、清熱祛痰之功效。諸藥合而共奏益氣養(yǎng)心、活血解毒、清熱祛痰之功效。 二、研究

14、內(nèi)容二、研究內(nèi)容 二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容 近幾年的研究內(nèi)容主要有六個方面：近幾年的研究內(nèi)容主要有六個方面： 一、一、定心方上調(diào)定心方上調(diào)ApoEApoE-/- -/-小鼠 小鼠PTENPTEN表達(dá)抑制動脈粥樣硬表達(dá)抑制動脈粥樣硬 化形成的研究；化形成的研究； 二、定心方經(jīng)二、定心方經(jīng)Ang1-Tie2Ang1-Tie2通路干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通路干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 血管生成的實驗研究；血管生成的實驗研究； 三、定心方通過調(diào)節(jié)三、定心方通過調(diào)節(jié)PI3K/AktPI3K/Akt信號通路減輕信號通路減輕ox-LDLox-LDL誘誘 導(dǎo)的導(dǎo)的HUVECHUVEC氧化應(yīng)激損傷的機制；氧化應(yīng)激損傷的機

15、制； 二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容 四、梔子苷通過四、梔子苷通過miR-101/MKP-1/MAPKmiR-101/MKP-1/MAPK通路抑制動脈通路抑制動脈 粥樣硬化炎癥的機制研究；粥樣硬化炎癥的機制研究； 五、梔子苷對動脈粥樣硬化并發(fā)非酒精性脂肪肝五、梔子苷對動脈粥樣硬化并發(fā)非酒精性脂肪肝 ApoEApoE-/- -/-小鼠炎癥和氧化應(yīng)激的影響； 小鼠炎癥和氧化應(yīng)激的影響； 六、三七皂苷六、三七皂苷R1R1上調(diào)上調(diào)miR-146amiR-146a水平和減輕水平和減輕ApoEApoE-/- -/-小 小 鼠肝臟炎癥損傷的研究鼠肝臟炎癥損傷的研究 三、研究方法三、研究方法 1.1.在體水平在體水

16、平 v 實驗動物：實驗動物：SPFSPF級級8 8周齡雄性周齡雄性ApoEApoE-/- -/-小鼠 小鼠9090只，只，8 8周齡雄性野生周齡雄性野生 型型C57BL/6JC57BL/6J小鼠作為空白對照。小鼠作為空白對照。 v 飼養(yǎng)室溫飼養(yǎng)室溫18182626，相對濕度，相對濕度55%55%左右，光照時間為左右，光照時間為12 h12 h。飼。飼 養(yǎng)籠具及引水瓶定期消毒。小鼠分籠飼養(yǎng)，每籠養(yǎng)籠具及引水瓶定期消毒。小鼠分籠飼養(yǎng)，每籠3 34 4只。只。 v 高脂飼料（高脂飼料（0.15 %0.15 %膽固醇，膽固醇，21%21%豬油，豬油，78.85%78.85%原糧）由廣東省原糧）由廣東省

17、 醫(yī)學(xué)實驗動物中心配制。醫(yī)學(xué)實驗動物中心配制。 v 小鼠分組：小鼠分組：雄性雄性ApoEApoE-/- -/-小鼠，隨機分為 小鼠，隨機分為9 9組，每組組，每組1010只。分別只。分別 為模型組，辛伐他汀組，為模型組，辛伐他汀組，DXRDXR低、中、高劑量組，梔子苷組，低、中、高劑量組，梔子苷組， 三七皂苷三七皂苷低、中、高劑量低、中、高劑量組，組，所有小鼠均高脂飼料喂養(yǎng)，所有小鼠均高脂飼料喂養(yǎng)，并以并以 同周齡雄性同周齡雄性C57BL/6JC57BL/6J小鼠作為空白對照組。小鼠作為空白對照組。 三、研究方法三、研究方法 v DXR低、中、高劑量組分別以低、中、高劑量組分別以9.30g/k

18、g、18.59g/kg、37.18g/kg 藥液灌胃，辛伐他汀組以藥液灌胃，辛伐他汀組以5mg/kg藥液灌胃，藥液灌胃，梔子苷以梔子苷以50mg/kg 藥液灌胃，三七皂苷藥液灌胃，三七皂苷R1低、中、高劑量組分別為低、中、高劑量組分別為12.5mg/kg、 25mg/kg、50mg/kg，腹腔注射給藥，腹腔注射給藥，其他組給予等劑量生理其他組給予等劑量生理 鹽水灌胃。各組小鼠自由飲水，根據(jù)小鼠體重鹽水灌胃。各組小鼠自由飲水，根據(jù)小鼠體重(每兩周測量每兩周測量1次次)， 以校正給藥量，藥液灌胃均每日以校正給藥量，藥液灌胃均每日1次，連續(xù)次，連續(xù)12周。周。 三、研究方法三、研究方法 三、研究方法

19、三、研究方法 2.離體水平離體水平 v 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）購自于）購自于Cascade Biologics公司，公司， 細(xì)胞培養(yǎng)用含有細(xì)胞培養(yǎng)用含有10%胎牛血清的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在培養(yǎng)基在 37，5% 的的CO2飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，23d傳代一次，實驗采用傳代一次，實驗采用 對數(shù)生長期的細(xì)胞。對數(shù)生長期的細(xì)胞。 三、研究方法三、研究方法 v 含藥血清的制備含藥血清的制備 v 實驗分組：以含實驗分組：以含10胎牛血清胎牛血清(FBS)的的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì) 胞胞18 h，待細(xì)胞貼壁后，分為，

20、待細(xì)胞貼壁后，分為5組：空白對照組、模型組、組：空白對照組、模型組、DXR高、中、低高、中、低 劑量組。空白對照組加入劑量組。空白對照組加入10FBS的的DMEM培養(yǎng)液，其余各組加入培養(yǎng)液，其余各組加入10 FBS的的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)液+ox-LDL，終濃度為，終濃度為100ug/ml。以上各組共同繼續(xù)培。以上各組共同繼續(xù)培 養(yǎng)養(yǎng)24 h，棄去上清后，空白對照組加入含，棄去上清后，空白對照組加入含15空白大鼠血清的空白大鼠血清的DMEM培養(yǎng)培養(yǎng) 液，模型組加入液，模型組加入10FBS的的DMEM培養(yǎng)液，定心方高中低劑量組分別加入培養(yǎng)液，定心方高中低劑量組分別加入 20%、15%、5%含含DX

21、R含藥血清的含藥血清的DMEM培養(yǎng)液，共同培育培養(yǎng)液，共同培育24h后收集細(xì)后收集細(xì) 胞。胞。 v 生化檢測生化檢測 v HE、Masson染色染色 v 免疫組化免疫組化 v RT-qPCR v Western Blot v ELISA 三、研究方法三、研究方法 三、研究方法三、研究方法 v細(xì)胞劃痕實驗細(xì)胞劃痕實驗 v內(nèi)皮細(xì)胞遷移實驗內(nèi)皮細(xì)胞遷移實驗 v雞胚尿囊膜實驗雞胚尿囊膜實驗 v小管形成實驗小管形成實驗 1 1、定心方上調(diào)定心方上調(diào)ApoEApoE-/- -/-小鼠 小鼠PTENPTEN表達(dá)抑制動脈粥樣硬化形成的表達(dá)抑制動脈粥樣硬化形成的 研究研究 DX DXR R給藥組血脂水平較模型組

22、明顯降低，表明給藥組血脂水平較模型組明顯降低，表明DXDXR R有降脂作有降脂作 用；用； 模型組小鼠血清中總超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶，模型組小鼠血清中總超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶， 總抗氧化能力較空白對照組明顯降低，而丙二醛水平明顯升高。總抗氧化能力較空白對照組明顯降低，而丙二醛水平明顯升高。 DXDXR R治療后血清中總超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶，治療后血清中總超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶， 總抗氧化能力升高，丙二醛水平降總抗氧化能力升高，丙二醛水平降 低，表明低，表明DXDXR R有抑制有抑制ApoEApoE-/- -/- 小鼠氧化應(yīng)激的作用；小鼠氧化應(yīng)激

23、的作用； 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 與空白對照組小鼠相比，所有與空白對照組小鼠相比，所有ApoEApoE-/- -/-小鼠均有斑塊形成。經(jīng)不同劑量 小鼠均有斑塊形成。經(jīng)不同劑量 DXDXR R治療后主動脈病變減輕，治療后主動脈病變減輕，DXDXR R高劑量組管腔狹窄程度減輕最為明顯，斑塊面高劑量組管腔狹窄程度減輕最為明顯，斑塊面 積最??；積最??； 模型組小鼠主動脈模型組小鼠主動脈PTENPTEN水平較空白對照組明顯降低，而經(jīng)過辛伐他汀及水平較空白對照組明顯降低，而經(jīng)過辛伐他汀及 DXDXR R不同劑量治療后均可升高不同劑量治療后均可升高PTENPTEN水平。水平。 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 2

24、 2、定心方經(jīng)定心方經(jīng)Ang1-Tie2Ang1-Tie2通路干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的實驗研究通路干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的實驗研究 受受DXRDXR干預(yù)小鼠的斑塊內(nèi)干預(yù)小鼠的斑塊內(nèi)CD34CD34標(biāo)記的小血管數(shù)目明顯減少，標(biāo)記的小血管數(shù)目明顯減少，證明證明DXRDXR具具 有抑制小鼠血管生成的作用；有抑制小鼠血管生成的作用； 四、四、 研究結(jié)果研究結(jié)果 注：注：A.空白組空白組 B. 模型組模型組 C. 辛辛 伐他汀組伐他汀組 D. DXR低劑量組低劑量組 E. DXR中劑量組中劑量組 F. DXR高劑量高劑量 組（組（200倍光鏡下視野）倍光鏡下視野） DXRDXR中劑量組和高劑

25、量組對中劑量組和高劑量組對oxox-LDL-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移 具有抑制作用。具有抑制作用。DXRDXR含藥血清組也具有降低血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外含藥血清組也具有降低血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外 分化成管狀結(jié)構(gòu)的能力；分化成管狀結(jié)構(gòu)的能力； 受受DXRDXR含藥血清干預(yù)的含藥血清干預(yù)的HUVECHUVEC中的中的Ang1Ang1蛋白和蛋白和Tie2Tie2蛋白表達(dá)量蛋白表達(dá)量 上調(diào)，與血管生成相關(guān)的上調(diào)，與血管生成相關(guān)的VEGFVEGF蛋白表達(dá)量下降。說明蛋白表達(dá)量下降。說明DXRDXR含藥血含藥血 清可以激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的清可以激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的Ang1An

26、g1- -Tie2Tie2通路，進(jìn)而調(diào)控下通路，進(jìn)而調(diào)控下 游指標(biāo)游指標(biāo)VEGFVEGF，實現(xiàn)對血管生成的調(diào)控；，實現(xiàn)對血管生成的調(diào)控； 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 雞胚尿囊膜實驗證明，受雞胚尿囊膜實驗證明，受DXRDXR含藥血清干預(yù)的雞胚組形成的含藥血清干預(yù)的雞胚組形成的 一級血管與二級血管數(shù)量顯著低于模型組。一級血管與二級血管數(shù)量顯著低于模型組。 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 3 3、定心方通過調(diào)節(jié)定心方通過調(diào)節(jié)PI3K/AktPI3K/Akt信號通路減輕信號通路減輕ox-LDLox-LDL誘導(dǎo)的誘導(dǎo)的HUVECHUVEC 氧化應(yīng)激損傷的機制氧化應(yīng)激損傷的機制 DXRDXR可顯著降低可顯著降低M

27、MP9MMP9表達(dá)與表達(dá)與MMP9/TIMP1MMP9/TIMP1比值，并上調(diào)比值，并上調(diào)TIMP1TIMP1 表達(dá)；表達(dá)； DXR DXR可促進(jìn)可促進(jìn)ox-LDLox-LDL誘導(dǎo)的誘導(dǎo)的HUVECHUVEC分泌分泌NONO及及SODSOD，起到抗氧化，起到抗氧化 應(yīng)激作用；應(yīng)激作用； DXR DXR各組細(xì)胞的各組細(xì)胞的p-PI3Kp-PI3K、p-Aktp-Akt蛋白表達(dá)均顯著降低。蛋白表達(dá)均顯著降低。 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 4 4、梔子苷通過梔子苷通過miR-101/MKP-1/MAPKmiR-101/MKP-1/MAPK通路抑制動脈粥樣硬化炎癥通路抑制動脈粥樣硬化炎癥 的機制研究的機

28、制研究 梔子苷降低小鼠血脂血糖水平，調(diào)控糖脂代謝紊亂；梔子苷降低小鼠血脂血糖水平，調(diào)控糖脂代謝紊亂； 梔子苷減小動脈粥樣硬化小鼠體內(nèi)斑塊大小，減緩纖維梔子苷減小動脈粥樣硬化小鼠體內(nèi)斑塊大小，減緩纖維 斑塊的發(fā)展；斑塊的發(fā)展； 梔子苷顯著降低小鼠血清中炎癥因子如梔子苷顯著降低小鼠血清中炎癥因子如TNF-TNF-、IL-6IL-6的的 表達(dá)表達(dá) ； 梔子苷可以上調(diào)梔子苷可以上調(diào)MKP-1MKP-1表達(dá)，降低表達(dá)，降低p38p38的活化程度；的活化程度； 梔子苷顯著下調(diào)梔子苷顯著下調(diào)miR-101miR-101的轉(zhuǎn)錄水平的轉(zhuǎn)錄水平 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 5 5、梔子苷對動脈粥樣硬化并發(fā)非酒精性脂

29、肪肝梔子苷對動脈粥樣硬化并發(fā)非酒精性脂肪肝 ApoEApoE-/- -/-小鼠炎癥和氧化應(yīng)激的影響 小鼠炎癥和氧化應(yīng)激的影響 梔子苷能夠有效降低梔子苷能夠有效降低 ApoE ApoE-/- -/-小鼠血清中丙氨酸 小鼠血清中丙氨酸 氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基酶水平；氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基酶水平； 梔子苷能夠降低小鼠肝臟中梔子苷能夠降低小鼠肝臟中TNFTNF- - 、IL- 6IL- 6水水 平，平，具有抑制炎癥及減輕肝損傷的作用；具有抑制炎癥及減輕肝損傷的作用； 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 梔子苷顯著降低肝臟中丙二醛水平，升高總超氧化物歧梔子苷顯著降低肝臟中丙二醛水平，升高總超氧化物歧 化酶水平

30、。化酶水平。 HE HE染色表明梔子苷能夠有效減少染色表明梔子苷能夠有效減少ASAS斑塊面積，同時能夠斑塊面積，同時能夠 一定程度抑制肝臟脂肪變性。一定程度抑制肝臟脂肪變性。 四、研究結(jié)果四、研究結(jié)果 6 6、三七皂苷三七皂苷R1R1上調(diào)上調(diào)miR-146amiR-146a水平和減輕水平和減輕ApoEApoE-/- -/-小鼠肝 小鼠肝 臟炎癥損傷的研究臟炎癥損傷的研究 模型組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基酶含量顯模型組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基酶含量顯 著高于空白對照組，使用中、高劑量三七皂苷著高于空白對照組，使用中、高劑量三七皂苷R1R1干預(yù)后，小鼠干預(yù)后，小鼠 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與天冬氨酸氨基酶的含量顯著降低；血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與天冬氨酸氨基酶的含量顯著降低； 肝臟組織形態(tài)學(xué)結(jié)果也表明，與模型組比較，三七皂苷肝臟組織形態(tài)學(xué)結(jié)果也表明，與模型組比