人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)酶聯(lián)免疫分析

1、人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用與分析 檢測(cè)范圍：30pg/ml-1200pg/ml 使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF含量。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF水平。用純化的人 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF，再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化 成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺

2、和樣品中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0D值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品 中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF濃度。 試劑盒組成 1 30倍濃縮洗滌液 20ml X 1瓶7終止液6ml X 1瓶 2酶標(biāo)試劑 6ml X 1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(2400pg/ml )0.5ml X 1瓶 3酶標(biāo)包被板12孔X 8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml X 1瓶 4樣品稀釋液6ml X 1瓶10說明書1份 5顯色劑A液6ml X 1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液6ml X 1/瓶12密封袋1個(gè) 標(biāo)本要求 1 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不

3、能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20 C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2. 不能檢測(cè)含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn) 行稀釋。 1200pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150卩 l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 600pg/ml4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 卩 l 的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 1 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 300pg/ml3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 卩 l 的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 1l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150pg/ml2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 卩 l 的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 1 l標(biāo)準(zhǔn)品稀

4、釋液 75pg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 卩 l 的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 1501 l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn) 孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50卩I,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40 卩l(xiāng)，然后再加待測(cè)樣品10卩l(xiāng) (樣品最終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部， 盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37 C溫育30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如 此重復(fù)5次，拍干。

5、6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50卩I,空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50卩l(xiāng)，再加入顯色劑 B50卩l(xiāng)，輕輕震蕩混勻，37C避光 顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50卩I，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加 終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 操作程序總結(jié)： 計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品 的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算 出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將

6、樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng) 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后 如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測(cè)定, 計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋

7、倍數(shù)（Xn X 5）。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6. 底物請(qǐng)避光保存。 7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) 2-8Co 2 .有效期：6個(gè)月春天 依著風(fēng)的眼眸, 的風(fēng)是有靈性的, 我看到了那一株株桃花讀信的倩影，在桃林深處，紫色的青藤爬滿那個(gè)小屋。我的小城，桃花已然開成海，像是一場(chǎng)粉色的春夢(mèng)。是否，可以赴一場(chǎng)最美的相逢，如是，便不負(fù)曾經(jīng)許下的約 定。守住心底最美風(fēng)景，是一種風(fēng)度，一種期望。讓心，隨花兒輕舞，讓夢(mèng)，隨蝶兒翩躚。 等一縷柔風(fēng)載滿詩意，落滿我的小院，好想，牽著你的手走在花開的路上，臨摹又一個(gè)春的相遇，陌上綠色蔓延，讓深情的詩句落在眉彎，

8、打開靈魂的心門，寫盡情意綿綿。春雨如絲， 暖了一季寒涼露出溫暖，碧水映藍(lán)天，云朵兒似乎摸到嫩草尖尖?；ㄏ闶?，暗香盈袖。我們微笑著，不說話，就十分美好。 生命里，總會(huì)有一些人，漸行漸遠(yuǎn)，偶爾想起，卻只是停留在文字里，那一抹淡淡的回憶。唯有春天，總那么詩意明亮，始終暈染著眉心，讓澀澀的往事隨風(fēng)，讓一些溫暖的記憶溫潤(rùn)著 心房。珍惜眼前的幸福，緊握手中的暖意，面向青山綠水，一路微笑，一路行走 情暖山水間，盈一份詩意于心田，以云的飄逸輕盈過往，以花的姿態(tài)擁馨香滿懷，以文字的杯盞邀約一曲細(xì)水長(zhǎng)流。 煮一壺春色，與時(shí)光對(duì)語。窗前，柳枝兒發(fā)芽，玉蘭含苞，時(shí)光一直繞指馨香。心念如這徐徐春風(fēng)，蕩漾成一片流云。春

9、落人間，一種別樣的景致美了心境，所有的疲憊與憂愁也隨風(fēng)而 去，微笑著面對(duì)生活，用內(nèi)心的那份熱情，那份純真來經(jīng)營(yíng)生活，來創(chuàng)造幸福，何嘗不是一種快樂？我的流年，風(fēng)過，紅塵入畫；雨落，纏綿入心。 行走在春天里，眼里滿是明麗與清澈，一樹一樹的花開，細(xì)碎而芬芳；一片一片的綠地，靜美而清新。嗅著陽光的味道，把自己置身于大自然中，真好！只要心足夠明媚，縱然有小小的 陰霾也無妨。 我們一路走來，沿途總會(huì)有美麗的風(fēng)景。于喧囂紅塵中，守著心靈的一方山水。不亂于心，不困于情，不畏將來，不念過往。 春水初生，耐人尋味。春雨如絲，絲如媚，綿綿的不著一點(diǎn)兒聲息。踏春而去，不知是哪一處的紅塵山水在心間已布滿了雅致，心如花開，一朵嫻雅的光陰，柔軟著眼角的笑意，置身于 安暖的春天，一抹淺喜，一懷深愛。一顆心，便在另一顆心的相隨里靜好。 春光無限溫柔地灑滿山川，我愿，生命里所有的遠(yuǎn)方，都開滿春天的芬芳，待一輪明月悄悄爬上西窗，歸來的都是安詳。