反相高效液相色譜法測(cè)定絞股藍(lán)50總皂苷提取物中蘆丁和槲皮素的含量

1、文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. 反相高效液相色譜法測(cè)定絞股藍(lán)50%總皂昔 提取物中蘆丁和栩皮素的含量 作者：盧金清，喻樊，田耀平，肖波，陳黎，徐玉婷， 詹曉蓮 【關(guān)鍵詞】絞股藍(lán)50%總皂昔提取物；，蘆丁；，撇皮素；，反 相高效液相色譜法， 摘要：目的建立絞股藍(lán)50%總皂菇提取物中蘆丁與桝皮素的 含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜儀，使用TURNER KromasilTMCIS 色譜柱(250 mmX4.6mm, 5 Pm),流動(dòng)相為0. 4%磷酸水溶液甲醇乙 月青進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.5mlmin-l,檢測(cè)波長為360 nm； 柱溫為40Co結(jié)果蘆

2、丁在0.373.70 u g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系， r二0.999 9o撇皮素在0. 050. 50 Hg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系， 0.999 9；蘆丁的平均加樣回收率為99. 2%, RSD為1.69%；獅皮素的 平均加樣回收率為99.1%, RSD為2.21%。結(jié)論該方法簡便快捷，準(zhǔn)確 度高。 關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)50%總皂昔提取物；蘆?。缓に?；反相 高效液相色譜法 Determination of Rutin and Quercetin in 50% Total Gypenoside Extraction of Gynostemma by RPHPLC Abstract: Objectiv

3、eTo determine the main flavonoids rutin and quercetin in 50% total saponins of Gynostemma by RPHPLC. MethodsThe separation was performed on TURNER KromasilTMCIS column (250 mmX4. 6 mm, 5 Um), the mobile phase consisted of 0. 4% phosphoric acid- methanol-acetonitrile, with the following rate of 0. 5

4、mlmin-lat 40 C , the wavelength for measurement was 360 nm. ResuItsThe calibration curves were linear in the range of 0. 373. 70 U g for rutin (r=0. 999 9)and in the range of 0. 050. 50 Ug for quercetin (r=0. 999 9). The average recovery of compound rutin was 99.2%(RSD=1. 69%), and that of compound

5、quercetin was 99. 1% (RSD二2. 21%). ConclusionThis method is accurate and reproducible. Key words: 50% Total saponins of Gynostemma; Rutin; Quercetin; RPHPLC 絞股藍(lán)(Gynostenmia)又名七葉膽，是葫蘆科絞股藍(lán)屬植物。 該屬植物我國有14種和3變種1。現(xiàn)代藥理學(xué)證明，絞股藍(lán)具有抑 制腫瘤、防止衰老、降低血脂、增強(qiáng)免疫力、鎮(zhèn)靜止痛、保護(hù)心臟和 肝臟等作用2。絞股藍(lán)50%總皂苗提取物是總皂苛含量達(dá)50%的、一 種適用于口服制劑生產(chǎn)的原料藥

6、，它具有很廣的應(yīng)用范圍，故木文采 用反相高效液相色譜法，可對(duì)絞股藍(lán)50%總皂苛提取物中的蘆丁、榊 皮素等成分進(jìn)行有效的分離和準(zhǔn)確的含量測(cè)定，并且操作簡便、快速、 靈敏度高、重現(xiàn)性好，能為建立絞股藍(lán)50%總皂廿提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 提供依據(jù)。 1儀器與試藥 DIONEXP680高效液相色譜儀(四元泵、Chromel eon色譜工作 站、UVD170U檢測(cè)器），AT201電子分析天平（d=0.01 mg,瑞士），蘆 丁對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)0080 9705）、獅皮素對(duì) 照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)081-9003）；甲醇（色譜純， 天津大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站）、乙睛（色譜純，天津大茂

7、化學(xué)儀器供應(yīng)站）, 其它試劑均為分析純，水為雙蒸水。絞股藍(lán)原50%總皂苛提取物由湖 北中醫(yī)學(xué)院中藥制劑教研室提供。 2方法與結(jié)果 2. 1 色譜條件色譜柱為 TURNER KromasilTM（4. 6 mmX250 mm, 5 Um）；以0.4%磷酸水溶液為流動(dòng)相A,以甲醇為流動(dòng)相B,以乙購 為流動(dòng)相C；按表1進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長為360 nm；流速為0. 5 mlmin-l,柱溫為40C。理論板數(shù)按蘆丁、撇皮素峰計(jì)算應(yīng) 不低于3 000o色譜圖見圖14。 表1梯度洗脫（略） 圖1蘆丁對(duì)照品HPLC圖譜（略） 圖2欄皮素對(duì)照品HPLC圖譜（略） 圖3絞股藍(lán)50%總皂苛提取物供試品的HPLC

8、圖譜（略） 圖4空白溶劑圖譜（略） 2.2供試品溶液的制備取本品0.2g,精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50 ml,稱定重量，超聲處理30 min,放冷， 再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，精密量取20 ml,蒸干，殘?jiān)?用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù) 濾液，即得。 2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制 成每毫升含0. 368 mg的溶液，即得蘆丁對(duì)照品溶液；精密稱取榊皮素 對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0. 054 8 mg的溶液，即得獅皮素對(duì) 照品溶液。 2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取蘆丁、糊皮素對(duì)照品溶液 1.0, 2.0,

9、4.0, 6.0, 8.0, 10.0 H1,注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積 值，結(jié)果見表1,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）,峰面積為縱坐標(biāo)（Y）,繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁的回歸方程為：y = 61.194 5x + 1. 100 4, r=0. 999 9；榊皮素的回歸方程為：y = 129.036 0X-0. 833 4, r二0. 999 9。線 性范圍：蘆丁為0.373. 70 ng；欄皮素為0.050.50 Ugo 圖5 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線（略） 圖6撇皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線（略） 2.5精密度實(shí)驗(yàn)取2.3項(xiàng)下蘆丁和糊皮素對(duì)照品溶液各5 U1,分別連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表23。蘆丁和榊皮 素的RSD分別

10、為:0. 08%和0. 26%o 表2蘆丁精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 表3懈皮素精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取2. 2項(xiàng)下樣品溶液室溫放置0, 3, 6, 9, 12, 24 h后測(cè)定，結(jié)果見表45,測(cè)得蘆丁和桝皮素峰而積基本不變, RSD分別為1. 77%, 2. 80%,表明樣品溶液在24h之內(nèi)穩(wěn)定。 表4蘆丁穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 表5欄皮素穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品5份，照2. 2項(xiàng)下的方法依法 制備，測(cè)定樣品中蘆丁和榊皮素的含量，結(jié)果見表67。測(cè)得蘆丁和 攔皮素含量的分別為0. 955%和0. 222%, RSD分別為1. 29%和1. 71%。 2.8

11、加樣回收實(shí)驗(yàn) 取已知含量的本品粉末6份，每份0. 1 g, 精密稱定，分別加入一定量的蘆丁、郴皮素對(duì)照品，按2. 2項(xiàng)下的方 法依法制備，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表曠9。蘆丁加樣回 收率為99. 6%, RSD為1. 07%,榊皮素加樣回收率為99. 1%, RSD為2. 21%。 2.9樣品測(cè)定按2. 2項(xiàng)下方法配制樣品溶液5份，依法測(cè)定, 結(jié)果見表10o 表6蘆丁重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 表7懈皮素重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 表8蘆丁加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 表9撇皮素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（略） 表10 5批絞股藍(lán)藥材中蘆丁、榊皮素含量測(cè)定結(jié)果（略） 3討論 3.1提取方法的選擇在絞股藍(lán)原藥材蘆丁、

12、懈皮素的含量測(cè) 定中，我們?cè)鴮?duì)不同極性的提取溶劑（如：不同濃度的甲醇、不同濃 度的乙醇）和不同的提取方式（如：超聲、回流等）進(jìn)行過考察，并 對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)，綜合考慮以石油瞇回流提取，除去脂 溶性較大的成分，再以甲醇回流提取3 h實(shí)際工資效果最好。 3.2檢測(cè)波長的選擇在檢測(cè)波長選擇中根據(jù)對(duì)蘆丁對(duì)照品、 糊皮素對(duì)照品溶液紫外光譜的測(cè)定，在360 nm處有最大吸收，最終選 擇測(cè)定波長為360 nmo 3.3流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇曾使用過乙月青-水、乙睛-甲 醇-水、甲醇-水、乙月青-0.4%磷酸等流動(dòng)相進(jìn)行等度及梯度洗脫，由于 干擾峰難以分離，最后根據(jù)分離情況選擇了表1中的流動(dòng)相。絞股藍(lán) 50%總皂苛提取物色譜圖中除蘆丁、榊皮素的色譜峰外還有其他的色譜 峰，分離度也較好，亦可以作為指紋圖譜用于絞股藍(lán)50%總皂苛提取 物的鑒別。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，此方法能對(duì)絞股藍(lán)50%總皂苛提取物中的 蘆丁、WI皮素進(jìn)行有效的