原位雜交技術(shù)

1、原位雜交技術(shù) 一、概述 (一) 概念：原位雜交(in situ hybridization, ISH )是應(yīng)用生物化 學中核酸分子雜交 (nucleic acid molecular hybridization ) 的原理,在組織切片、細胞涂片或印片上原位檢測某種 DNA或RNA序列的一項技術(shù)。是將分子雜交與組織學 相結(jié)合的一項技術(shù)，也稱之為雜交組織化學 (hybridization histochemistry)、細 胞雜交(cytological hybridization)或原位雜交組織化學 (in situ hybridization histochemistry)。 (二) 歷史和現(xiàn)

2、狀 可以檢測組織細胞本身的或外源的DNA或RNA序列。 二、原位雜交的基本原理 核酸分子雜交的基本原理是利用核酸分子(DNA , RNA)的堿基對 形成氫鍵的互補性(A=T , A=U , C=G)，用一標記的核酸探針去檢 測與之堿基互補的靶核酸，這與免疫學中抗原-抗體的反應(yīng)相 似。 優(yōu)點：分子雜交的特異性強、靈敏度高，同時又有組織細胞化 學染色的可見性。既可用新鮮組織，又可用石蠟包埋組織作回 顧性研究。所需樣本量少，可用活組織細針穿刺和細胞涂片。 應(yīng)用范圍廣泛，可對特定的基因 (如癌基因、病毒基因)DNA、 mRNA的表達進行定位、定性和定量、組織細胞分布和雜交電鏡 的亞細胞定位研究。 三、

3、探針（probe） 是含有互補順序的外源性被標記的 DNA或RNA片段，是在原 位雜交中用于檢測細胞內(nèi)特定 DNA或RNA順序定位的特殊試 劑，探針的堿基序列是已知的，只能與特定的核酸分子結(jié)合上。 用于原位雜交的探針有不同種類，可用于不同靶核酸的探測。 （一）探針種類、來源和應(yīng)用 1. 雙鏈cDNA探針 2. 單鏈cDNA探針 3. 寡核苷酸探針 4. cRNA探針 （二）探針標記的種類 1. 放射性標記 2. 非放射性標記最常用的為生物素（光敏生物素、補骨脂素生物 素）和地高辛（digxigenin , DIG），此外還有熒光素、酶類，如辣 根過氧化酶（HRP）和堿性磷酸酶（ALP）等。 （

4、三）探針標記的方法 1. 切口移位法 亦稱缺口平移法，是常用的標記 DNA的方法。 最常用的標記物為32P，也可用地高辛和生物素進行標記。 2. 引物延伸法（primer extension）此法產(chǎn)量低，可標記純度不太高 的 DNA。 3. 末端標記法（end - labeling）分為5末端和3末端標記。此法適 用于合成的寡核苷酸探針。 4. 體外轉(zhuǎn)錄法此法應(yīng)用于制備RNA探針 （四）標記探針的純化 四、原代雜交的類型 遇到失意傷心事，多想有一個懂你的人來指點迷津，因他懂你，會以我心，換你心，站在你的位置上思慮，為你排優(yōu)解難。 一個人，來這世間，必須懂得一些人情事理，才能不斷成長。就像躬耕于

5、隴畝的農(nóng)人，必須懂得土地與種子的情懷，才能有所收獲。 一個女子，一生所求，莫過于找到一個懂她的人，執(zhí)手白頭，相伴終老。 即使蘆花暖鞋，菊花枕頭，也覺溫暖；即使粗食布衣，陋室簡靜，也覺舒適，一句懂你”叫人無怨無悔，愿以自己的一生來交付。 懂得是彼此的欣賞，是靈魂的輕喚，是惺惺相惜，是愛，是暖，是彼此的融化；是走一段很遠的路，驀然回首卻發(fā)現(xiàn)，我依然在你的視線里；是回眸相視一笑的無言；是一條偏僻幽靜的 小路，不顯山，不露水，路邊長滿你喜愛的花草，靜默無語卻馨香盈懷，而路的盡頭，便是通達你心靈的小屋 瑟瑟嚴冬，窗外雪飄，絮絮自語說了這多，你可懂我了嗎？若你知曉，無需說話，只報一聲心靈的輕嘆，那，便是我的花開春暖。 你相不相信，人生有