實(shí)驗(yàn)五霉菌的形態(tài)觀察(20201223100411)_第1頁
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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)五 霉菌的形態(tài)觀察、微生物的測微與計數(shù)一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法,初步了解霉菌的形態(tài)特征及鑒別依據(jù)。2. 學(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。3. 了解血球計數(shù)板的構(gòu)造和使用方法。學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。4. 總結(jié)并掌握細(xì)菌、放線菌和霉菌的鑒別方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 霉菌定義及用途 霉菌不是真菌分類中的名詞,而是絲狀真菌的統(tǒng)稱。 霉菌在自然界中廣泛分布,與食品的關(guān)系密切,是人類在實(shí)踐活動中最早利用的一 種微生物,如早期進(jìn)行的醬和醬油的制作等。霉菌也可以使食品發(fā)生腐敗變質(zhì)或產(chǎn)生毒素,影響人體健康甚至危及生命。2. 霉菌特征 霉菌

2、可產(chǎn)生分支的菌絲體,分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲,氣生菌絲生長到一定階段分化 產(chǎn)生繁殖菌絲,由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。 霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗的多(約 3-10um) ,常是細(xì)菌菌體寬 度的幾倍至幾十倍。因此,用低倍鏡即可觀察。3. 霉菌的菌落 松:由于霉菌的菌絲較粗較長,菌絲體疏松,因而形成的菌落也比較疏松,呈絨毛 狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀;大:菌落形態(tài)較大,一般比細(xì)菌和放線菌的菌落大幾倍到幾十倍,有時會長滿整個 培養(yǎng)皿;干:外觀干燥,不透明; 挑:菌落與培養(yǎng)基間的連接緊密,不易挑??; 顏色:由于基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子顏

3、色不同,不同的霉菌菌落表面呈現(xiàn)不同的 顏色,菌落正反面、邊緣與中心顏色常不一致。同一種霉菌在不同的培養(yǎng)基上或不同的培養(yǎng)條件下所形成的菌落特征可能有所不同。 但 同一種霉菌在相同的培養(yǎng)條件下和培養(yǎng)基上所形成的菌落特征相對穩(wěn)定。 菌落特征是霉菌鑒 定的重要依據(jù)之一。4、霉菌的菌絲形態(tài)構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位是菌絲。菌絲的寬度一般為3-10卩m比放線菌菌絲寬很多倍,其菌可伸長并產(chǎn)生分枝。許多分枝的菌絲相互交織在一起,稱為菌絲體。一部分菌絲存在于培養(yǎng)基質(zhì)中吸收營養(yǎng),稱為基內(nèi)菌線或營養(yǎng)菌絲。 另一部分菌絲向空中生長,稱為氣生菌絲。氣生菌絲一部分形成生殖細(xì)胞,也有部 分氣生菌絲生成生殖細(xì)胞的保護(hù)組織或其它

4、組織。4、霉菌的菌絲 從結(jié)構(gòu)來看,霉菌的菌絲有兩種: 無隔菌絲:低等霉菌如根霉、毛霉等 有隔菌絲:高等霉菌如青霉、曲霉等菌絲的孢子較大,在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無隔菌絲和孢子及巨大的孢子囊。5、霉菌的繁殖方式和繁殖結(jié)構(gòu) 霉菌主要靠形成各種無性孢子和有性孢子進(jìn)行繁殖。 霉菌的無性孢子: 厚垣孢子 節(jié)孢子 分生孢子 孢囊孢子6、食品中常見的霉菌 霉菌的種類很多,下面僅介紹一些常見的、與食品有關(guān)的菌屬。( 1)根霉菌屬( Rhizopus )現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)根霉有 20 多種,根霉有假根和葡匐枝,假根主要起固定和吸收營養(yǎng)的作 用。本屬的黑根霉能產(chǎn)生果酸酶,引起果實(shí)的腐爛及甘薯的軟腐,能產(chǎn)生反丁稀二酸,

5、 也是轉(zhuǎn)化甾族化合物的重要霉菌。2)曲霉菌屬( Aspergillus ) 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用的曲霉菌有 100 多種,在我國古代已利用曲霉菌制曲、釀酒、 制醬等。曲霉菌還可用于制造蛋白酶、檸檬酸等一些有機(jī)酸。曲霉菌在自然界分布 很廣,空氣中經(jīng)常含有曲霉菌的孢子。常引起食品、衣服、皮革等物品的發(fā)霉和腐 爛,有的菌株還可產(chǎn)生毒素,例如黃曲霉。曲霉菌具有發(fā)達(dá)的菌絲體,菌絲有隔膜,為多細(xì)胞菌絲。繁殖方式為無性和有 性繁殖。其菌落呈現(xiàn)各種顏色。3)青霉菌屬( Penicillium ) 青霉菌在自然界的分布也非常廣泛,土壤中常常有大量的青霉菌存在,在水果 和糧食上經(jīng)常發(fā)現(xiàn)青霉菌,已發(fā)現(xiàn)大約有幾百種。青霉菌

6、的菌絲體無色或淺色。菌 落是深綠色。青霉菌可引起果蔬等的病害,如引起柑桔的病害而造成較大損失。但有些青霉 菌能產(chǎn)生有經(jīng)濟(jì)價值的有機(jī)酸,如檸檬酸,葡萄糖酸等。在醫(yī)藥上常用的青霉素的 產(chǎn)生菌是產(chǎn)黃青霉。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)實(shí)驗(yàn)材料1、 菌種:培養(yǎng)法培養(yǎng)34天的根霉(Rhizopus sp .)、青霉(Penicillum sp .)和曲霉 (Aspergillus sp.)平板。2、其他物品:乳酸石炭酸溶液、載片、蓋片等。(二) 記錄三種霉菌的菌落特征微生物名稱大小表面形狀顏色與培養(yǎng)基結(jié)合程度嗅味(二)記錄三種霉菌的菌落特征2、霉菌個體形態(tài)觀察直接制片觀察:于潔凈載玻片上,滴一滴乳酸石炭酸液于載片中

7、央; 用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置于液滴中,再細(xì)心地將菌絲 挑散開;然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產(chǎn)生氣泡。 置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡。 挑菌和制片時要細(xì)心,盡可能保持霉菌自然生長狀態(tài)。加蓋玻片時切勿壓入氣泡,以免影響觀察。(1)水浸片法觀察(根霉與曲霉) 根霉:加熱至沸騰后觀察 曲霉:直接觀察第二節(jié) 微生物大小的測定、實(shí)驗(yàn)原理微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征,也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生 物大小的測定,需要在顯微鏡下,借助于特殊工具一測微尺,包括目鏡測微尺和鏡 臺測微尺。鏡臺測微尺適用于校正目鏡測微尺每個的相對長度。然后,根據(jù)微生物細(xì)胞相 當(dāng)于目鏡

8、測微尺的個數(shù),即可計算出細(xì)胞的實(shí)際大小。實(shí)驗(yàn)程序I(測定微生物的大?。y定的工具:目鏡測微尺鏡臺測微尺(測定微生物的大?。┠跨R測微尺的校正: 在高倍鏡下,看清鏡臺測微尺的刻度后,轉(zhuǎn)動目鏡,使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行, 移動推動器,使目鏡測微尺的0點(diǎn)與鏡臺測微尺的某一刻度重合, 然后,仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計算兩刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。由于鏡臺測微尺的刻度每格長lOim所以可得:目鏡測微尺每格長度(i)=(鏡臺測微尺格數(shù)x 10) /目鏡測微尺格數(shù)注意:校正目鏡測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件(特定的接物鏡、接目鏡、鏡 筒長度等)進(jìn)行,而且只能在這特定的情況

9、下才可重復(fù)使用。菌體大小的測定:取下鏡臺測微尺,將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物臺上,然后在油鏡下 用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。操作步驟1、裝目鏡測微尺2、校正目鏡測微尺3、菌絲體大小測定:將觀察的黃曲霉菌絲體直接進(jìn)行菌絲體大小的測定4、測定完畢后,取出目鏡測微尺用擦凈紙擦干凈,放回盒內(nèi)保存。第三節(jié)微生物的顯微計數(shù)? 血球計數(shù)板通常是一塊特制的厚載玻片,載玻片上有四條槽而構(gòu)成三個平臺。? 中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽而隔成兩半,每個半邊上面各刻有一個方格 網(wǎng)。每個方格網(wǎng)共分九大格,其中間的一大格又稱為計數(shù)室,微生物的計數(shù)就在此大格中進(jìn)行。? 常用的血球計數(shù)板的計數(shù)室有兩種規(guī)格的刻度網(wǎng)格。? 一種

10、是一個大方格分成 16個中方格,而每個中方格又分成25個小方格,即為16 X25。? 另一種是一個大方格分成 25個中方格,而每個中方格又分成16個小方格,即25 X16。? 但是不管計數(shù)室是那種規(guī)格,其計數(shù)室的小格數(shù)總是相同的,即16X 25= 25X 16 =400 (小格)計算每一個大方格邊長為 1mm則每一大方格面積為1mm2蓋上蓋玻片后,載玻片計數(shù)室與 蓋玻片之間的高度為 0.1mm,所以每個計數(shù)室(大方格)的體積為0.1mm3o在計數(shù)時,通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù),求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中的總菌數(shù)。然后再換算成1毫升菌液中的總菌數(shù)。(1ml = 1cm3= 1,00

11、0mm3)實(shí)驗(yàn)材料? 酵母菌懸液? 顯微鏡,血球計數(shù)板。蓋玻片,無菌滴管,吸水紙,擦鏡紙,香柏油、鏡頭洗液。1. 取清潔無油的血球計數(shù)板,在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。2. 取酵母菌液,搖勻,用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴,使菌液自行滲入,計數(shù)室內(nèi)不 得有氣泡。3. 用10X鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。4. 在10X鏡下計數(shù):計數(shù) 4個(或5個)中格的平均值,然后求得每個中格的平均值。乘上16 (或25)就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù),最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。5. 注意事項(xiàng):計上不計下,計左不計右。出芽計一半實(shí)驗(yàn)程序計數(shù)步驟:1. 取清潔無油的血球計數(shù)板,在計數(shù)室上面加蓋玻片。2. 取酵母菌液,搖勻,用

12、滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過多),使菌液自行滲入,計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。3. 靜置5分鐘后,將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上,先用低倍鏡找到計數(shù)板的大方格網(wǎng) 位置。尋找時光圈要縮小,光線要偏暗些,并將計數(shù)室移至視野中央。4. 在高倍鏡下計數(shù):隨機(jī)地計數(shù)五個中格內(nèi)的菌數(shù),然后求得每個中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的總菌數(shù),最后再換算到每毫升菌液中的含菌數(shù)量。由于菌體細(xì)胞在血球計數(shù)板上處于不同的空間位置,要在不同的焦距下才能看到,故觀察時必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)節(jié)器,方能數(shù)到全部菌體,以免遺漏。5. 計算方法:酵母菌細(xì)胞數(shù)/毫升 =(X1+X2+X3+X4+X5 /5*25 (或16)X

13、10X 1000X稀釋倍數(shù)6. 注意事項(xiàng)。計數(shù)時,為避免重復(fù)或遺漏計數(shù), 凡是遇到壓在方格線上的菌體, 一般以壓在底線和右側(cè)線 上的菌體計入本格內(nèi), 遇到有芽體的酵母時, 如果芽體和母體同等大時, 就按兩個酵母菌體 計數(shù)。7. 計數(shù)完畢后,血球計數(shù)板要立即清洗干凈,并用吸水紙吸干,最后用擦鏡紙擦干凈并放 回盒。將顯微計數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個中方格中的總菌數(shù);D表示菌液稀釋倍數(shù)。各中格中菌數(shù)TD二室平均個/ml12345第一值至 第二至第四節(jié) 四大類微生物的比較與分別1、四大類微生物菌落形態(tài)特征的比較2、制片和觀察方法的區(qū)別細(xì)菌干燥、固定后美藍(lán)染色、革蘭氏染色,用油鐿(100X 10)進(jìn)行觀察;酵母美藍(lán)水浸片染色,用高倍鏡(40 x 10)觀察;放線菌美藍(lán)蓋片染色,菌絲體和孢子一般用高倍鏡(40X 10)觀察;霉菌:乳酸石碳酸棉藍(lán)染色,菌絲體和孢子一般用高倍鏡(40X 10)觀察。3、個體形態(tài)與大小區(qū)別細(xì)菌:呈球狀、桿狀、螺旋狀,個體微小,小于1微米。放線菌呈分枝絲狀,菌絲無隔膜,單細(xì)胞,菌絲直徑與細(xì)菌相似,小于1微米。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗的多(約3-10um),常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍。? 酵母一般:呈球形、橢圓形。(15) umx (5

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