火焰原子吸收光譜法分析中藥大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅的形態(tài)

1、火焰原子吸收光譜法分析中藥大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅的形態(tài)摘 要：采取正辛醇水分配體系模擬中藥大葉羊蹄甲水煎液中鋅、銅、錳在人體胃腸中的分配情況，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定了大葉羊蹄甲及其水煎液、水煎液中水溶態(tài)鋅、醇溶態(tài)中鋅、銅、錳的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳的水煮溶出率較低（13.79%26.77%），該方法對(duì)各元素的加標(biāo)回收率在92.5%109.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd2.26%；鋅、銅、錳在正辛醇水分配體系中受酸堿性度影響較大。關(guān)鍵詞 原子吸收光譜法；大葉羊蹄甲；鋅；錳；銅；形態(tài)分析speciation analysis of zinc,meng,copper in bauhi

2、niaby flame atomic absorption spectrometryabstract: n- c8h17ohh2o system was used to study the distribution of zinc,meng,copper in bauhinia decoction in our stomach and intestine . the concentrations of total zinc,meng,copper, water-so lub le zinc,meng,copper and n- c8h17ohh2o luble zinc、meng、copper

3、 in bauhinia and compound of peach seed and safflower under gastric and in testinalacidity were analyzed by flame atomic absorption spectrometry . experimental results show that zinc,meng,copper in bauhinia and boiled dissolution rate low (13.79%26.77%). the recovery ratio s by standard addition wer

4、e in the range of 92.5%109.6% , and rsd less than 2.26%. relatively , t he resolution acidity had impact upon the distribution of zn , cu and mn in bauhinia in the medium of n-octanol / water system.keyword: flame atomic absorption spectrometry; bauhinia; zinc; meng; copper; speciation analysis目錄1 引

5、 言12 實(shí)驗(yàn)部分22.1 儀器和試劑22.2 火焰原子吸收光譜法工作條件22.3 實(shí)驗(yàn)方法32.3.1 水煎液的制備32.3.2 大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅含量的測(cè)定32.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制32.3.2.2 大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅總含量的測(cè)定32.3.2.3 水煎液中鋅、銅、錳含量的測(cè)定42.3.2.4 水煎液中鋅、銅、錳的形態(tài)分析43 結(jié)果與分析43.1 藥材大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳的總含量、水煎液中鋅、銅、錳含量及其關(guān)系探討43.2 水煎液中鋅、銅、錳的水溶態(tài)、醇溶態(tài)含量及胃腸酸度變化對(duì)它們存在形態(tài)的影響53.3 回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限54 結(jié) 論6參考文獻(xiàn)6致 謝71 引 言中

6、藥是我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥，中藥在療效方面也受到極大的認(rèn)可，但由于其用藥方式落后，往往以大劑量的草藥進(jìn)行煎煮，對(duì)于其中關(guān)鍵的藥理成分并不是很清楚，盡管已經(jīng)有少許常用草藥被制成中成藥，但更多的中藥治病成分的研究，仍是一個(gè)有待于我們長期努力的過程。多年臨床研究證實(shí)，中藥的藥效不僅與所含的有機(jī)成分有關(guān)，也與無機(jī)成分尤其是微量成分有密切關(guān)系1。近年來，通過測(cè)定中草藥中微量元素的含量來研究其對(duì)人類正常生理功能的影響，考察中草藥中微量元素的藥理活性及建立中草藥中微量元素質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是很有意義的2,3。中藥中微量元素對(duì)人體的作用并不決定于總濃度，而是取決于該元素所處化學(xué)形態(tài)的特性，在不同形態(tài)下即處于不同的價(jià)態(tài)、絡(luò)合

7、狀態(tài)和作用靶位環(huán)境，具有不同的親脂性和生物活性，表現(xiàn)出不同的藥效。因此對(duì)中藥中微量元素的形態(tài)進(jìn)行研究具有積極的現(xiàn)實(shí)意義2,3。大葉羊蹄甲又名老白花云南、洋紫荊廣東，以根、樹皮，葉及花入藥。根、樹皮全年可采，為豆科蘇木亞科常綠中等喬木，葉片有圓形、寬卵形或腎形，但頂端都裂為兩半，似羊蹄甲，故有此名。羊蹄甲（bauhinia variegata l），味澀，性涼。有清火解毒，涼血止血，收斂止瀉的功效。用以治療咯血，消化不良，急性胃腸炎，便秘等癥狀4。本實(shí)驗(yàn)采用中藥常用煎煮方式制取水煮液，采用正辛醇-水分配體系模擬中藥水煎液在人體腸胃中的分配情況。正辛醇是一種在結(jié)構(gòu)上與人體內(nèi)的碳水化合物和脂肪類似的

8、長鏈烷烴醇，藥理學(xué)中藥物鑒定中常用正辛醇-水萃取體系測(cè)定kow參數(shù)（(kow = 該化合物在正辛醇相和水相中的平衡濃度）以評(píng)價(jià)有機(jī)藥物的親脂性及生物活性，而中藥中的微量元素多與中藥所含的有機(jī)物以結(jié)合或絡(luò)合物的存在，用原子吸收光譜法測(cè)定大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳的總含量、水煎液及水煎液中水溶態(tài)、醇溶態(tài)中鋅、銅、錳的含量，求算出大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳的水煮溶出率、kow值，探討了酸度變化（人體的胃腸酸度）對(duì)鋅、銅、錳形態(tài)的影響，為深入探討中藥中微量元素在中藥藥性、藥效方面的作用機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)5-8。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 儀器和試劑aa-6300原子吸收分光光度計(jì)（日本島津公司）；銅、鋅、錳空心陰極燈；

9、電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；電熱恒溫干燥箱（天津市津北真空儀器廠）；電熱恒溫干燥箱（天津市津北真空儀器廠）；家用粉碎機(jī)。1000mg/ml銅、錳、鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液（國家鋼鐵材料測(cè)試中心制）；使用時(shí)用1% hno3稀釋成100mg/ml銅、鋅和錳標(biāo)準(zhǔn)使用液。硝酸、鹽酸、30%h2o2，均為分析純；高氯酸（優(yōu)級(jí)純），正辛醇（優(yōu)級(jí)純）；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。大葉羊蹄甲原藥（購于云南省西雙版納傣族自治州民族醫(yī)藥研究所），用自來水快速?zèng)_洗干凈后，再用去離子水洗23次，置于烘箱中，于60-65烘5h，取出冷卻后粉碎，過40目的篩，將篩好的粉末置于干燥器中備用。2.2 火焰原子吸收光譜法工作條件表1 火焰

10、原子吸收光譜儀操作條件tab.1 working conditions of the faas instrument元素element波長wavelength（nm）狹縫寬度slit（nm）燈電流current(ma)燃燒器高度combustor level（mm）空氣流量air flow rate（l/min）乙炔流量c2h2 flow rate（l/min）cu213.470.7127151.8mn279.650.7157152.0zn214.150.7107152.02.3 實(shí)驗(yàn)方法2.3.1 水煎液的制備制備時(shí)盡可能按照傳統(tǒng)中藥的煎法，與中醫(yī)臨床用藥接近。準(zhǔn)確稱取大葉羊蹄甲30.000

11、0g，加入到1000ml的燒杯中，向里加入300ml的去離子水，加熱煮沸并保持微沸1h，用中藥過濾袋濾擰，把藥渣放入燒杯中，加300ml去離子水按上述方法煎煮，過濾，將藥渣按上述方法煎煮，過濾，合并三次水煎液，將水煮液平均分成九份，三份為一組，進(jìn)行平行試驗(yàn)。2.3.2 大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅含量的測(cè)定2.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制移取100mg/ml鋅、銅標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，用1%的硝酸分別稀釋到100.00ml，制得濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml標(biāo)準(zhǔn)使用液；移取100mg/ml錳標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00、2.00、3.00、4.0

12、0、5.00ml，用1%的硝酸稀釋到100.00ml，制得濃度為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg/ml標(biāo)準(zhǔn)使用液，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定鋅、錳、銅的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.3.2.2 大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅總含量的測(cè)定準(zhǔn)確稱取三份原藥粉末個(gè)2.000g，加入15ml混酸（硝酸高氯酸=41），進(jìn)行加熱消解，消解至溶液澄清、有白色晶體析出、白煙冒盡時(shí)，停止加熱，取出冷卻，轉(zhuǎn)移到50ml的容量瓶中，用去離子水定容，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定鋅、錳、銅的吸光度。2.3.2.3 水煎液中鋅、銅、錳含量的測(cè)定取一組水煎液，各加混酸10ml，消化至白煙冒盡，有白色晶體析出時(shí)停止加熱，定容至50m

13、l容量瓶中，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定鋅、銅、錳的吸光度。2.3.2.4 水煎液中鋅、銅、錳的形態(tài)分析取二組水煎液，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)溶液的ph值，一組調(diào)為胃液的酸度ph=1.3，另一組調(diào)為小腸液的酸度ph=7.6，放置過夜，移入分液漏斗中，每份均加入正辛醇5ml，振蕩萃取2h，萃取兩次，合并兩次萃取的水相和有機(jī)相。水相按上述的消解，定容至50ml的容量瓶中，用火焰原子吸收光譜法測(cè)定水煎液中鋅、銅、錳水溶態(tài)的含量，用差減法求得醇溶態(tài)鋅、錳、銅的濃度。3 結(jié)果與分析3.1 藥材大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳的總含量、水煎液中鋅、銅、錳含量及其關(guān)系探討大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅的總含量，水煎液中鋅、錳、銅含量及

14、其鋅、錳、銅的水煮溶出率情況見表2。表2 大葉羊蹄甲中鋅、錳、銅的總含量、水煎液含量及其水煮溶出率tab.2 analytical results of (zinc, meng, copper) in bauhinia and its decoctionszncumn總含量（mg/g）52.788.45562.10水煎液含量（mg/g）7.282.05150.50水煮溶出率（%）13.7924.2126.77從表2可見，大葉羊蹄甲中錳含量最高，其次是鋅，銅最低，水煎液中錳、鋅、銅的含量同藥材中總含量存在對(duì)應(yīng)關(guān)系，但錳、鋅、銅的總量與水煮溶出量并不存在一一對(duì)應(yīng)關(guān)系。因此用微量元素總量來判斷水煎劑

15、型微量元素的藥效顯然是不合理的。不同微量元素其水溶性不同，水煎溶出率也有所不同，所以水煎后實(shí)際服入人體中的微量元素劑量與總量不存在一一對(duì)應(yīng)關(guān)系。中藥的藥效與所含微量元素的所處的具體形態(tài)密切相關(guān)。同時(shí)從表中還可以看出，錳含量最高（562.10 mg/g），其溶出率只有26.77%，而中藥水煎劑型則是常用的服用方式，改進(jìn)中藥水煮工藝或研究新的服用方法對(duì)提高微量元素的利用率又著積極的意義。3.2 水煎液中鋅、銅、錳的水溶態(tài)、醇溶態(tài)含量及胃腸酸度變化對(duì)它們存在形態(tài)的影響大葉羊蹄甲水煎液中鋅、銅、錳在胃酸度（ph= 1.39）及腸醇度（ph= 7.69）條件下水溶態(tài)、醇溶態(tài)含量測(cè)定結(jié)果見表3。表3 大葉

16、羊蹄甲水煎液中鋅、銅、錳在胃酸度（ph= 1.31）及腸醇度（ph= 7.61）條件下水溶態(tài)、醇溶態(tài)含量測(cè)定結(jié)果table 3 analytical results of water- soluble zinc, meng, copper and n- c8h17ohh2o soluble zinc, meng, copper in bauhinia under gastric and intestinal acidityzncumn水煎液含量（mg/g）7.282.05150.5胃酸度ph=1.3水溶態(tài)含量（mg/g）6.821.79138.0醇溶態(tài)含量（mg/g）0.460.2612.56

17、kow0.070.150.09腸醇度ph=7.6水溶態(tài)含量（mg/g）6.681.76138.9醇溶態(tài)含量（mg/g）0.600.2911.61kow0.090.160.08由表3可知：（1）大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳大部分的存在于水溶態(tài)中，只有少量的含量存在于醇溶態(tài)中；（2）鋅、銅的醇溶態(tài)含量隨ph值上升而增大，表明其生物活性有所提高，有利于微量元素參與人體內(nèi)代謝過程；（3）兩種ph條件下cu的生物活性均比zn、mn高。3.3 回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限為了考察方法的可靠性，用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表4。表4 回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和檢出限測(cè)定結(jié)果table 5 recovery ra

18、tio, relative standard deviation and detection limit元素element加標(biāo)量added（mg）測(cè)得量found（mg）回收率recovery（%）rsd（%）（n=3）檢出限detection limit（mg/ml；n=8）cu2.01.8592.51.470.0043mn150.0164.4109.60.890.0038zn10.09.5295.22.260.0081本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的鋅、銅、錳回收率在92.5%109.6%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.89%2.26%之間。4 結(jié) 論（1）不同微量元素其水溶性不同，水煎溶出率也有所不同，所以水煎后實(shí)際服

19、入人體中的微量元素劑量與總量不存在一一對(duì)應(yīng)關(guān)系。中藥的藥效與所含微量元素的所處的具體形態(tài)密切相關(guān)。中藥水煎劑型則是常用的服用方式，改進(jìn)中藥水煮工藝或研究新的服用方法對(duì)提高微量元素的利用率又著積極的意義。（2）正辛醇醇溶性微量元素具有較強(qiáng)的親脂性，具有較強(qiáng)的生物活性，如微量元素作為中藥主要有效成分，正辛醇醇溶性微量元素含量與中藥藥性、藥效存在密切關(guān)系。大葉羊蹄甲中鋅、銅、錳大部分的存在于水溶態(tài)中，只有少量的含量存在于醇溶態(tài)中；且鋅、銅的醇溶態(tài)含量隨ph值上升而增大，表明其生物活性有所提高，有利于微量元素參與人體內(nèi)代謝過程。參考文獻(xiàn)1 袁漢堯主編，臨床實(shí)驗(yàn)學(xué)m，廣東科技出版社，2002：1952 王夔，徐輝碧，唐任寰，,等. 生命科學(xué)中的微量元素m . 北京:中國計(jì)量出版社，1992. 489.3 曹治權(quán). 微量元素與中醫(yī)藥m. 北京:中國中醫(yī)藥出版社，1992：1974 云南省食品藥品監(jiān)督管理局編. 云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第三版傣族藥)m. 昆明:云南科技出版社,2007,12: 7.123.5 李順興,鄧南圣,劉肇謙. 火焰原子吸收光譜法分析中藥中鋅的形態(tài)j. 分析科學(xué)學(xué)報(bào),2002,18(2): 145-148.