無菌實驗室的管理要求

1、無菌實驗室的管理要求無菌實驗室的管理要求食品微生物實驗室的無菌間應(yīng)制定質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)，并設(shè)專人負(fù)責(zé)無菌間的定期環(huán)境監(jiān)測工作。對無菌室的管理可遵循以下的原則:1. 無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間與緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級,室內(nèi)溫度保持 在20-24 C ,濕度保持在45-60%。超凈臺潔凈度應(yīng)達(dá)到00級。2. 工作人員進(jìn)入無菌室前必須用肥皂或消毒液洗手消毒然后在緩沖間更換專用工作服 鞋,帽子，口罩與手套（或用70%的乙醇再次擦拭雙手）,方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作。3. 無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進(jìn)行 吹風(fēng)。操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)關(guān)掉紫外燈4. 人

2、員進(jìn)入無菌室要穿無菌衣、帽、口罩與專用鞋非工作人員不得隨意進(jìn)入5. 無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液如5%的甲酚溶液,70 %的酒精,0、1%的新潔爾滅溶液 等。6. 無菌室內(nèi)配備紫外燈進(jìn)行空氣消毒應(yīng)定期用適宜的消毒液70%酉精或0、2%新吉爾滅） 滅菌清潔,以保證無菌室的潔凈度符合要求。7. 無菌室應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。每日進(jìn)行濕式小掃除，每周進(jìn)行大掃除, 每月進(jìn)行空氣與實驗臺表面的細(xì)菌學(xué)檢測，各項指標(biāo)控制在最低標(biāo)準(zhǔn)，符合無菌室的技 術(shù)要求。8. 嚴(yán)防一切滅菌器材與培養(yǎng)基污染已污染者應(yīng)停止使用。9. 需要帶入無菌室使用的儀器、器械、平皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)用適宜的方法 滅

3、菌。10. 供試品在檢查前,應(yīng)保持外包裝完整不得開啟，以防污染。檢查前，用70%的酒精棉消毒 外表面。11. 無菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔。操作完畢,應(yīng)及時清理無菌室用2%-3煤酚皂溶液消毒擦拭工作 無菌實驗室的管理要求臺面，不得存放與實驗無關(guān)的物品。再用紫外燈輻照滅菌。需30W紫外燈，距離在1、0m 處照射時間不少于30min,使用紫外燈,應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作以免引起損傷, 燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭除去上面灰塵與油垢以減少紫外線穿透的影響。12. 處理與接種食品標(biāo)本時，進(jìn)入無菌間操作,不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗 傳遞。13. 無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下

4、取內(nèi)徑90mr的無菌培養(yǎng)皿若干 無菌操作分別注入融化并冷卻至約45C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約ml,放至凝固后,倒置于 3036C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時,證明無菌后,取平板35個,分別放置工作位置的左中右等 處開蓋暴露3(分鐘后，倒置于3036C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。10(級潔凈區(qū)平板 雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落,10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度應(yīng)對 無菌室進(jìn)行徹底消毒直至重復(fù)檢查合乎要求為止。無菌操作基本技術(shù)及要求1. 實驗進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(laminaflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%勺 酒精擦拭無菌操作抬面并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始

5、實驗操作。2. 每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì) 胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%勺酒精擦拭無菌操作抬面。操作 間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作。3. 、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等 可以暫時放置其它實驗用品用完即應(yīng)移出以利于氣流之流通。實驗用品以70%勺酒精 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域勿在邊緣的非無菌區(qū) 域操作。4. 小心取用無菌之實驗物品避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或就是容器瓶口亦不要在 打開之容器正上方操作實驗。容器打

6、開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身;傾斜約45角取用,r無菌實驗室的管理要求盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。5. 工作人員應(yīng)注意自身之安全須穿戴實驗衣及手套后才進(jìn)行實驗。對于來自人類或就是 病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺（至少Classll）。操 作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠類物質(zhì)的產(chǎn)生小心毒性藥品，例如DMS及TPA等,并避免 尖銳針頭之傷害等。6. 使用無菌瓶內(nèi)的溶液時，不可將無菌敷料堵塞瓶口傾倒無菌溶液，或直接伸入溶液瓶內(nèi) 蘸取,以免污染剩余的溶液。7. 無菌包內(nèi)物品不慎污染或無菌包浸濕外界微生物可滲入包內(nèi)造成污染，需重新消毒。8. 戴手套時應(yīng)注意未戴手套的手不可觸及手套外面而戴手套的手則不可觸及未戴手套的 手或另一手套的里面。戴手套后如發(fā)現(xiàn)破裂應(yīng)立即更換。脫手套時，須將手套口翻轉(zhuǎn)膠 下，不可用力強拉手套邊緣或手指部分以免損壞。9. 每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照以檢查無菌操作的可靠性。10. 吸取菌液時，必須用吸耳球吸取切勿直接用口接觸吸管。11. 接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。12. 帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5嘛蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒24小 時后取出沖洗。13. 如有菌液灑在桌上