病原生物學專業(yè)畢業(yè)論文[精品論文]抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因pVAX1SjHGPRT·SDISP多價疫苗的構(gòu)建及功能的研究

1、病原生物學專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗的構(gòu)建及功能的研究關(guān)鍵詞：日本血吸蟲 生殖產(chǎn)卵編碼基因 多價疫苗 hgprt sdisp 免疫保護摘要：本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥

2、嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一

3、步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax

4、1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdi

5、sp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、

6、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30

7、的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相

8、比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組

9、免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。正文內(nèi)容 本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)

10、譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚

11、鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdi

12、sp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗

13、pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行

14、免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdis

15、p、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p&l

16、t;0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-

17、sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際

18、中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性

19、評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgp

20、rt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pva

21、x1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組

22、同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表

23、達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（

24、p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-s

25、disp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的

26、免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3

27、.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵

28、編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增

29、全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1

30、空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sj

31、sdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/

32、sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsd

33、isp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea

34、26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，

35、sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并

36、進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp

37、為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注

38、射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，

39、而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比

40、各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdis

41、p，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前

42、期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。

43、在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將sjhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pv

44、ax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。

45、 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pva

46、x1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明

47、小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax

48、1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjh

49、gprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與

50、多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長

51、發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和pcdna3.0/sjsdisp，其動物實驗及安全性評價顯示該核酸疫苗具有較好的免疫保護力，且對家兔局部肌肉刺激反應輕微，對豚鼠無全身過敏反應。但單一的核酸疫苗在體內(nèi)誘導出的有效的保護力尚不足以完全。為了能進一步提高抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼相關(guān)基因sjhgprt和sjsdisp單價核酸疫苗的保護效果，本研究充分利用dna疫苗易于構(gòu)建，易于生產(chǎn)的特點，將s

52、jhgprt、sjsdisp的編碼基因以“串聯(lián)”方式插入到同一人用載體pvax1上，構(gòu)建多價共表達dna疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并進行動物實驗，觀察其免疫保護力。 研究目的: 1、針對抗日本血吸蟲生殖產(chǎn)卵編碼基因sjhgprt、sjsdisp，構(gòu)建單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp，并獲得良好的表達； 2、觀察并比較單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp免疫小鼠產(chǎn)生的保護力。 研究方法: 1、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pva

53、x1/sjsdisp及多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp的構(gòu)建。 分別以pcdna3.0/sjhgprt、pcdna3.0/sjsdisp為模板，設(shè)計引物擴增sjhgprt、sjsdisp，用overlap法擴增全長的sjhgprt-sdisp，分別將擴增產(chǎn)物鑒定后與真核質(zhì)粒載體pvax1連接，轉(zhuǎn)化至dh5細胞。對三種陽性克隆鑒定并測序證實之。 2、單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp和多價疫苗sjhgprtsdisp的表達，及其對免疫小鼠的保護性效果觀察。 10只昆明小鼠隨機分成5組：a組為pvax1/sjhgprtsdisp多價疫苗組，b組為pvax1/

54、sjsdisp免疫組，c組為pvax1/sjhgprt免疫組，d組為pvax1對照組，e組為ns組。分別提取以上質(zhì)粒，以100g/只經(jīng)左腿股四頭肌注射昆明小鼠，14d后取肌肉組織切片進行酶免疫組織化學染色，同時設(shè)pvax1空載體、ns陰性對照組，觀察其表達。 50只昆明小鼠隨機分成5組（a-d組同上），大量提取以上質(zhì)粒，每只小鼠100g或等量ns經(jīng)左腿股四頭肌注射進行免疫。4周后以201條尾蚴貼腹感染，感染6周后檢測減蟲率、減卵率。 研究結(jié)果: 1、pcr、kpn和xba雙酶切及測序均顯示重組質(zhì)粒的插入序列分別與目的基因orf完全一致，說明單價疫苗pvax1/sjhgprt、pvax1/sjs

55、disp和多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp構(gòu)建成功。 2、昆明小鼠肌肉組織酶免疫組織化學染色顯示免疫組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的棕黃色顆粒，而陰性對照組肌細胞呈陰性。證實pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprtsdisp均能在小鼠肌肉細胞內(nèi)成功表達。 3、pvax1/sjhgprt-sdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt免疫小鼠后分別獲得了42.20、36.40、25.30的減蟲率，68.04、23.41、52.55的每雌子宮減卵率和72.96、45.40、69.91的每克肝減卵率，與ns組比較各組均有顯著性差異（p

56、<0.05）；pvax1/sjhgprtsdisp、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt各免疫組與相應的空質(zhì)粒組相比各指標均具有顯著性差異（p<0.05）；多價疫苗pvax1/sjhgprtsdisp組與單價疫苗組相比，減蟲率、肝減卵率無顯著性差異（p>0.05），但每雌子宮減卵率有顯著性差異（p<0.05）；單價疫苗pvax1/sjhgprt組與pvax1/sjsdisp組相比，減蟲率無顯著性差異（p>0.05），但肝減卵率和每雌子宮減卵率均有顯著性差異（p<0.01）；單價與多價疫苗組的減

57、卵率均明顯高于減蟲率。 結(jié)論: 1、成功構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pvax1/sjhgprt、pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt-sdisp，并在昆明鼠肌肉細胞內(nèi)均獲得良好表達。 2、單價疫苗pvax1/sjsdisp、pvax1/sjhgprt與多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp免疫小鼠均能產(chǎn)生較好的保護力；多價疫苗pvax1/sjhgprt-sdisp組與單價疫苗組免疫小鼠產(chǎn)生相似的抗日本血吸蟲攻擊感染的保護力，但多價疫苗組免疫昆明小鼠的每雌子宮減卵率可以產(chǎn)生比單價疫苗更優(yōu)的免疫保護效果；單價疫苗pvax1/sjhgprt組免疫小鼠后每雌子宮減卵率和肝減卵率效果明顯優(yōu)

58、于pvax1/sjsdisp組；構(gòu)建的sjhgprt和sjsdisp單價與多價疫苗，在抗雌蟲減卵、抗卵胚發(fā)育和生殖的效果明顯優(yōu)于減蟲效果。本實驗室前期的研究已經(jīng)證實，日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kda（siea26-28kda）天然分子可誘導宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲生殖產(chǎn)卵、抗卵胚發(fā)育的免疫效果，但由于在批量生產(chǎn)中存在著難以克服的瓶頸，不可避免地制約了其在實際中的應用。因此，通過siea26-28kda抗血清免疫識別、肽指紋圖譜、質(zhì)譜分析，獲得了同源性較高、免疫原性較強的蛋白質(zhì)斑點，其中包括與日本血吸蟲次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hgprt），琥珀酸脫氫酶鐵硫蛋白（sdisp）相匹配的斑點，并證實hgprt、sdisp分別與細胞的核苷酸代謝、血吸蟲的生長發(fā)育、生理代謝密切相關(guān)，可以作為抗日本血吸蟲病天然分子基因疫苗研究的靶標。在此基礎(chǔ)上本實驗室克隆了sjhgprt和sjsdisp全長cdna，并以，sjhgprt和sjsdisp基因為目的片段構(gòu)建了單價核酸疫苗pcdna3.0/sjhgprt和