海南熱帶蘭花抗氧化活性的研究

1、海南師范大學(xué)本科生畢業(yè)論文題目：海南熱帶蘭花的抗氧化活性研究系別：化學(xué)系學(xué) 院：化學(xué)與化工學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計）是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究 工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外， 本論文 （設(shè)計）中沒有抄襲他人研究成果和偽造數(shù)據(jù)等行為。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文 （設(shè)計）中作了明確的說明并表 示謝意。論文（設(shè)計）作者簽名： 日期： 本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）使用授權(quán)聲明海南師范大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交畢業(yè)論文（設(shè) 計）的復(fù)印件和磁盤，允許畢業(yè)論文（設(shè)計）被查閱和借閱。本人授權(quán)海 南師范大學(xué)可以

2、將本畢業(yè)論文（設(shè)計）的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫 進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存、匯編畢業(yè)論文。論文（設(shè)計）作者簽名： 日期： 指導(dǎo)教師簽名： 日期：目錄1 引言 12 實驗部分 22.1 主要儀器、試劑和材料 22.2 實驗方法 32.2.1 實驗原理 32.2.2 羥自由基檢測 32.2.3 羥自由基清除率的測定 33 結(jié)果與分析 43.1熒光光譜 43.2實驗原理驗證 43.3實驗條件的研究 63.3.1 反應(yīng)時間的影響 6332 fQ溶液用量的影響7333 FeS04溶液用量的影響 83.4 正交實驗確定最佳實驗條件 93.5 方法精密度測定 103.6 方法準(zhǔn)確度測

3、定 103.7 熱帶蘭花水提物對羥基自由基的清除作用 113.8 石斛蘭玉玲瓏水提物的抗氧化活性及最佳的提取工藝研究 123.8.1 浸泡時間的影響 123.8.2花瓣質(zhì)量的影響 133.8.3超聲時間的影響 143.8.4 浸泡溫度的影響 153.8.5 正交試驗確定最佳提取條件 163.8.6 熱帶蘭花各個部位的抗氧化性 174 結(jié)論 18致謝 18參考文獻(xiàn) 18海南熱帶蘭花的抗氧化活性研究摘要：目的：考察幾種海南熱帶蘭花的抗氧化活性。方法：采用羅丹明-6G為熒光探針，分別測定幾種海南熱帶蘭花的的水提物對Fen to n反應(yīng)生成的羥基自由基的清除率，優(yōu)化了體系的測量條件，篩選出了對羥基自由

4、基具有較好清除率的蘭花的最好提取工藝條件。實驗結(jié)果表明，體系的 最佳測量條件：羅丹明-6G與H2O2用量的摩爾比為1: 60，與FeSO4用量的摩爾比為1 : 20，反 應(yīng)時間40min。最佳的提取條件為：m(石斛蘭玉玲瓏)：v(水)=2.5 : 50 (g/mL),提取溫度50 C, 浸泡3 h，超聲提取60 min，對羥自由基率的清除率可達(dá)88.35%，海南熱帶蘭花對羥自由基有清除作用，其中石斛蘭玉玲瓏的清除效果最好。關(guān)鍵詞：羅丹明-6G; Fenton反應(yīng)；羥自由基；熱帶蘭花Tropical orchids of antioxidant activityAbstract : To inv

5、estigate antioxidant activity of several Hainan tropical orchids. Methods: Rhodam in e-6G as the fluoresce nt probe, to measure hydroxyl radical scave nging rate in Fenton react ion of water extract of several Tropical orchids, optimize the system of measurement conditions, and selected the best orc

6、hid extract ion process on hydroxyl radical good cleara nee. The results showed that the best measuringcondition : the amount of rhodamine-6G and H2O2 molar ratio of 1:60, and the amount of the molar ratio of FeSO 1:20, reaction time:40min. The best extraction conditions: m (De ndrobium exquisite ja

7、de): v (water) = 2.5:50 (g / mL), extract ion temperature 50 C , soaked 3 h, ultras onic extract ion of 60 min, the cleara nee rate of hydroxyl radical rate was 88.35%, Tropical Orchid has Scavenging Action of hydroxyl radicals, Den drobium jade exquisite have best removal effectio n.Key words:Rhoda

8、mine-6G; Fenton reaction; hydroxyl radical ; tropical orchid1引言熱帶蘭花為蘭科草本植物，熱帶蘭花品種繁多，可分為石斛蘭、文心蘭、莫氏蘭 等。石斛蘭有很好的藥用價值，據(jù)神農(nóng)本草經(jīng)中記載石斛蘭有滋養(yǎng)胃陰，生津止渴, 兼能清胃熱。主治熱病傷津，煩渴、舌干苔黑?，F(xiàn)代研究表明，石斛蘭中含石斛堿等 生物堿，粘液質(zhì)、淀粉等。有一定解熱鎮(zhèn)痛作用；能促進(jìn)胃液分泌，助消化；有增強(qiáng) 新陳代謝、抗衰老等作用?？茖W(xué)表明，人類的許多疾病是由于體內(nèi)存在過剩的羥基自由基0H而引起的。常見的有心腦血管疾病，腫瘤、老年性癡呆、白內(nèi)障、糖尿病、肝病以及過早衰老等。 傳統(tǒng)

9、的一些人工合成抗氧化劑如丁基羥基茴香醚 （BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）、沒食 子酸甲酯（PG）等，由于有較大的毒副作用，許多國家已經(jīng)停止或嚴(yán)格限制它們的使用， 從植物原料中提取天然抗氧化劑是生物醫(yī)藥和食品的發(fā)展方向之一。蘭花中含有大量 的黃酮和多糖，這些天然的有機(jī)分子均有可能被羥基自由基氧化，從而具有清除羥基 自由基的作用。目前，常用的抗自由基活性檢測方法主要有： 化學(xué)發(fā)光法 2、比色法3、電子自 旋共振法4、熒光光譜法5,6等。本實驗采用Fenton反應(yīng)生成0H，在稀硫酸介質(zhì)中 Fe2+-H2O2體系產(chǎn)生的羥自由基可以氧化羅丹明-6G使其熒光猝滅，體系的熒光強(qiáng)度降 低。抗氧化劑（熱帶蘭

10、花水提物）與體系中的羅丹明 -6G爭奪羥自由基從而使體系熒 光強(qiáng)度減弱程度減小， 據(jù)此原理建立了一種測定抗氧化劑對羥自由基清除作用的新方 法。本方法靈敏度高、操作簡便迅速，適用范圍廣泛，是測定羥基自由基和篩選天然 抗氧化食品的有效方法之一。海南擁有得天獨厚的自然環(huán)境優(yōu)勢，是我國熱帶蘭花生產(chǎn)最佳區(qū)域。目前海南熱 帶蘭花產(chǎn)業(yè)化發(fā)展程度較低， 主要集中為種植及鮮花銷售上 7-10，如文心蘭、 莫氏蘭、 石斛蘭等熱帶蘭花的種植栽培 11-13。而一些高附加值的蘭花深加工產(chǎn)品，如蘭花茶、 蘭花保健品、蘭花化妝品等市場目前尚未開發(fā)。本文將對海南熱帶蘭花的抗氧化活性 進(jìn)行研究，為綜合開發(fā)利用海南熱帶蘭花提供

11、理論依據(jù)和新的發(fā)展方向。2 實驗部分2.1 材料、試劑和儀器材料：石斛蘭：彩虹、迷人蕉、約定、玉玲瓏、花蝴蝶、綠意、艾瑪、暢想、玉觀音；莫氏蘭：小淘氣、小斑吉、金色陽光、午后陽光、丹頂鶴、黛安娜 ； 蜻蜓蘭：紅寶石、夢妮、貝莎、美洲豹、紫氣東來 ;文心蘭：黃金 3 號試劑：羅丹明-6G （ New Jersey USA分析純）；FeSC4 （天津市化學(xué)試劑一廠，分 析純）； H2O2（ 30%，廣州市番禺力強(qiáng)化工廠，分析純） ；抗壞血酸（廣東光華化學(xué)廠 有限公司，分析純）;H2SO4溶液（98%,廣州市東紅化工廠，分析純）;儀器：RF-5301PC熒光分光光度計（日本島津）;BS124S電子天

12、平（德國賽多利 斯股份有限公司） ； SK2200H 超聲波發(fā)生器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司） ； DF-101S 集熱式磁力攪拌器（金壇市金南儀器制造有限公司）2.2 實驗方法2.2.1 實驗原理依據(jù)文獻(xiàn)14-15，在稀硫酸介質(zhì)中，F(xiàn)enton反應(yīng)是以H2Q為氧化劑，以Fe2+為催化 體系的氧化法。其反應(yīng)機(jī)理如下：Fe2+ + HLQ Fe3+ + OH- + OH3+2+-+Fe + H 2Q2 Fe + O- + 2H OH + Fe2+ Fe3+ + OH- O2- + Fe 3+ Fe2+ + O22凈反應(yīng)：2HO2 Fe 2H2O + O2所產(chǎn)生的OH與羅丹明-6G作用后使體系的熒

13、光強(qiáng)度下降，熒光強(qiáng)度的變化值 與OH的量有關(guān)，由此可以測定OH的產(chǎn)生量。海南熱帶蘭花水提物的加入會與體 系中的羅丹明-6G爭奪 OH從而使體系熒光強(qiáng)度減弱程度受到抑制。 根據(jù)抑制程度來 計算幾種熱帶蘭花的抗氧化性的強(qiáng)弱。2.2.2 羥自由基檢測在室溫（T=252C）下，在兩支10mL比色管中分別加入I.OmL 0.01mmol/L羅 丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4溶液，向其中一支再依 次加入0.6mL 1mmol/LH 2O2溶液，2.0mL 0.1mmol/L FeSO4溶液，分別加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻， 反應(yīng)40min,于入ex/入em=346/545n入射和

14、出射光譜狹縫分別為 5nm和3nm處測定 參比溶液熒光強(qiáng)度（Fo）與反應(yīng)溶液的熒光強(qiáng)度（F）,計算試液的熒光猝滅值厶F （ F =Fo卡）并以此間接測定OH的產(chǎn)生量。2.2.3 羥自由基清除率的測定在2.2.2所述體系中加入一定量的羥自由基清除劑（抗壞血酸 V。，按2.2.2的 操作測定加入羥自由基清除劑后溶液的熒光強(qiáng)度 F ，羥自由基清除率的計算方法如 下：錯誤！未找到引用源。X 100%（2-1 ）2.2.4 熱帶蘭花（玉玲瓏）的水提物的提取及抗氧化活性研究運用單因素實驗和正交實驗考察花瓣的質(zhì)量 , 超聲時間，浸泡超聲溫度三個影響 因素對熱帶蘭花（玉玲瓏）的水提物的抗氧化活性影響，并篩選了

15、最佳的提取工藝條 件。3結(jié)果與分析3.1熒光光譜原理分析在346nm激發(fā)光的照射下，羅丹明-6G溶液的最大發(fā)射峰位在545nm, Fenton反 應(yīng)產(chǎn)生的0H可以將其氧化并使熒光強(qiáng)度顯著降低，加入羥自由基清除劑 （抗壞血酸 VC）后，與體系中的羅丹明-6G爭奪羥自由基從而使體系熒光強(qiáng)度減弱程度減小， 但熒 光發(fā)射峰位保持不變。熒光光譜如圖1所示。1. 羅丹明-6G（ aq） + H2SQ（aq）2.羅丹明-6G（ aq）+ H2SQ （aq）+ H2O2 （ aq） + FeS04（ aq）3.羅丹明-6G（ aq）+ H 2SQ （ aq）+ H2O2 （ aq） + FeS04（ aq）

16、+VC （aq）圖1熒光光譜3.2實驗原理驗證取四支10mL比色管，按表1分別加入相應(yīng)試劑，定容至10mL，搖勻，反應(yīng)40min， 分別測定其熒光強(qiáng)度。實驗結(jié)果如表 1和圖2所示。由表1、圖2可得結(jié)論，號樣的熒光強(qiáng)度很大，證明羅丹明 -6G本身產(chǎn)生了特征熒光；號樣的的熒光強(qiáng)度介于、號樣之間，說明抗壞血酸（V?？梢?0H反應(yīng)；號樣的熒光強(qiáng)度最低，說明 0H可以使羅丹明-6G熒光猝滅；號樣與號 樣的熒光強(qiáng)度大致相等，證明抗壞血酸（V。不能和羅丹明-6G反應(yīng)。據(jù)此可知，F(xiàn)en to n反應(yīng)生成的 OH可以將羅丹明-6G氧化并使其熒光猝滅，抗 氧化劑（VC與羅丹明-6G爭奪 0H使熒光強(qiáng)度減弱程度降低

17、，而不是對羅丹明-6G的熒光猝滅才導(dǎo)致溶液熒光強(qiáng)度的改變表1實驗原理的驗證樣品R6G/mLHSQ/mLHO/mLFeSQ/mLVC/mL熒光強(qiáng)度F11.00.18000494.821.00.180.62.02.0376.531.00.180.62.0038.2741.00.18002.0496.31. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液2. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+ H2O2溶液+ FeS04溶液+VC溶液3. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+ H2Q溶液+ FeSQ4溶液4. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+VC溶液圖2實驗原理的驗證3.3實驗條件的研究3.3.1反應(yīng)時間的影響按

18、表2加入各種反應(yīng)試劑，從反應(yīng)10min起，每隔5min測定一次熒光強(qiáng)度，結(jié) 果表明，反應(yīng)30min以內(nèi)，體系熒光強(qiáng)度隨反應(yīng)時間的增長而下降，反應(yīng)30min以后, 熒光強(qiáng)度下降的趨勢變緩。實驗數(shù)據(jù)見表 2和圖3。表2反應(yīng)時間對熒光變化的影響樣品R6G/mlH2SO4/mlH2O2/mlFeSO/ml時間F11.000.180.402.001048.3721.000.180.402.001540.5431.000.180.402.002032.9341.000.180.402.002527.8351.000.180.402.003025.3461.000.180.402.003525.3471.0

19、00.180.402.004025.7681.000.180.402.005025.67圖3反應(yīng)時間對熒光變化的影響3.3.2 H2O2溶液用量的影響測量 1mmol/L H2O2溶液的加入量分別為為 O.IOmL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL、0.60mL、0.70mL時的各樣品的熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，當(dāng)羅丹明6G與H2O2的摩爾比在1:10-1:40范圍時熒光強(qiáng)度隨著H2O2的加入量的增加而降低，在摩爾比為1： 50之后，熒光強(qiáng)度幾乎不變。實驗數(shù)據(jù)見表3和圖4示。表3 H2O2溶液用量的影響樣品R6G/mlH2O2/mlFeSO/mlH2SO4/ml時間摩爾比F11

20、.000.102.000.18351:10117.921.000.202.000.18351:2057.4531.000.302.000.18351:3039.5041.000.402.000.18351:4025.8551.000.502.000.18351:5020.9961.000.602.000.18351:6020.3871.000.702.000.18351:7022.2981.000.802.000.18351:8020.48圖4 H2O2溶液用量的影響3.3.3 FeSQ溶液用量的影響測量 O.1mmol/L FeSO4溶液的加入量分別為 0.40 mL、0.80 mL、1.2

21、0 mL、1.60 mL2.00mL、2.40 mL、2.80 mL時的各樣品的熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明，當(dāng)羅丹明-6G與FeSC4 溶液的摩爾比為1:4-1:16范圍時，隨著FeSC4溶液加入量熒光強(qiáng)度下降較明顯，在此 之后熒光強(qiáng)度下降較緩。實驗數(shù)據(jù)見表 4和圖5。表4 FeS04溶液用量的影響樣品R6G/mlH2O2/mlFeSO/mlH2SO4/ml時間摩爾比F11.000.400.400.18351:4225.021.000.400.800.18351:8107.731.000.401.200.18351:1262.1341.000.401.600.18351:1645.5951.000.4

22、02.000.18351:2033.3161.000.402.400.18351:2420.7071.000.402.800.18351:2816.33圖5 FeS04溶液用量的影響3.4正交實驗確定最佳實驗條件綜合考慮，選擇羅丹明-6G與FeSQ溶液的摩爾比(A),羅丹明-6G與H2O2溶液 的摩爾比(B)，反應(yīng)時間C(min)三個影響因素，設(shè)計三因素三水平的正交實驗來確定 最佳實驗條件，因素水平設(shè)計見表 5。實驗結(jié)果如表6所示。表5 因素水平表因素ABC11： 161： 503021: 181: 603531: 201: 7040表6正交實驗的結(jié)果與分析樣品ABC熒光強(qiáng)度F F11161:

23、503042.31383.121161:603528.95396.431161:704030.45394.941181:503537.66387.751181:604028.19397.261181:703026.78398.671201:504025.19400.281201:603020.85404.591201:703525.95399.5K1117411711186K2118411981184K3120411931192k1391.5390.3395.4k2394.5399.4394.5k3401.4397.7397.5極差R9.99.12.9主次順序A B C優(yōu)水平A3B2C3優(yōu)組合

24、A3B2C3由表6正交實驗分析可知，測定體系熒光強(qiáng)度的實驗條件最優(yōu)組合為： A3 B2 C3, 即羅丹明-6G與H2O2溶液的摩爾比為1: 60;羅丹明-6G與FeSC4溶液的摩爾比為1： 20反應(yīng)時間為40min；也即：0.01mmol/L羅丹明-6G溶液用量為1mL，0.1mol/L H2SO4-溶液用量為0.18mL, 1mmol/L的H2O2溶液用量為0.6mL, 0.1mmol/L的FeSC4溶液 用量為2mL，反應(yīng)時間為40min。由表6極差分析結(jié)果顯示,因素影響主次順序為A BC, 即:羅丹明-6G與FeSC4 溶液的摩爾比為主要因素，羅丹明-6G與H2O2溶液的摩爾比為次要因素

25、，反應(yīng)時間 為不重要因素。3.5方法精密度測定在3.4所得最佳的實驗條件下，按照2.2.3所述方法進(jìn)行精密度實驗。即:在10mL 比色管中依次加入1.0mL 0.01mmol/L羅丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4溶液， 0.6mL 1mmol/L的H2O2溶液，同時加入 1.0mL 1mmol/L Vc溶液，然后加入 2.0mL 0.1mmol/L的FeSC4溶液，反應(yīng)時間是40min，平行測定熒光強(qiáng)度6次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的計算公式如下，實驗結(jié)果如表 7所示。； 2(3-1)(3-2)標(biāo)準(zhǔn)偏差計算公式： 標(biāo)準(zhǔn)差S = （X X） n 1相對標(biāo)準(zhǔn)偏差計算公式：rsd =m

26、表7方法的精密度實驗樣品F樣F樣-FOH清除率/ %1205.9193.346.822208.8196.247.533211.6199.048.204211.6199.148.215216. 4203.849.366206.4193.846.94平均值210.1197.547.84RSD (%)1.98其中 Fo =425.4F=12.59 F=Fo-F=412.8本實驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.98%，這表明本方法具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。3.6方法準(zhǔn)確度測定在選定的最佳實驗條件下進(jìn)行工作曲線的繪制，分別加入1mmol/L抗壞血酸（VC）溶液0.20mL、0.60mL、1.00mL，按方法2.2.

27、3測定體系的熒光強(qiáng)度。得到線 性回歸方程為 丫= 70.90375 X+58.05008,相關(guān)系數(shù)R=0.9993。另取2支比色管，在實 驗最佳條件下，分別加入1mmol/L抗壞血酸（VC）溶液0.30mL、0.90mL，采用同樣 的方法測定體系的熒光強(qiáng)度。結(jié)果如表 8和圖6所示。表8方法準(zhǔn)確度的測定樣品R6G/mlH2SO4/mlH2O2/mlFeSCh/mlVCF11.000.180.602.000.2072.8421.000.180.602.000.6099.3731.000.180.602.001.00129.641.000.180.602.000.3079.9251.000.180.

28、602.000.90121.2圖6方法準(zhǔn)確度的測定由公式3-3計算得到，當(dāng)體系加入 VC體積為0.3mL和0.9mL時，相對誤差分別 為0.76%和-0.51%，說明該實驗所采用的方法系統(tǒng)誤差較小，準(zhǔn)確度較高。3.7海南熱帶蘭花水提物對羥自由基的清除作用將蘭花花瓣稱取1g，放在50ml錐形瓶中，加水50.00ml,在室溫下（25 C左右）， 浸泡3h，超聲60min,取水提物1.00ml，在本實驗選定的體系最優(yōu)條件下，即0.01mmol/L 羅丹明-6G溶液用量為1mL 0.1mol/L HSQ溶液用量為0.18mL, 1mmol/L的HO溶液 用量為0.6mL, 0.1mmol/L的FeSO

29、溶液用量為2.0mL，反應(yīng)時間為40min,測定幾種 熱帶蘭花水提物對羥基自由基的清除率。結(jié)果見表9。結(jié)果表明，石斛蘭中玉玲瓏的水提物對羥基自由基的清除很好。表9熱帶蘭花的花瓣水提物對羥基自由基的清除作用名稱拉丁文名F OH青除率/ %石斛蘭彩虹Den. Chaopraya GemJBura na jabe-compactum314.961.06石斛蘭迷人蕉283.154.20石斛蘭約定Den. Woon Len g Compactum235.543.92石斛蘭玉玲瓏356.269.98石斛蘭綠意Den. Bura na Gree n334.465.27石斛蘭艾瑪Den. Emma White

30、323.963.00石斛蘭暢想Den. Emma White298.457.49石斛蘭玉觀音Den. Burana jabe Compactum293.156.36文心蘭黃金3號One. Gower Ramsey Gold 3264.450.16莫氏蘭小淘氣Mokara Choapraya Boy236.344.10莫氏蘭小斑吉Mokara Chittl Orange Spot286.554.93莫氏蘭金色陽光Mokara Sun shi ne Yellow266. 050.49莫氏蘭午后陽光Mokara Kitiya216.039.71莫氏蘭丹頂鶴Mokara Top Red261.449.

31、51莫氏蘭黛安娜Mokara Dianah Shore268.351.01蜻蜓蘭紅寶石Aranda Ruby Make nse236.544.14蜻蜓蘭夢妮Arathera Anne Block271.251.63蜻蜓蘭貝莎Arathera Beatrics NG298.757.56蜻蜓蘭美洲豹Aranda Bertha Brega215.339.56蜻蜓蘭紫氣東來Aranda Chark Kua n Blue271.151.60F0 = 495.300, F = 32.0803.8石斛蘭玉玲瓏水提物的抗氧化活性及最佳的提取工藝研究3.8.1花的浸泡時間的影響在最佳實驗條件下，分別稱取玉玲瓏花

32、瓣1g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下, 超聲60min，浸泡時間分別為1h，2h，3h，4h，5h，6h, 7h。測量其熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明，浸泡時間對花瓣的水提物的抗氧化活性影響不大。實驗數(shù)據(jù)見表10和圖7表10浸泡時間的影響樣品浸泡時間/h花的質(zhì)量/gFOH清除率/%111.0016193.840.15221.0021210. 243.86331.0009230.848.59441.0041233.849.26551.0023231.448.73660.9999232.548.96771.0001230.948.61圖7浸泡時間的影響382花瓣質(zhì)量的影響在最佳實驗條件下，分別稱取玉玲瓏花

33、瓣 0.5g, 1g, 1.5g, 2g, 2.5g, 3g, 4g, 5g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下，浸泡 3h,超聲1h。測量其熒光強(qiáng)度。結(jié)果 表明，加入1.5g花瓣以后，熒光強(qiáng)度增長趨勢變緩。實驗數(shù)據(jù)見表 11和圖8。表11花瓣質(zhì)量的影響樣品浸泡時間/h超聲時間/min花的質(zhì)量/gF13600.5018292.223601.0094337.433601.4987380.343601.9959392.553602.5156394.763603.0117397.973603.9955398.883604.9950400.1380360320300 -280質(zhì)量/g圖8花瓣重量的影響3

34、.8.3超聲時間的影響在最佳實驗條件下，分別稱取玉玲瓏花瓣1g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下， 浸泡 3h，超聲時間分別為 15min， 30min，45min，60min， 75min，90min， 105min， 120min。測量其熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，超聲 60min以后，熒光強(qiáng)度增長的趨勢變緩。 實驗數(shù)據(jù)見表12和圖9。表12超聲時間的影響樣品浸泡時間/h超聲時間/min花的質(zhì)量/gF13151.0049261.823300.9911292. 233451.0018315. 343601.0028336.2753751.0077343.863901.0096348.7731050.

35、9935351.7831201.0049352.4320 -300 -280 -260 -20406080100120時間/min圖9超聲時間的影響3.8.4浸泡溫度的影響在最佳實驗條件下，分別稱取玉玲瓏花瓣 1g,加入50ml蒸餾水，浸泡3h,超聲1h,分別在 25 C, 30 C, 35 C, 40 C, 45 C, 50 C, 60 C, 70 C 的條件下浸泡超 聲。結(jié)果表明，浸泡超聲溫度為 50C時，熒光強(qiáng)度增長的趨勢變緩。實驗數(shù)據(jù)見表13和圖10。表13浸泡溫度的影響樣品浸泡時間/h溫度/c超聲時間/min花的質(zhì)量/gF1325601.0046291.52330601.005929

36、3.53335601.0096298.24340601.0019304.45345601.0069316.56350601.0083328.97360601.0044332.58370601.0044333.4330320310300290203040506070溫度/ c圖10浸泡溫度的影響3.8.5正交試驗確定最佳的提取工藝條件綜合考慮，選擇花瓣的質(zhì)量（A）,超聲時間（B）,浸泡超聲溫度（C）三個影響因素， 設(shè)計三因素三水平的正交實驗來確定最佳實驗條件，因素水平設(shè)計見表14實驗結(jié)果 如表15所示。表14 因素水平表因素ABC11.5454522.0605032.57555表15正交實驗的結(jié)

37、果與分析樣品ABC熒光強(qiáng)度F11.50374545309.621.49816050339.131.50027555346.142.00134550353.452.00086055349.962.00667545367.372.50684555348.582.50916045374.292.50697550375.1K1994.710121051K2107110631068K3109810881045k1331.6337.2350.3k2357.0364.4355. 9k3366.0362.8348.2極差R34.427.27.7主次順序A B C優(yōu)水平A3B2C2優(yōu)組合A3B2C2由表15正交

38、實驗的結(jié)果分析可知，測定體系熒光強(qiáng)度的提取工藝最優(yōu)組合為:A3 B2C2,即：花瓣質(zhì)量2.5 g；超聲時間60min;超聲浸泡溫度50 C；由表15極差分析結(jié)果顯示，因素影響主次順序為 ABC,即：花瓣質(zhì)量為主要 因素，超聲時間為次要因素，超聲浸泡溫度為不重要因素。3.8.6熱帶蘭花（玉玲瓏）各個部分的抗氧化性在最佳條件下，即：0.01mmol/L 羅丹明-6G 1ml，0.1mol/LH 2SO4 0.18ml，1mmol/LH2O2 0.6ml，花瓣2.5g中加入50ml水，在50 C下浸泡3h，超聲60min，取 1ml水提物后，加入 0.1mmol/LFeSO4 2ml，實驗結(jié)果見表16.表16玉玲瓏各個部位的抗氧化性編號部位FOH清除率/ %1花瓣382.588.352花心380.587.873花托381.388.064花莖382.488.324 結(jié)論用熒光法間接測定 Fenton 反應(yīng)生成的羥基自由基，測定多種熱帶蘭花的抗氧化 能力，結(jié)果表明，石斛蘭中的玉玲瓏對羥基自由基的清除效果比較好。進(jìn)一步優(yōu)化了 系的測量條件和篩選出了玉玲瓏水提物最佳的提取工藝