3.醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法-及醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則

1、醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法發(fā)布部門：衛(wèi)生部發(fā)布文號：衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)20101194號第一章總則笫一條 為規(guī)醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴増檢驗實驗室管理，保障臨床基因擴增檢驗質(zhì)量和 實驗室生物安全，保證臨床診斷和治療科學性、合理性，根據(jù)醫(yī)療機構(gòu)管理條例、醫(yī) 療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法和醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法，制定本辦法。笫二條臨床基因擴增檢驗實驗室是指通過擴增檢測特定的dna或rna,進行疾病診斷、治療監(jiān)測和預(yù)后判定等的實驗室，醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)當集中設(shè)置，統(tǒng)一管理。第三條本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗技術(shù)的醫(yī)療機構(gòu)。第四條衛(wèi)生部負責全國醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的監(jiān)督管理工作。各省級衛(wèi)生行政部門負

2、責所轄行政區(qū)域醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴増檢驗實驗室的監(jiān)督管理工作。第五條以科研為目的的基因擴增檢驗項目不得向臨床出具檢驗報告，不得向患者收取任何費用。第二章實驗室審核和設(shè)置笫六條醫(yī)療機構(gòu)向省級衛(wèi)生行政部門提出臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)置申請，并提交以下材料：責驗收行政部門執(zhí)業(yè)許可證（一）醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；（二）醫(yī)療機構(gòu)基本情況，擬設(shè)置的臨床基因擴增檢驗實驗室平面圖以及擬開展的檢驗 項目、實驗設(shè)備、設(shè)施條件和有關(guān)技術(shù)人員資料；（三）對臨床基因擴增檢驗的需求以及臨床基因擴增檢驗實驗室運行的預(yù)測分析。第七條省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的其他機構(gòu)（以下簡稱省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)）負責組織醫(yī)

3、療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)審核工作。第八條 省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)應(yīng)當制訂醫(yī)療機構(gòu)臨床基 因擴増檢驗實驗室技術(shù)審核辦法，組建各相關(guān)專業(yè)專家?guī)欤凑蔗t(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢 驗工作導(dǎo)則對醫(yī)療機構(gòu)進行技術(shù)審核。技術(shù)審核辦法報請省級衛(wèi)生行政部門同意后實施。第九條 醫(yī)療機構(gòu)通過省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)組織的技術(shù) 審核的，憑技術(shù)審核報告至省級衛(wèi)生行政部門進行相應(yīng)診療科目項下的檢驗項目登記備案。第十條 省級衛(wèi)生行政部門應(yīng)當按照醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法和醫(yī)療機構(gòu) 臨床檢驗項目目錄開展醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗項目登記工作。第十一條 基因擴增檢驗實驗室設(shè)置應(yīng)符合國家

4、實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定。第三章實驗室質(zhì)量管理第十二條醫(yī)療機構(gòu)經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門臨床基因擴增檢驗項目登記后，方可開展臨床基因擴增檢驗工作。第十三條醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當按照醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗工作導(dǎo)則，開展臨床基因擴增檢驗工作。第十四條醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室人員應(yīng)當經(jīng)省級以上衛(wèi)生行改部門指定機構(gòu)技術(shù)培訓合格后，方可從事臨床基因擴增檢驗工作。笫十五條 醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當按照醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗 工作導(dǎo)則開展實驗室室質(zhì)量控制，參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心或指定機構(gòu)組織的實驗室室間 質(zhì)量評價。衛(wèi)生部臨床檢驗中心或指定機構(gòu)應(yīng)當將室間質(zhì)量評價結(jié)果及時通報醫(yī)療機構(gòu)和相

5、應(yīng)省級衛(wèi)生行政部門。第四章實驗室監(jiān)督管理第十六條 省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)按照醫(yī)療機構(gòu)臨床基因 擴增檢驗工作導(dǎo)則對醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量進行監(jiān)測，并將監(jiān)測結(jié) 果報省級衛(wèi)生行政部門。第十七條 省級以上衛(wèi)生行政部門可以委托臨床檢驗中心或者其他指定機構(gòu)對醫(yī)療 機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室進行現(xiàn)場檢查?，F(xiàn)場檢查工作人員在履行職責時應(yīng)當出示證明 文件。在進行現(xiàn)場檢查時，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查醫(yī)療機構(gòu)不得拒絕或隱瞞。笫十八條 省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)對室間質(zhì)量評價不合格的醫(yī)療機構(gòu)臨床 基因擴增檢驗實驗室提出警告。對于連續(xù)2次或者3次中有2次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢

6、驗結(jié)果 不合格的醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室，省級衛(wèi)生行政部門應(yīng)當責令其暫停有關(guān)臨床基 因擴増檢驗項目，限期整改。整改結(jié)束后，經(jīng)指定機構(gòu)組織的再次技術(shù)審核合格后，方可重 新開展臨床基因擴增檢驗項目。第十九條 對于擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機構(gòu)，由省級衛(wèi)生行改部門依據(jù) 醫(yī)療機構(gòu)管理條例第四十七條和醫(yī)療機構(gòu)管理條例實施細則第八十條處罰，并予以 公告。公告所需費用由被公告醫(yī)療機構(gòu)支付。笫二十條 醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室出現(xiàn)以下情形之一的，由省級衛(wèi)生行政 部門責令其停止開展臨床基因擴增檢驗項目，并予以公告，公告所需費用由被公告醫(yī)療機構(gòu)支付:（一）開展的臨床基因擴增檢驗項目超出省級衛(wèi)生行政部

7、門核定圍的；（二）使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗的;（三）在臨床基因擴增檢驗中未開展實驗室室質(zhì)量控制的；（四）在臨床基因擴增檢驗中未參加實驗室室間質(zhì)量評價的；（五）在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；（六）以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的；（七）使用未經(jīng)培訓合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的。（A）嚴重違反國家實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定或不具備實驗室生物安全保障條件的。 第五章附則第二十一條本辦法自發(fā)布之日起施行。臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)（2002） 10號）同時廢止。附件醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則一、臨床基因

8、擴增檢驗實驗室的設(shè)計（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則。原則上臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當設(shè) 置以下區(qū)域：試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個區(qū)域在物 理空間上必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當始終處于完全 的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并。例如使用實 時熒光per儀，擴增區(qū)、擴増產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一 體的自動化分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：1. 試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的準備，以及離 心管、吸頭等消

9、耗品的貯存和準備。2. 標本制備區(qū)：核酸（rna、dna）提取、貯存及其加入至擴増反應(yīng)管。對于涉及臨床樣 本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護設(shè)備、個人防護和操作規(guī)的要求。3. 擴增區(qū)：cdna合成、dna擴增及檢測。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分 析、測序等。（二）臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按 照試劑儲存和準備區(qū)一標本制備區(qū)一擴增區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣 流進入擴增前的區(qū)域?？砂凑諒脑噭﹥Υ婧蜏蕚鋮^(qū)一標本制備區(qū)一擴增區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū) 方向空氣壓力遞減的方式進行?？赏ㄟ^安裝排風扇

10、、負壓排風裝置或其他可行的方式實現(xiàn)。（三）工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標準。1. 試劑儲存和準備區(qū)。（1）28C和-20乜以下冰箱。（2）混勻器。（3）微量加樣器（覆蓋0. 2-1000p 1）。（4）可移動紫外燈（近工作臺面）。（5）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭。（6）專用工作服和工作鞋（套）。（7）專用辦公用品。2. 標本制備區(qū)。（1）2-8C冰箱、-20r或-8CTC冰箱。（2）高速離心機。（3）混勻器。（4）水浴箱或加熱模塊。（5）微量加樣器（覆蓋0. 2-1000pi 1）。（6）可移動紫外燈（近工作臺面）。（7）生物安全柜。（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管

11、和加樣器吸頭（帶濾芯）。（9）專用工作服和工作鞋（套）。（10）專用辦公用品。（11）如需處理大分子dna,應(yīng)當具有超聲波水浴儀。3. 擴增區(qū)。（1）核酸擴增儀。（2）微量加樣器（覆蓋0. 2-1000n 1）,（視情況定）。（3）可移動紫外燈（近工作臺面）。（4）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。（5）專用工作服和工作鞋。（6）專用辦公.用品。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。視檢驗方法不同而定，基本配置如下：（1）微量加樣器（覆蓋0. 2-1000p 1）。（2）可移動紫外燈（近工作臺面）。（3）消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）。（4）專用工作服和工作鞋。（5）專用

12、辦公用品。上述各區(qū)域儀器設(shè)備配備為基本配備，實驗室應(yīng)當根據(jù)自己使用的擴増檢測技術(shù)或試劑 的特點，對儀器設(shè)備進行必要的增減。二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則（一）進入各工作區(qū)域應(yīng)當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū)一標本制備區(qū) -擴増區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標記，不同工作區(qū)域的設(shè)備、物品不得混用。（三）不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū) 域時，不得將工作服帶出。（四）實驗室的清潔應(yīng)當按試劑貯存和準備區(qū)一標本制備區(qū)一擴增區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū) 的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（五）工作結(jié)束后，必須立

13、即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)當可耐受諸如 次氯酸鈉的化學物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當方便有效。由于紫外照射 的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm波長），在工作 完成后調(diào)至實驗臺上6090cm照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對（bp）,對紫外線 損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。（六）實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序，所有操作符合實驗室生物安全通 用要求（gbl9489-2008）。三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項（一）試劑儲存和準備區(qū)。貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應(yīng)當直接運

14、送至試 劑貯存和準備區(qū)，不能經(jīng)過擴増檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當保存在該區(qū), 應(yīng)當保存在標本處理區(qū)。（二）標本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染， 可通過在本區(qū)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污 染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險性的材料，必 須在生物安全柜開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。（三）擴增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當盡量減少在本區(qū)的走動。必須注意的是, 所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。（四）擴增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片 上探針雜交方法（放射性核素標記或非放射性核素標記）、直樓或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、 聚丙烯酰胺凝膠電泳、southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。本區(qū)是最