金標(biāo)類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則

1、金標(biāo)類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿） 本類金標(biāo)試劑是指應(yīng)用膠體金免疫技術(shù)，采用膠體金標(biāo)記的抗體或抗原包被于玻璃纖維 膜、聚脂膜或其他載體，將相關(guān)抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應(yīng)用層析法的原理檢測 樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。本技術(shù)指導(dǎo)原則適用于第三類體外診斷試劑中金標(biāo)試 劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，鑒于本類診斷試劑所應(yīng)用的原理、方法、分類等的復(fù)雜性，本指導(dǎo)原 則難以一一涵蓋，僅從試劑的主要原材料、制備工藝、半成品及成品提出質(zhì)量控制要點(diǎn)，其 他診斷試劑可作參考。國家藥品監(jiān)督管理部門將根據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要對本技術(shù)指導(dǎo)原則 適時(shí)組織修訂。 一、基本原則 （一）研制、生產(chǎn)用的各種原

2、料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的 要求。 （二）診斷試劑的生產(chǎn)必須按藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理規(guī)范組織生產(chǎn)；企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng) 的專業(yè)技術(shù)人員，相適應(yīng)的儀器設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境。 （三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定 應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 （四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。 二、原材料質(zhì)量控制 （一）主要生物原料 與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、 多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用于制備 質(zhì)控線的抗原或抗體等。 1、外觀 肉眼觀

3、察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物，渾濁或搖不散的沉淀，或者 為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)，特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。 2、純度和分子量 主要通過SDS-PAG電泳和電泳結(jié)果掃描儀進(jìn)行檢測，也可用其他適宜的方法，如高效 液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。 一般情況下， 每個(gè)電泳道加樣量為5 g，同時(shí)用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)作參照，采用合適的電泳電流和電泳時(shí)間； 電泳后的凝膠可用考瑪氏亮藍(lán)染色或銀染法染色。 染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純 度和分子量。作為免疫診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90， 用考瑪氏亮藍(lán)染色后，純

4、度一般都要大于 95。 3、蛋白濃度 蛋白濃度可通過Lowry法、208nm光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。 4、效價(jià) 效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果通過倍比稀釋法進(jìn)行，效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要 求。 5、功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指標(biāo)生物原料用于試劑盒試劑實(shí)際生產(chǎn)中的情況， 一般考查該原料使用后 的試劑靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。用于制備制控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功 能性實(shí)驗(yàn)。 （二）生物輔料 生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白 蛋白材料等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2000年版的中國生物制品主要原輔材料質(zhì) 檢標(biāo)準(zhǔn)上規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適

5、合于企業(yè)的生產(chǎn)。 牛血清白蛋白 外觀：應(yīng)為淺黃色凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其他雜質(zhì)顆粒。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10溶液，溶解時(shí)間應(yīng)不大于 15 分鐘。 1水溶液的 pH 值：6.5 7.1 ; 1%水溶液 ODb3值：v 0.15。 總蛋白含量：用雙縮脈方法來測定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為 95%。 硫酸銨含量：納氏試劑法測定，通過用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨曲線可查出硫酸銨含量，其標(biāo)準(zhǔn)為w 0.1%。 尿素含量：采用二乙酸一肟法測定，通過用標(biāo)準(zhǔn)尿素曲線可查出尿素含量， 其標(biāo)準(zhǔn)為w 0. 1%。 總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標(biāo)準(zhǔn)為95%。 BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BS

6、A含量，其標(biāo)準(zhǔn)為90%。 功能性試驗(yàn)： 10%作為樣本進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，不得出現(xiàn)特異性反應(yīng)。 （三）化學(xué)原材料 參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)分析純級別檢定。主要的檢測指標(biāo)包括一 些基本的一般鹽類檢測、溶液 PH值檢測。溶解情況的檢測、干燥失重的檢測。熾灼殘?jiān)取?1 、無機(jī)類 主要包括有氯金酸、氯化鈉、磷酸氫二鈉。磷酸二氯鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉等。 2、有機(jī)類 主要包括有枸櫞酸、枸櫞酸鈉、蔗糖、吐溫 20、乙二胺四乙酸二鈉、三羥基氨基甲烷、 氨基吡啉、溴化鉀、氫氧化鈉、葡萄糖、硫酸銨、硫氫酸鉀等。 （四）其他原輔料 1、硝酸纖維素膜 硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細(xì)遷移速度，

7、韌性 （ 切割時(shí)膜破損引起 的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細(xì)遷移速度偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 2、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙 玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細(xì)遷移速度、重量等要求，均一性（厚度 偏差范圍，毛細(xì)遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 3、玻璃纖維膜 適用于全血檢測的金標(biāo)試劑，過濾紅細(xì)胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì) 的特點(diǎn)，應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求。 4、塑料襯片 塑料襯片應(yīng)具有厚度、 硬度（切割時(shí)一次未能整條切下的百分率） 、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合） 粘性（切割時(shí)造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。 5、其他 粘膠紙、鋁箔袋、說明書

8、、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 三、試劑盒的制備 本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體的制備，膠體金標(biāo)記的包被，檢測 線及質(zhì)控線的制備，膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步 驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢定和成品檢定兩個(gè)質(zhì)控過程來完成。 （一）膠體金標(biāo)記物的制備 采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo) 記物在510 550nm波長處應(yīng)有最大吸收值，置 2 8C保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用 合適的方法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標(biāo)記物吸附 于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。 （二

9、）檢測線及質(zhì)控線的制備 取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應(yīng)用同樣方法制 備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗(yàn)證方法確 定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應(yīng)具有間隔距離要求，應(yīng)對所用的金標(biāo)記用 玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進(jìn)行質(zhì)量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號(hào)、 數(shù)目、標(biāo)識(shí)，不同批號(hào)的玻璃纖維及硝酸纖維素膜應(yīng)當(dāng)不要混用了。 （三）貼膜、切割、裝袋 貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有濕度（通過驗(yàn)證方法確定相對濕度要求）要求條件下操作， 切割的膜條應(yīng)有寬度要求。 四、質(zhì)量控制 用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、均一性等指標(biāo)，如具有國家 標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)標(biāo)化質(zhì)控品進(jìn)行檢定。 （一）半成品質(zhì)控品 1、半成品抽樣 檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號(hào)標(biāo)記，待檢。 2、半成品檢