實驗一_幾種光學(xué)顯微鏡的使用.

1、實驗一 幾種光學(xué)顯微鏡的使用 一一. .實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?1.了解幾種光學(xué)顯微鏡的 結(jié)構(gòu)、工作原理、主要 用途和使用方法 2.掌握使用普通顯微鏡提 高分辨力的方法 二二. .實驗原理實驗原理 基本原理基本原理 幾種光學(xué)顯微鏡幾種光學(xué)顯微鏡 普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡 普通光學(xué)顯微鏡也叫復(fù)式 顯微鏡，它適用于觀察一 般的固定的，有色的透明 度較高的標(biāo)本。其最大分 辨率一般為0.2微米，從構(gòu) 造上可分為光學(xué)、機械和 電子三大系統(tǒng)。 暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡 暗視野顯微鏡是以丁達(dá)爾現(xiàn)象 為基礎(chǔ)設(shè)計的，它使用了特殊 的聚光器進(jìn)行斜射照明，因光 源中心束不直入物鏡，所以視 野黑暗，而被檢細(xì)胞器因斜射

2、照明發(fā)生衍射和反射，所以發(fā) 亮可見。 暗視野顯微鏡適用于觀察物體的 存在與運動 相差顯微鏡相差顯微鏡 相差顯微鏡是以光的干涉現(xiàn)象 為基礎(chǔ)設(shè)計的。它用裝有環(huán)狀 光欄的聚光器造成的空心光線 柱，使直射光和衍射光發(fā)生干 涉，從而把我們?nèi)庋鄄荒芸匆?的相位差變?yōu)榭梢姷恼穹睿?同時相位板上裝有吸收膜，吸 收部分直射光以增加反差 相差顯微鏡一般用于觀察活的 細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu) 如何提高分辨率如何提高分辨率 數(shù)片孔徑數(shù)片孔徑 數(shù)片孔徑也叫鏡口率，是物鏡和被 檢樣品之間的介質(zhì)的折射率與物鏡 所接受的光錐頂角的一半的正弦的 乘積。 公式：N.A.=nsin 物鏡的數(shù)值孔徑愈大，顯微鏡的能 力就愈強。數(shù)值孔徑與分辨

3、率成正 比，與焦點深度成正比。顯微鏡物 鏡的前透鏡口徑愈小，數(shù)值孔徑愈 大，放大倍數(shù)愈高，價格愈高 分辨率分辨率 公式：公式：R=0.16 /N.A. （R：分辨率；：分辨率； ：照射光線波長；：照射光線波長； N.A.：物鏡數(shù)值孔徑）：物鏡數(shù)值孔徑） R值愈小，分辨能力愈大。物鏡的值愈小，分辨能力愈大。物鏡的 分辨率與照射光線的波長成反比，分辨率與照射光線的波長成反比， 與物鏡的數(shù)值孔徑成正比。與物鏡的數(shù)值孔徑成正比。 照明光線波長愈短，物鏡的數(shù)值孔照明光線波長愈短，物鏡的數(shù)值孔 徑愈大，顯微鏡的分辨率愈大徑愈大，顯微鏡的分辨率愈大 在光學(xué)成像過程中，在光學(xué)成像過程中，目鏡不起初始目鏡不起初

4、始 造像作用，僅作放大而已造像作用，僅作放大而已 放大率放大率 顯微鏡的總放大率為：顯微鏡的總放大率為： Mt=Mob Me Mph Mt:總放大率總放大率 Mob:物鏡放大率物鏡放大率 Me： 目鏡放大率目鏡放大率 Mph：攝影透鏡放大率：攝影透鏡放大率 首先計算出有效放大倍率：首先計算出有效放大倍率： 0.65 5000.65 1000=300-650 再用物鏡放大倍率除以有效放大倍率再用物鏡放大倍率除以有效放大倍率: 325 40650 40=8-16 求得的數(shù)值是應(yīng)選配的目鏡放大倍率求得的數(shù)值是應(yīng)選配的目鏡放大倍率 的范圍，即要選用的范圍，即要選用8 -16 的目鏡的目鏡 焦點深度焦點深度 當(dāng)顯微鏡對被檢樣品的某一點或 平面準(zhǔn)焦時，影像的清晰范圍，不 局限于這一點或面，在某上下的一 定距離或深度內(nèi)也是清晰的。這段 距離或深度，就叫做焦點深度，簡 稱焦深。 焦深與物鏡的數(shù)值孔徑和總放大 率成反比，影像的焦深加大，提高 物鏡的數(shù)值孔徑，清晰度變小，總 放大率提高，焦深度小，總放大率 降低，焦深加大。使用同一物鏡， 配用倍率的目鏡，焦深隨目鏡倍率 加大兒減小 三、實驗方法三、實驗方法 1.觀察草履蟲的外形，運動，纖 毛，食物泡等。 取少許擦鏡紙纖維，放于載 玻片上，滴一滴草履蟲懸液， 然后蓋片觀察 2.洋