檢疫09-冷藏和冰藏水產品的質量指標測定

1、冷藏和冰藏水產品的質量指標測定冷藏和冰藏水產品的質量指標測定 一、揮發(fā)性鹽基氮的測定 水蒸氣蒸餾法 1、實驗原理 揮發(fā)性鹽基氮與動物性食品新鮮度的關系。 被檢樣品濾液與弱堿性氧化鎂反應后，使被檢樣品 中的堿性含氮物質游離，并被蒸餾出來，用吸收液 吸收（含混合指示劑），再以標準酸液滴定，求其 含量。 使游離、蒸餾出 被吸收 被滴定 2、實驗儀器材料與試劑 儀器材料： 半微量凱氏定氮蒸餾裝置、微量酸式滴定管等。 儀器試劑： 1%的氧化鎂混懸液 2%的硼酸吸收液 0.01mol/L鹽酸標準溶液 0.2%甲基紅乙醇溶液 0.1%亞甲基藍水溶液 3、實驗方法 （1）制備樣品 肉浸液將樣品剔除脂肪、筋腱和

2、骨后，絞碎攪勻，稱 取10g置于錐形瓶中，加入100mL蒸餾水，不時搖動， 浸漬30min后過濾，濾液放入冰箱備用。 （2）預先將盛有10mL吸收液并加入56滴混合指示劑 的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入錐形瓶內 吸收液的液面下。 3、實驗方法 （3）吸取5mL上述樣品肉浸液于蒸餾器反應室內，加1% 氧化鎂混懸液5mL，迅速蓋塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸餾。在冷凝管出現(xiàn)第一滴冷凝水開始計時，蒸餾 5min即停止，取下錐形瓶，冷卻。 （4）錐形瓶中吸收液用0.0100mol/L鹽酸標準溶液滴定 ，剛呈藍紫色為終點，記錄標準酸溶液消耗的體積（ mL）。同時作空白試驗。 （V1-V2）Cs14

3、100 TVBN（mg/100g）= m5/100 式中: V1樣品消耗的鹽酸標準溶液體積，（mL） V2空白消耗鹽酸標準溶液體積，（mL） Cs鹽酸標準溶液濃度，（molL） m樣品質量，（g） 141mol/L鹽酸標準溶液1mL相當于氮的毫克數 各種鮮（凍）畜肉中揮發(fā)性鹽基氮含量應15mg/100g 鮮（凍）畜肉衛(wèi)生標準GB27072005 二、 三甲胺氮測定 1、原理 樣品用三氯乙酸除蛋白后，在強堿性下，三甲胺被甲苯萃取甲 苯經脫水后，與苦味酸作用生成黃色的苦味酸三甲胺鹽，比 色定量。 2、主要儀器與試劑 721型分光光度計； 甲苯(AR，用無水硫酸鈉脫水) 40%三氯乙酸 2%苦味酸甲

4、苯（2g苦味酸(經干燥器干燥)溶于100ml脫水甲苯） 0.02苦味酸(將2%苦味酸甲苯用無水甲苯100倍稀釋) 1+1碳酸鉀溶液(100g碳酸鉀加100m1水溶解) 10%甲醛溶液(取38%濃甲醛10m1，加28m1水) 三甲胺氮標準液(0.682g干燥器干燥的鹽酸三甲胺，加1m1 1：3鹽酸，加水定 容100ml，再100倍稀釋成1ml=10g三甲胺氮，即TMAN。一般要定氮，吸三甲 胺貯存液5m1于微量定氮蒸餾器內，加約6ml10%氫氧化鈉，然后按總氮測定操作 ，求出含氮量） 3、試樣制備 取樣品肌肉(去脂肪)，用絞肉機絞碎或切細，取20g加 70ml水和10ml 40%三氯乙酸（除蛋白

5、作用），用分散機均質 ，用中速濾紙過濾，濾液備檢。 4、測定 吸濾液5ml(40gTMA-N)，于25m1具塞試管中，加1ml 10%甲 醛，10m1甲苯及3m1 1+1碳酸鉀液，立即緊塞振蕩1min，靜置 分層，吸取上層甲苯約8ml，于盛有0.5g以上無水硫酸鈉的試 管中，振蕩脫水后，吸取5m1于試管中，加5ml 0.02%苦味酸 甲苯混勻，于410nm下用1cm比色皿比色， 同時制備標準管，吸取三甲胺標準液(10gm1)0、0.5、1、 2、3、4m1，加水補足5m1，以下同試樣操作，制標準曲線。 5、計算 三、K值的測定 1、原理 ATP（三磷酸腺苷）ADP（腺苷二磷酸）AMP（腺苷酸）

6、IMP（肌苷酸） HxR（次黃嘌呤核苷酸）Hx（次黃嘌呤） 2、儀器與試劑 752C紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠) ; 電動離心 機( 上海手術器械廠) ;層析柱(自制) ; 717 強堿型陰離子 交換樹脂(16-50目) ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx標準品; 高氯酸(PCA) 、三 氯乙酸(TCA) , 丙酮, 氫氧化鈉, 氫氧化鉀, 鹽酸, 氨水, 氯化鈉等皆為分析純. 3、樣品的制備 取魚肉粉碎, 準確稱取1g 置于10ml 離心試管中, 加 入冰冷的10% PCA 2ml, 用玻璃棒攪拌, 離心, 取上清 液. 沉淀部分再用冰冷的5% PCA處理2次. 合并三

7、次上 清液, 用10 mol/ L KOH 和1 mol / L KOH 中和至pH 為6.5, 沉淀部分離心除去, 用冰水洗滌沉淀, 最后用 10 ml 容量瓶定容后放入- 20的冷凍室內保存待用 。 4、樹脂的處理 取717 強堿型陰離子交換樹脂100 g, 放入1 L 的燒杯 中, 用300 ml 丙酮攪拌浸泡,濾去丙酮, 用去離子水 洗凈, 加入600 ml 1mo l/ L NaOH, 攪拌浸泡, 濾去 堿液, 反復水洗至呈中性, 加入1 mol/ L 的HCl 溶液 600 ml 攪拌浸泡, 濾去酸液, 多次水洗至呈中性, 最 后一次連水一起灌入瓶內放入冰箱內冷藏備用. 5、柱子的

8、制備 樹脂柱采用0. 818 cm 玻璃柱, 底部用玻璃纖維墊 底, 柱內裝入樹脂高度約8 cm,灌注時避免有氣泡產生 , 若有氣泡混入, 可在柱內加入去離子水, 再用很細 的玻棒攪拌除去氣泡. 6、上柱操作 取2 ml 魚肉提取液或0.1- 0.5 ml 濃度為10 mmol/ L 的標準 樣品溶液, 置于50 ml燒杯中, 用0.5 mol/ L 的氨水調節(jié)pH 值 至9.4, 使之通過層析柱, 再在燒杯中用0.5 mol/L 氨水將少量 去離子水調節(jié)pH 值至9.4, 同樣使之通過層析柱. 當樣品液下 降至樹脂上1 cm 左右時, 加入40 ml 去離子水, 去離子水流完 后, 在柱下放上50 ml 容量瓶, 用量筒取0.001 mol/ L HCl 溶 液( A 液) 45 ml , 加一部分到柱中, 然后接上分液漏斗加入 剩下的A液. 待A 液流完后換上另一另50 ml 容量瓶, 同上操作 , 加入0. 6 mo