2017-2018學(xué)年高中生物 第一部分 微生物的利用 第2課時 分離以尿素為氮源的微生物同步備課教學(xué)案選修1

1、學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精第2課時分離以尿素為氮源的微生物考試要求知識內(nèi)容考試屬性及要求考情解讀分離以尿素為氮源的微生物加試1.進行微生物分離。使用含有尿素的培養(yǎng)基，采用涂布分離法，分離有脲酶的細菌。2。使用酚紅指示劑檢測以尿素為氮源的細菌的存在。3。說明分離以尿素為氮源的細菌的實驗原理。4.舉例說明本實驗分離出來的細菌不一定都是以尿素為氮源的細菌.一、實驗?zāi)康?、原理、設(shè)備、用品及材料準(zhǔn)備1。實驗?zāi)康模?）使用專一的培養(yǎng)基(含有尿素）分離專一的細菌(有脲酶的細菌）。(2）利用指示劑顏色的變化檢知酶（脲酶）所催化的反應(yīng).2。實驗原理(1)脲或稱尿素,是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。有一些細菌含有脲酶可以分解

2、尿素，利用尿素作為其生長的氮源。(2）（nh2）2coh2o2nh3co23.設(shè)備及用品滅菌鍋或高壓鍋、250 ml的三角瓶1個和100 ml的三角瓶2個、封口膜和橡皮圈、培養(yǎng)皿4個、接種環(huán)和玻璃刮刀、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、酒精燈和超凈臺、一次性塑料手套、裝有酒精棉球的廣口瓶、鑷子、有蓋的試管（15 mm150 mm)5支和試管架、移液器。4.實驗材料(1）在100 ml燒杯中裝入50 ml 70%酒精，將玻璃刮刀浸泡在其中。(2)在100 ml三角瓶中配制好25 ml全營養(yǎng)lb固體培養(yǎng)基（0.25 g蛋白胨，0。12 g酵母提取物,0.25 g nacl和0.5 g瓊脂糖，水25 ml),加上封

3、口膜后滅菌待用。(3）在100 ml三角瓶中配制好25 ml尿素固體培養(yǎng)基（0。025 g葡萄糖，0.12 g nacl，0.12 g k2hpo4，0.25 mg酚紅和0。5 g瓊脂糖，水15 ml）,加上封口膜后滅菌，待冷卻至60 時,加入通過g6玻璃漏斗過濾(使之無菌）的10 ml尿素溶液(內(nèi)含2 g脲），搖動,混合均勻后待用.（4)將盛有4.5 ml蒸餾水的5支有塞試管滅菌后待用.(5)在250 ml三角瓶中裝入99 ml蒸餾水，用封口膜蓋上，滅菌后待用。（6）土樣1 g（從有哺乳動物排泄物的地方取得）。1。為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基？答案瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量

4、的含氮化合物.如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會為細菌提供一定量的非尿素類氮源,這樣會在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量非以尿素為氮源的細菌，不利于以尿素為氮源的細菌的篩選,故而用經(jīng)純化的瓊脂糖而不用瓊脂做固化劑。2.分離以尿素為氮源的微生物實驗所用培養(yǎng)基為尿素固體培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，瓊脂糖的作用是凝固劑。3。微生物要利用尿素需要分泌脲酶，不能分泌脲酶的微生物不能利用尿素。據(jù)此該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用，其選擇機制是只有能夠分泌脲酶從而以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長。4.有脲酶的細菌在生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)中起什么作用？答案如果土壤中有許多尿素，在自

5、然界較高溫度下會被水解，水解后的氨使土壤變成堿性，氨與其他陰離子物質(zhì)如so、co、no等形成化合物，則會使土壤板結(jié)。有脲酶的細菌使植物廢棄物和動物尸體降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循環(huán)。5.酸堿指示劑是用來指示反應(yīng)前后的酸堿性變化的。尿素在被脲酶作用前是中性的,而作用后產(chǎn)生了nh3，變成了堿性，本實驗使用酚紅作為指示劑，在酸性情況下呈黃色，堿性情況下呈紅色,變色范圍是ph6.48。2。培養(yǎng)后，由于細菌產(chǎn)生的脲酶向周圍擴散,培養(yǎng)基中的尿素分解產(chǎn)生的氨使培養(yǎng)基變堿性，于是酚紅由黃色變成紅色,這就表明以尿素為氮源的細菌分泌了脲酶并分解了尿素。圓形紅色區(qū)域愈大，表明這種菌利用尿素的能力愈

6、強。1。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長;在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜的微生物群體中分離出()a.乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌b。固氮細菌、大腸桿菌、放線菌c。固氮細菌、霉菌、放線菌d.固氮細菌、金黃色葡萄球菌、放線菌答案c解析固氮細菌可以在無氮培養(yǎng)基上生長;青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長，但不會抑制霉菌的生長；加入10%的酚的培養(yǎng)基可以抑制細菌和霉菌的生長，但不會抑制放線菌的生長。2。下列有關(guān)敘述，不正確的是(）a。脲是一種有機化合物，含有氮元素b.地表土壤中含有一定量的脲c。以

7、尿素為氮源的細菌含有脲酶d。在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會導(dǎo)致培養(yǎng)基呈酸性答案d解析根據(jù)反應(yīng)式：(nh2)2coh2o2nh3co2，在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會產(chǎn)生nh3，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。二、分離以尿素為氮源的微生物1.實驗中的對照設(shè)置(1)實驗組：以尿素固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。(2)對照組:以全營養(yǎng)lb固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。2.實驗步驟制備培養(yǎng)基：將已滅菌的lb固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基分別倒入兩個培養(yǎng)皿中，搖勻，平放至凝固制備細菌懸液：用1 g土樣配制不同濃度的細菌懸液用涂布分離法分離細菌：將不同濃度的土壤稀釋液分別加入有l(wèi)b培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，并用玻璃刮

8、刀涂布到整個平面上培養(yǎng)：倒置培養(yǎng)皿，在37 恒溫箱中培養(yǎng)2448 h觀察:培養(yǎng)基中菌落數(shù)閱讀教材，回答問題：1。實驗原理(1）以尿素為氮源的微生物含有脲酶，可以通過降解尿素作為其生長的氮源。(2)尿素固體培養(yǎng)基的唯一氮源為尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素為氮源生長繁殖,缺乏脲酶的微生物則由于不能分解尿素而不能生長繁殖，所以,用該培養(yǎng)基能夠篩選分離出以尿素為氮源的微生物.（3)脲酶可使尿素分解產(chǎn)生氨，從而可使加入酚紅指示劑的尿素固體培養(yǎng)基變紅。2。實驗步驟(1）在60 左右時,將兩只三角瓶中已滅菌的lb固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基，在酒精燈旁分別倒入兩個培養(yǎng)皿中,在水平的超凈臺上搖

9、勻，平放至凝固。（2）制備細菌懸液(過程如圖1)。在無菌條件下，將1 g土樣加到有99 ml無菌水的三角瓶中，振蕩10 min，即成102土壤稀釋液。依此法制備103、104和105土壤稀釋液。取樣時,盡量只取懸液。搖勻，放在試管架上。(3)用涂布分離法分離細菌(如圖2）。取104和105的土壤稀釋液各0.1 ml,分別加到有l(wèi)b培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上，待刮刀上火焰熄滅,在酒精燈火焰旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個平面上。（4）將培養(yǎng)皿倒置，在37 恒溫箱中培養(yǎng)2448 h。觀察菌落數(shù)。3.觀察結(jié)果(如圖3）全營養(yǎng)培養(yǎng)基中有較多的菌落，而尿

10、素為氮源的培養(yǎng)基平板中只有少量菌落。4.思考與討論（1）樣品為什么要進行稀釋？有什么標(biāo)準(zhǔn)？答案樣品的稀釋程度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌.因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。稀釋的標(biāo)準(zhǔn):選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在30300，便于計數(shù)。(2)有脲酶的細菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶出現(xiàn)?答案細菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中的尿素水解，尿素分解后產(chǎn)生氨，氨水為堿性，酚紅在酸性環(huán)境中為黃色，在堿性環(huán)境中變?yōu)榧t色.培養(yǎng)基中的酸堿指示劑產(chǎn)生顏色變化（變紅），標(biāo)志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明

11、這一菌株能以尿素為氮源，紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的能力越強。(3)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落?答案這一現(xiàn)象表明能利用尿素的細菌在土壤菌群中只占有極少數(shù)。因為人和其他哺乳動物產(chǎn)生的排泄物畢竟是少量的,每人每天排泄約500800 ml尿，但隨地便溺的不多，動物雖然隨地便溺，但尿素還是可以在高溫下自然分解的。因此,以尿素為氮源的菌群較少。（4)2013年11月22日凌晨3點，青島黃島區(qū)發(fā)生石油泄漏事件，一些微生物可以有效地分解石油，如何配制選擇培養(yǎng)基將這類微生物選擇出來？答案配制的選擇培養(yǎng)基中，石油作為唯一的碳

12、源，然后用這種培養(yǎng)基培養(yǎng)多種微生物,凡是能在該種培養(yǎng)基上生存的就是能分解石油的微生物.5.微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用對照組作用現(xiàn)象結(jié)論未接種培養(yǎng)基有無雜菌污染的判斷未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基篩選作用的確認牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用3。現(xiàn)從土壤中分離以尿素為氮源的細菌，實驗過程如下圖所示：請回答：（1)欲從土壤中分離出能分解尿素的細菌,將土壤用 進行一系列的梯度稀釋，同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布 個平板，通常以每個培養(yǎng)皿中有 個以內(nèi)的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適.（2)接種后的培養(yǎng)皿

13、 于37 的恒溫箱中培養(yǎng).若培養(yǎng)基中存在含脲酶的細菌，其菌落周圍會出現(xiàn) ，這是由于尿素被分解產(chǎn)生氨氣,與該培養(yǎng)基中的 產(chǎn)生的顏色變化，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。(3)分離能利用尿素的細菌時所用的培養(yǎng)基成分上最主要的特點是 .(4)下列操作需要在酒精燈火焰旁進行的是(多選）()a.稱取葡萄糖、瓊脂糖等培養(yǎng)基成分b.倒平板c.涂布平板d。微生物的培養(yǎng)（5)與lb全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相比，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落的原因是 。答案（1）無菌水320（2）倒置紅色環(huán)帶酚紅指示劑（3)以尿素作為唯一氮源（4)bc(5）土壤中能利用尿素的細菌在土壤菌群中只占極少數(shù)量解析（1）涂布分離法必須先用無菌水

14、對土樣進行一系列的梯度稀釋，通常以每個培養(yǎng)皿中有20個以內(nèi)的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適。（2)接種后需倒置培養(yǎng)皿恒溫培養(yǎng)。含有脲酶的細菌能夠?qū)⒛蛩胤纸猓a(chǎn)生的氨氣使培養(yǎng)基呈堿性,導(dǎo)致培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈紅色。(3)分離能利用尿素的細菌時所用的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源.（4）進行微生物培養(yǎng)和分離時，倒平板、涂布平板均需要在酒精燈火焰旁進行，以防雜菌污染.（5）尿素培養(yǎng)基只以尿素為氮源，在尿素培養(yǎng)基上生長繁殖的只能是少數(shù)能夠合成脲酶可利用尿素的細菌.4。從土壤中分離以尿素為氮源的細菌，下列實驗操作不正確的是()a.將土壤用無菌水稀釋，制備103105土壤稀釋液b.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于

15、不同平板上c。用加入酚紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細菌d.從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株答案c解析從土壤中分離以尿素為氮源的細菌時,將土壤用無菌水稀釋,制備土壤稀釋液；將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上；用加入酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基可以鑒別分解尿素的細菌;從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株。一題多變判斷正誤：（1)（nh2）2coh2o2nh3co2（）(2)尿素固體培養(yǎng)基配制后需要在121 (1 kg/cm2壓力)下滅菌15 min（)(3）本實驗中的lb培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基均為固體培養(yǎng)基(）(4）接種后，應(yīng)將培養(yǎng)皿正置，在37 恒溫箱中培養(yǎng)2448

16、h(）（5）篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中,尿素是唯一的氮源()(6)分解尿素的細菌在分解尿素時,可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨,使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(）答案（1)（2)（3）(4）(5）(6）分離以尿素為氮源的微生物1。給無氮培養(yǎng)基接種土壤稀泥漿的方法是（)a.打開培養(yǎng)皿蓋,取一根接種環(huán)蘸取少許稀泥漿，輕輕地點接在培養(yǎng)基的表面上b。取一根接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌后蘸取少許稀泥漿，略微打開培養(yǎng)皿蓋，在培養(yǎng)基的表面輕點c.打開培養(yǎng)皿蓋，取一根接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌后蘸取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的表面輕點d。略微打開培養(yǎng)皿蓋，取一根接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌，冷卻后蘸取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的表面輕點

17、答案d解析接種過程中要防止外來雜菌的入侵，左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將接種環(huán)在火焰上滅菌，冷卻后蘸取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的表面輕點，否則用未冷卻的接種環(huán)蘸取稀泥漿會殺滅菌種。2.用來判斷尿素固體選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對照是（）a.未接種的尿素固體選擇培養(yǎng)基b.未接種的牛肉膏蛋白胨(全營養(yǎng))培養(yǎng)基c。接種了的牛肉膏蛋白胨（全營養(yǎng)）培養(yǎng)基d.接種了的尿素固體選擇培養(yǎng)基答案c解析將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于尿素固體選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目。因此，選用接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照。本實驗的變量是培養(yǎng)基的種類，其他方面如接種,培養(yǎng)條件等應(yīng)相同。

18、3.下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是()a。kh2po4、na2hpo4、mgso47h2o、葡萄糖、尿素、瓊脂、水b。kh2po4、na2hpo4、mgso47h2o、葡萄糖、瓊脂糖、水c.kh2po4、na2hpo4、mgso47h2o、尿素、瓊脂糖、水d。kh2po4、na2hpo4、mgso47h2o、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂糖、水答案a4.請選出下列正確的操作順序（）土壤取樣稱取10 g土壤，加入盛有90 ml無菌水的錐形瓶中吸取0。1 ml土壤溶液進行平板涂布依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度a. b。c. d.答案c5.從土壤中分離以尿素為氮源

19、的細菌，實驗過程如圖所示:（1）圖中物質(zhì)a為 ,若要統(tǒng)計每克土壤樣品中以尿素為氮源的細菌的活菌數(shù)目，宜采用 法接種到尿素培養(yǎng)基上,對照組配制的培養(yǎng)基為 培養(yǎng)基，若用同濃度的土壤稀釋液接種，實驗組培養(yǎng)皿中菌落數(shù) （填“大于”“等于”或“小于)對照組。在能利用尿素的細菌菌落周圍,有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是 。（2）下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是 滅菌。a.高壓蒸汽 b。紫外燈照射c。70酒精浸泡 d.過濾（3）下列培養(yǎng)基中，能分離出分解尿素的細菌的是 。a。葡萄糖、nacl、k2hpo4、酚紅、瓊脂糖、水b.葡萄糖、nacl、k2hpo4、酚紅、瓊脂糖、水、尿素c。nacl、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵

20、母提取物、尿素d.葡萄糖、nacl、k2hpo4、酚紅、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物（4)欲將分離得到的以尿素為氮源的細菌進行擴大培養(yǎng)，應(yīng)使用lb 培養(yǎng)基.答案(1)無菌水涂布（分離)lb全營養(yǎng)小于能利用尿素的細菌產(chǎn)生的脲酶，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色(2)d(3）b（4）液體課時作業(yè)基礎(chǔ)過關(guān)1.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是（）a。篩選出能分解尿素的細菌b。對分離的菌種作進一步鑒定c。作細菌的營養(yǎng)成分d.如指示劑變藍就能準(zhǔn)確地認定該菌能分解尿素答案b解析篩選出能分解尿素的細菌用選擇培養(yǎng)基即可，不需要加指示劑。加入指示劑的培養(yǎng)基,目的都是對要分離的菌種作

21、進一步的鑒定。2.土壤中分解尿素的微生物所需氮源為（)a.硝酸 b.氨c.尿素 d.蛋白胨答案c解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素為氮源.3。土壤中的細菌能分解尿素，是因為它們能合成一種()a。尿素酶 b。脲酶c。蛋白酶 d.肽酶答案b解析能夠分解利用尿素的細菌,其細胞內(nèi)含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后進一步利用。4.產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（)a.一個細菌、液體培養(yǎng)基 b。許多細菌、液體培養(yǎng)基c。一個細菌、固體培養(yǎng)基 d。許多細菌、固體培養(yǎng)基答案c解析在液體培養(yǎng)基中生活的細菌,無論是一個還是許多，肉眼都是看不見的.在固體培養(yǎng)基上生活的細菌，當(dāng)數(shù)目較少時也是

22、看不見的。當(dāng)固體培養(yǎng)基上由許多細菌并且集中在較小范圍內(nèi)時，肉眼可見。而菌落是一個細菌或幾個細菌的子細胞群體，形成于固體培養(yǎng)基上,有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，所以肉眼可見.同種細菌形成的菌落，形態(tài)結(jié)構(gòu)是相同的。如果是由許多細菌形成的菌落，就不可能有比較標(biāo)準(zhǔn)的形態(tài)，因為這許多細菌第一不可能是同一種細菌，第二不可能在培養(yǎng)基的同一個點上.5。在培養(yǎng)基中加入尿素（唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細菌,這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于（)a。選擇培養(yǎng)基 b。固體培養(yǎng)基c.液體培養(yǎng)基 d.半固體培養(yǎng)基答案a解析選擇培養(yǎng)基是從功能上對培養(yǎng)基進行分類的,b、c、d三項所述的培養(yǎng)基是根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)進行分類的。題述培養(yǎng)

23、基能分離出以尿素為唯一氮源的細菌,故是一種選擇培養(yǎng)基。6.下面對“從土壤中分離分解尿素的細菌過程中滅菌”的理解,不正確的是()a.防止雜菌污染b。消滅全部微生物c.稀釋土壤溶液的過程必須在酒精燈火焰旁操作d.滅菌必須在接種前進行答案b7。在做分離分解尿素的細菌實驗時,a同學(xué)從對應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落。a同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生的原因不可能是()a。土樣不同 b.培養(yǎng)基污染c.操作失誤 d.沒有設(shè)置對照答案d解析實驗結(jié)論是否正確與是否設(shè)置對照有直接關(guān)系，但實驗結(jié)果與是否設(shè)置對照無關(guān)。能力提升8。下列有關(guān)尿素培養(yǎng)基的敘述，不正確的是(）a.根據(jù)物理性質(zhì)劃分，

24、該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基b。培養(yǎng)基中的唯一氮源為尿素,用以篩選以尿素為氮源的微生物c。培養(yǎng)基中的酚紅，用以鑒別以尿素為氮源的微生物d.培養(yǎng)基中加入g6玻璃漏斗過濾的尿素后，要用500 g/cm2壓力(90 以上)滅菌30 min答案d解析因為尿素加熱會分解，所以應(yīng)先將培養(yǎng)基經(jīng)500 g/cm2壓力滅菌30 min(為防止葡萄糖分解碳化)，再添加g6玻璃漏斗過濾后的尿素.9.測定土壤中細菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng),而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍的稀釋液,其原因是(）a。細菌個體小，真菌個體大b.細菌易稀釋,真菌不易稀釋c.細菌在土壤中數(shù)量比真菌多d

25、.隨機的，沒有原因答案c解析土壤中的微生物大約7090%是細菌，真菌的數(shù)量要比細菌少.樣品的稀釋度越高，在平板上生成的菌落數(shù)目就越少.在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300之間，適于平板計數(shù)，所以細菌的稀釋倍數(shù)要高于真菌的稀釋倍數(shù)。10。如圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實驗的基本流程，請回答下列問題：(1）該實驗培養(yǎng)基可以不含有 。a.尿素 b.氯化鈉c.葡萄糖 d。瓊脂（2）尿素溶液可用 使之無菌。若要檢查b過程滅菌是否徹底,可以采用的方法是 。（3）圖中步驟c為 。相對于劃線分離法，過程d涂布分離法的優(yōu)點是 .（4)如果菌落周圍出現(xiàn) 色環(huán)帶，說明

26、該菌落能分泌脲酶。答案(1）b（2）g6玻璃漏斗過濾將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落出現(xiàn)(3)倒平板單菌落更易分開（4）紅解析（1)分解尿素的細菌是異養(yǎng)微生物，因此培養(yǎng)基中應(yīng)該加入有機碳源，如葡萄糖;分離分解尿素的細菌的培養(yǎng)基從功能上分屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)該以尿素為唯一氮源；從物理性質(zhì)上分屬于固體培養(yǎng)基，因此應(yīng)加入凝固劑瓊脂。故選b.(2)尿素溶液可用g6玻璃漏斗過濾使之無菌。若要檢查b過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落出現(xiàn)。(3)圖中步驟c為倒平板。相對于劃線分離法，過程d涂布分離法的優(yōu)點是單菌落更易分開.（4）如果菌落周

27、圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶.11。芽孢桿菌是一種耐高溫的細菌,可用于植物保護、飼料添加及環(huán)境凈化。為獲取土壤中的芽孢桿菌,某同學(xué)進行了相關(guān)實驗，操作流程如下圖:(1）上圖中85 處理10分鐘的目的是 .上圖中步驟a為 ,步驟b為 。要判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可采用的方法是 .(2）下列消毒滅菌方法中，常用于接種環(huán)滅菌的是 .a。70%酒精浸泡 b.紫外線照射c。灼燒 d.高壓蒸汽(3)請分析劃線分離法能得到單菌落的原因: 。若要對每克土樣中所含芽孢桿菌進行計數(shù),應(yīng)采用 接種方法。（4)菌株經(jīng)鑒定后,可進一步接種到 培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)時需要 。答案（1）篩選出耐高溫菌株倒平板培養(yǎng)將

28、滅菌后的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間后觀察是否出現(xiàn)菌落 (2)c（3）劃線過程中接種環(huán)上的菌液逐漸減少，到劃線最后部分細菌間距離加大，經(jīng)培養(yǎng)后能得到單菌落涂布分離(4）lb液體振蕩12。幽門螺桿菌（hp）感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后,進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：請回答:（1）在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑,這是因為hp含有 ，它能以尿素作為氮源;若有hp，則菌落周圍會出現(xiàn) 色環(huán)帶。（2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是 。a。高壓蒸汽 b.紫外燈照射c.70%酒精浸泡 d。過濾(3）步驟x表示 。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋,然后將菌液 到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得 菌落。（4）在培養(yǎng)時,需將培養(yǎng)皿倒置并放在 中.若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致 .(5）臨床上用呼氣試驗檢測人體是否感染hp，其基本原理是hp能將標(biāo)記的 分解為氨和二氧化碳.答案（1）脲酶紅(2)d（3）接種涂布單一（4）恒溫培養(yǎng)箱無法形成單一菌落(5)尿素解析能以尿素作為氮源的微生物體內(nèi)含有脲酶，可將尿素分解為co2和nh3，nh3遇酚紅指示劑會顯紅色。尿素不能高溫滅菌，因為加熱會導(dǎo)致尿素分解，所以應(yīng)該用過濾方法滅菌。將稀釋菌