第十一章 維生素的測定

1、食品分析食品分析 2 一、維生素的分類 二、各種維生素 的測定方法 3 維生素是是人體生長、發(fā)育、生殖 及維持生理機能所必須的營養(yǎng)素。它主 要是調節(jié)物質代謝，許多種維生素是構 成輔酶的主要成分，在調節(jié)物質代謝方 面具有十分重要的作用。 主要有維生素A、維生素D、維生素E及維生素K。 主要有B 族維生素及維生素C。 機體內存在的一些具有類似維生素生物活性的物質，它 們列為復合維生素B 族這一類中，通常稱它們?yōu)椤邦惥S 生素物質”。包括：膽堿、生物類黃酮（維生素P）、 輔酶Q（泛醌）、肌醇等。 4 維生素是維持人體正常生命活動所必需的一類天然 有機化合物。其種類很多，目前已確認的有30余種，其 中被

2、認為對維持人體健康和促進發(fā)育至關重要的有20余 種。必須經(jīng)常從食物中攝取維生素；長期缺乏任何一種 維生素都會導致相應的疾病。近幾年已經(jīng)查明僅有少數(shù) 幾種維生素可以在體內合成，大多數(shù)維生素都必須由食 物供給。 （一）概述 5 因此，維生素作為強化劑已在食品工業(yè)的某些產(chǎn)品中 開始使用，測定食品中的維生素含量，不僅可評價食品 的營養(yǎng)價值，同時還起到監(jiān)督維生素強化食品的劑量， 以防攝入過多的維生素而引起中毒，所以，測定食品中 維生素在營養(yǎng)分析方面具有重要的意義。 （一）概述 6 維生素化學結構各異，生理功能也各不相同，化學 結構上沒有共性。 胺類（VB1） 醛類（VB6） 醇類（VA）等 （一）概述

3、維生素維生素 水溶性維生素水溶性維生素 脂溶性維生素脂溶性維生素 維生素維生素B、C等等 維生素維生素A、D、E、K 7 在這二類中與我們最密切，而且了解最多的有： 維生素A：是人體必需營養(yǎng)素，能促進人體發(fā)育，防止眼膜 炎、夜盲癥等疾病。 維生素B1：也叫硫胺素，對人體的功能主要是防腳氣病、神 經(jīng)炎，幫助消化，促進發(fā)育。 維生素B2：對人體功能防口角炎、皮膚炎，防止怕光現(xiàn)象。 維生素C：防壞血病，促進外傷愈合，使機體增強抵抗力。 維生素D：調節(jié)體內礦物鹽的平衡，特別是對人體內鈣、磷 的代謝，并能防止軟骨病。 （一）概述 8 VA：胡蘿卜、西紅柿、紅薯等； B1（硫胺素）：胚芽、米糠、麩皮等；

4、B2（核黃素）：動物肝臟、雞蛋、牛奶； B12：只有肉類食品還有這種維生素； VC（抗壞血酸）: 各種新鮮蔬菜，新鮮水果等； VE: 麥胚油、玉米油、芝麻油、豆類等。 （二）富含維生素的食品 9 VA、VD、VE、與類脂物一起存于食物中，攝食時可吸收， 可在體內積貯。 脂溶性維生素具有以下理化性質： 溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙 酮、氯仿、乙醚、苯等有機溶劑。 耐酸堿性：維生素A、D對酸不穩(wěn)定， 對堿穩(wěn)定，維生素E 對堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護下，也 能經(jīng)受堿的煮沸。 （二）脂溶性V的測定 10 3耐熱性、耐氧化性： 耐熱性 氧化性 VA 好，能經(jīng)受煮沸

5、易被氧化（光、熱促進其氧化） VD 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化 VE 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被 （光、熱、堿促進其氧化） （二）脂溶性V的測定 11 根據(jù)上述性質，測定脂溶性維生素時，通常： 皂化樣品 水洗去除類脂物 有機溶劑提取 脂溶性維生素(不皂化物) 濃縮 溶于適當?shù)娜?劑 測定。 在皂化和濃縮時，為防止維生素的氧化分解，常加入 抗氧化劑(如焦性沒食子酸、維生素C等)。 對于A、D、E共存的樣品，或雜質含量高的樣品，在皂 化提取后，還需進行層析分離。 （二）脂溶性V的測定 12 結構特點與分析方法之間的關系 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 CH3 CH3 CH3 CH2

6、OR CH3CH3 RH 維生素維生素A醇醇 RCOCH3 維生素維生素A醋酸酯醋酸酯 維生素A CH2OR CH3CH3 CH3 CH3 CH3 環(huán)己烯環(huán)己烯 共軛多共軛多 烯側鏈烯側鏈 多異構體多異構體 UV 易被氧化易被氧化 結構分析結構分析 共軛多烯結構：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光譜法進 行鑒別，采用紫外分光光度法進行含量測定。天然維生素 A是全反式維生素A。 結構特點與分析方法之間的關系 維生素A含量測定方法有三氯化銻比色法、紫外分光光 度法、熒光分析法、液相色譜法。紫外分光光度法是法定 方法。 三氯化銻比色法多用于食品或飼料中的維生素A的測定。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素

7、A的測定 維生素A （1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003） 原理 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 氯仿溶液中氯仿溶液中 維生素A+三氯化銻 蘭色可溶性配合物 620nm波長比色 （1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003） 適用范圍及特點 本法適用于維生素A含量較高的各種樣品（含量高于5 10g/g）。 該法的主要缺點是生成的藍色配合物的穩(wěn)定性差，比色 測定必須在6S內完成，否則藍色會迅速消退，將造成極大誤 差。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 （1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003） 試劑 無水硫酸鈉、乙酸酐 無水乙醚（

8、不含過氧化物） 無水乙醇（不含醛類物質） 三氯甲烷（不含分解物和水） 250g/L三氯化銻三氯甲烷溶液 1:1氫氧化鈉溶液、0.5mol/L氫氧化鉀 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 （1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003） 測定步驟： 樣品預處理 含有維生素A的樣品大多需首先除去脂肪，把維生素A從脂肪 中分離出來。常規(guī)的去脂方法是采用皂化法和研磨法。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 樣品預處理樣品預處理樣品測定樣品測定 A、皂化法（皂化反應是堿催化下的酯水解反應，尤指油脂的水解 ）: 脂肪與VA分離原理：脂肪和植物油的主要成分是甘油三酯， 它們在堿性條件下

9、水解的方程式為： （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 適用于維生素適用于維生素A含量不高的樣品，但全部試驗過程費時，且易導致維生素含量不高的樣品，但全部試驗過程費時，且易導致維生素A的損失。的損失。 u皂化 稱取0.55g經(jīng)組織搗碎機搗碎或充分混勻的樣品于 三角瓶中，加入l0ml 1：1氫氧化鉀及2040ml乙醇，在 電熱板上回流30min。加入10m1水，稍稍振搖,若無渾濁現(xiàn) 象，表示皂化完全。 u提取 將皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分兩次沖洗皂 化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分兩次沖洗皂 化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振搖2min，提取不皂化部 分。 （二）脂溶性V的

10、測定 1.維生素A的測定 靜止分層后，水層放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分 兩次沖洗，洗液傾入第二分液漏斗，振搖后靜止分層，將水層放入三 角瓶，醚層并入第一分液漏斗。如此重復操作，直至醚層不再使三氯 化銻一三氯甲烷溶液呈藍色為止。 u洗滌 在第一分液漏斗中加30ml水，輕輕振搖，靜止片刻 后，放出水層。再加入1520ml 0.5mol/L的氫氧化鉀溶液， 輕輕振搖后，棄去下層堿液（除去醚溶性酸皂），繼續(xù)用水 洗滌，至水洗液不再使酚酞變紅為止。醚液靜置10 20min 后，小心放掉析出的水。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 u濃縮 將醚層液經(jīng)過無水硫酸鈉濾入三角瓶中，再用約

11、 25ml乙醚沖洗分液漏斗和硫酸鈉兩次，洗液并入三角瓶內。 用水浴蒸餾，回收乙醚。待瓶中剩約5ml乙醚時取下。減 壓抽干，立即準確加入一定量三氯甲烷（約5ml左右）， 使溶液中維生素A含量在適宜濃度范圍內(35g）。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 B、研磨法 適用于每克樣品維生素A的含量大于510g樣 品的測定，如豬肝的分析。步驟簡單、省時，結果準確。 u研磨 精確稱取25g樣品，放入盛有35 倍樣品質量的 無水硫酸鈉研缽中，研磨至樣品中水分完全被吸收，并均質 化。 u提取 小心地將全部均質化的樣品移入帶蓋的三角瓶內， 準確加入50100ml乙醚。緊壓蓋子，用力振搖2min；靜置

12、澄清（大約需12 h），或離心澄清（保持低溫）。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 u濃縮 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在70 80水浴上抽氣蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解殘 渣。 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 標準曲線的繪制 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 6個3cm比色管編號 1 2 3 4 5 6 加各種濃度VA標液1ml 10 20 30 40 50 60 ug/ml 乙酸酐d 1 1 1 1 1 1 于620nm波長處，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐調節(jié)吸 光度至零點；然后將標準比色系列按順序移入光路前，迅速 加入9ml三氯化銻一三

13、氯甲烷溶液，于6s內測定吸光度（每支 比色管都在臨測前加入顯色劑）。以維生素A含量為橫坐標， 以吸光度為縱坐標繪制曲線。 計算 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 式中 -維生素A含量； c-由標準曲線上查得樣品溶液中維生素A的含量，g/ml； c0-由標準曲線上查得樣品空白液中維生素A的含量，g/ml； m-樣品質量，g； V-樣品提取后加入三氯甲烷定容之體積，ml； 100-以每100g樣品計。 100 - = 0 V m cc x 說明及討論 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 維生素A極易被光破壞，實驗操作應在微弱光線下進行，或使用棕 色玻璃儀器。 乙醚為溶劑的萃取體系，易

14、發(fā)生乳化現(xiàn)象。在提取、洗滌操作中， 不要用力過猛，若發(fā)生乳化，可加幾滴乙醇破乳。 所用氯仿中不應含有水分,因三氯化銻遇水會出現(xiàn)沉淀，干擾比色 測定。故在每毫升氯仿中應加入乙酸酐1滴，以保證脫水。另外，由 于三氯化銻遇水生成白色沉淀，因此用過的儀器要用稀鹽酸浸泡后再 清洗。 說明及討論 （二）脂溶性V的測定 1.維生素A的測定 由于三氯化銻與維生素A所產(chǎn)生的藍色物質很不穩(wěn)定，通常生成6S 后便開始比色，產(chǎn)生藍色后立即讀取吸光度。 如果樣品中含-胡蘿卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干擾測定，可 將濃縮蒸干的樣品用正己烷溶解，以氧化鋁為吸附劑，丙酮、乙烷混 合液為洗脫劑進行柱層析。 （三）水溶性維生素的測

15、定 水溶性維生素B1、B2和C，廣泛存在于動植物組織中，飲食來源充 足。但是由于它們本身的水溶性質，除滿足人體生理、生化作用外，任 何多余量都會從小便中排出。為避免耗盡，需要經(jīng)常地由飲食來提供。 水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多數(shù)有機溶 劑。在酸性介質中很穩(wěn)定，既使加熱也不破壞；但在堿性介質中不穩(wěn)定， 易于分解，持別在堿性條件下加熱，可大部或全部破壞。它們易受空氣、 光、熱、酶、金屬離子等的影響； 維生素B2對光，特別是紫外線敏感，易被光線破壞； 維生素C對氧、銅離子敏感，易被氧化。 （三）水溶性維生素的測定 根據(jù)上述性質，測定水溶性維生素時，一般都在酸性溶液 中進行前處理

16、。 維生素Bl、B2 鹽酸水解 酶解 提取 純化 維生素C通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶 液直接提取。在一定濃度的酸性介質中，可以消除某些還 原性雜質對維生素C的破壞作用。草酸價廉，使用方便，對 維生素C有很好保護作用。 淀粉酶、淀粉酶、 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 活性人造浮石、活性人造浮石、 硅鎂吸附劑硅鎂吸附劑 （三）水溶性維生素的測定 維生素C是一種己糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以 又稱作抗壞血酸。維生素C廣泛存在于植物組織中，新鮮的 水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、 柑桔等食品中含量尤豐富。 維生素C具有較強的還原性，對光敏感，氧化后的產(chǎn)物 稱為脫氫抗壞血酸，仍然

17、具有生理活性。進一步水解則生 成2，3 -二酮古樂糖酸，失去生理作用。 1.維生素C的測定 （三）水溶性維生素的測定 維生素C具有烯二醇結構，具有較強的還原性，可發(fā)生氧化還原反應； 對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。 進一步水解則生成2，3 -二酮古樂糖酸，失去生理作用。 與糖類似的結構：具有糖類似的性質和反應，可用于鑒別。 1.維生素C的測定 O HO H OH OHOH O （三）水溶性維生素的測定 總維生素C包括：還原型、脫氫型及二酮古樂糖酸。 維生素C常 用的測定方法有 1.維生素C的測定 測測 定定 方方 法法 二氯靛酚法（還原型二氯靛酚法（還原型V VC C

18、） 熒光法熒光法 2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （總（總V VC C） 碘酸法碘酸法 碘量法碘量法 （三）水溶性維生素的測定 （一）二氯靛酚法（測定還原型抗壞血酸， GB/T 619586 ） 原理 1.維生素C的測定 還原型還原型 抗壞血酸抗壞血酸 還原型還原型2，6-二二 氯靛酚氯靛酚（無色）（無色） H H+ + 2，6-二氯靛二氯靛 酚（粉紅色）酚（粉紅色） + 脫氫型脫氫型 抗壞血酸抗壞血酸 + 還原型抗壞血酸可以還原染料2，6-二氯靛酚。該染料在酸性溶液 中呈粉紅色(在中性或堿性溶液中呈藍色)，被還原后顏色消失。 還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒

19、有 雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標準染料液的量，與樣品中抗杯 血酸含量成正比。 （三）水溶性維生素的測定 試劑 1.維生素C的測定 （1）2%草酸溶液 （2）0.000167mol/L KIO3標液 （3）1%淀粉溶液； （4）6%KI溶液； 088. 0= 2 1 V V T C6H8O6I2= C6H6O62HI 3(-)+5 I(-)+6 H(+)=3 I2+3 H2O （5）抗壞血酸標準溶液(1mg/ml)需標定 標定：吸標液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3 滴用0.00167mol/L KIO3標液滴定到淡蘭色。 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定

20、試劑 1.維生素C的測定 （6）0.02%2，6二氯靛酚溶液 標定：吸5ml已知濃度V C標液 加5ml 1%草酸 用染料2， 6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉紅色，在15秒不褪色為終點。 計算：每毫升2，6-二氯靛酚相當于維生素C的毫克數(shù)等于滴定 度（T） 2 1 = V VC T 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定 測定步驟 1.維生素C的測定 樣品樣品還原型還原型VcVc的提取的提取還原型還原型VcVc的測定的測定 （1）提取 鮮樣的提?。悍Q100g鮮樣加等量1%草酸溶液，倒入搗碎機中打成 勻漿，取10-40g勻漿（含1-2 mg抗壞血酸）倒入100ml容量瓶中，用 1%草酸溶液稀釋定容，混

21、勻。 干樣的制備：稱1-4g （含1-2 mg抗壞血酸）放入研缽內，加入 1%草酸溶液磨成勻漿，用草酸溶液定容到100ml。 上述溶液若顏色深，可加入白陶土，將上述溶液過濾，濾液備用 。 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定 測定步驟 1.維生素C的測定 （2）滴定 吸取5-10ml濾液，置于50ml三角瓶，快速加入2,6 二氯靛酚溶液滴定，直到紅色不能立即消失，而后再盡 快，逐滴加入，以呈現(xiàn)的粉紅色在15秒內不消失為終點 。 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定 計算 1.維生素C的測定 V -消耗染料體積（ml） V0-滴定空白時所消耗的燃料的體積（ml） T -1ml染料所能氧化維生素C

22、的毫克數(shù) 含有樣品的克數(shù) M-滴定時所取濾液中含樣品重量，g 100 )-( =)100/ 0 M TVV gmgC（維生素 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定 說明及注意事項 1.維生素C的測定 （1）樣品采取后，應浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止維生素C氧 化損失，測定過程要迅速。 （2）若樣品濾液顏色較深，可加入白陶土再過濾。不能使用活性碳進行 脫色處理，因為活性碳會氧化維生素C，同時還會吸附維生素C。 （3）貯存過久的罐頭食品，可能含大量的Fe2+，要用8%的醋酸代替2%草 酸。 （4）本法適用于果品、蔬菜及其加工制品中還原型抗壞血酸的測定（不 含二價鐵、二價錫、一價銅、二氧化硫

23、、亞硫酸鹽和硫代硫酸鹽）。 （5）若樣品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等還原性 雜質時，會使結果偏高。 二氯靛酚法 （三）水溶性維生素的測定 （二） 2，4-二硝基苯肼法（GB/T 5009.86-2003） 原理 1.維生素C的測定 還原型抗壞血酸脫氫型抗壞血酸 氧化氧化 二酮古樂糖酸 氧化氧化 二酮古樂糖酸 2，4-二硝基苯肼脎 濃硫酸濃硫酸 雙-2，4-二硝基苯 500nm比色 （三）水溶性維生素的測定 試劑 1.維生素C的測定 4.5mol/L硫酸 （9:1）硫酸:H2O 2% 2，4-二硝基苯肼 2%草酸 抗壞血酸標準溶液1mg/ml 2%硫尿 1%硫尿 1

24、mol/ml鹽酸 1%草酸 活性炭 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 標準曲線繪制 1.維生素C的測定 加2g活性碳 于50ml 1mg/ml抗壞血酸標準溶液中，振 搖1min，過濾。取10ml濾液置于500ml容量瓶中，加5.0g硫 尿，用1%草酸溶液稀釋至刻度，抗壞血酸濃度為20ug/ml。 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 測定步驟 1.維生素C的測定 樣品的制備顯色硫酸處理比色氧化 稱一定樣（100g)鮮樣 加等量2%草酸 于高 速搗碎機搗碎 取勻漿140g 用1%草酸定容 100ml 過濾濾液待用 取濾液25ml 加2g活性炭 搖1分鐘 靜置過濾 棄去初濾

25、液，取濾液10ml 加入2%硫脲溶液 混勻 得樣品氧化液 取上述氧化液各4ml于三支試管中向其中兩支管 加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白 將 三支管加蓋 于37保溫箱3小時 取出后樣品 管放入冰水中 樣品空白管取出后冷至室溫 在 樣品空白管加入2，4-二硝基苯肼 1ml 置于室溫 下放置10-15min 樣品管和空白管都于冰浴中 向上述已放入冰水中的三支試管各加入（9:1）H2SO4 5ml于各管中（邊加邊搖） 將試管從冰浴中取出 室溫下放置30分鐘后 立即比色，在520nm 測吸光度，從標準曲線 上查出相應的含量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 測定步驟 1

26、.維生素C的測定 取7個100ml容量瓶編號 1 2 3 4 5 6 7 加VC標液20ug/ml 5 10 20 25 40 50 60ml 加硫脲溶液（ml） 95 90 80 75 60 50 40ml 2，4-二硝基苯肼（ml） 1 1 1 1 1 1 1ml 按樣品測定步驟進行顯色反應，形成脎并比色。以抗壞血酸為縱坐標 ，吸光度為橫坐標繪制標準曲線。 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 結果計算 1.維生素C的測定 式中：X-樣品中總抗壞血酸含量，mg/100g c- 從標準曲線查得“樣品氧化液”中總Vc的濃度，ug/ml V-試樣用1%草酸定容的體積，ml m-樣品質量

27、，g F-樣品氧化處理過程中的稀釋倍數(shù) 1000 100 =F m VC X 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 注意事項 1.維生素C的測定 活性炭對抗壞血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧進 行界面反應，加入量過低，氧化不充分，過高則導致對抗壞血 酸的吸附作用，使測定結果偏低。 操作過程應避光。 試管從冰水中取出后，由于糖類的影響造成顯色不穩(wěn)定， 顏色會逐漸加深，30min后影響將減小，故加入硫酸后30min準 時比色。 檢出限：112ug/mL，所測結果為總量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 注意事項 1.維生素C的測定 活性炭對抗壞血酸的氧化作用，是基于其表

28、面吸附的氧進 行界面反應，加入量過低，氧化不充分，過高則導致對抗壞血 酸的吸附作用，使測定結果偏低。 操作過程應避光。 試管從冰水中取出后，由于糖類的影響造成顯色不穩(wěn)定， 顏色會逐漸加深，30min后影響將減小，故加入硫酸后30min準 時比色。 檢出限：112ug/mL，所測結果為總量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性維生素的測定 VB2在440500nm波長下光照產(chǎn)生綠色熒光，稀溶液中 其熒光強度與濃度呈正比。 一般在525nm下測定熒光強度。再在試液中加入低亞硫酸鈉 （Na2S2O4）還原VB2，使其熒光消失，再次測量試液中殘 余熒光，兩者相減極為VB2熒光強度，進一步查標準曲線測 算

29、。 3.維生素B2的熒光測定法 (GB 5413.92010 ) 高效液相色譜法測定維生素是近幾年發(fā)展起來的方法， 此法能快速分離和測定維生素和它的同分異構體、酯及其 衍生物。 高效液相色譜法（HPLC）是20世紀60年代末70年代初 發(fā)展起來的一種新型分離分析技術，隨著不斷改進與發(fā)展 ，目前已成為應用極為廣泛的化學分離分析的重要手段。 它是在經(jīng)典液相色譜基礎上，在技術上采用了高壓泵、高 效固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、 靈敏度高、操作自動化的特點。 （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB

30、5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器 進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶 液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相 對運動時, 經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分 在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱 內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記 錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色譜法概述 (High

31、 Performance Liquid Chromatography，HPLC) 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器 進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶 液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相 對運動時, 經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分 在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱 內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記 錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography

32、，HPLC) 高效液相色譜儀的結構示如下圖，一般可分為4個主要部分： 高壓輸液系統(tǒng)，進樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)。此外還配 有輔助裝置：如梯度淋洗，自動進樣及數(shù)據(jù)處理等。其工作 過程如下：注入欲分離的樣品時，流動相將樣品帶入色譜柱 進行分離，然后依先后順序進入檢測器，記錄儀將檢測器送 出的信號記錄下來，由此得到液相色譜圖。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB 5413.92010 ) （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chr

33、omatography，HPLC) u高壓輸液系統(tǒng) 由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細，因此對流動相阻力很大，為使 流動相較快流動，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。它是高效液相色譜儀 最重要的部件，一般由儲液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動阻 力器等組成，其中高壓輸液泵是核心部件。對于一個好的高壓輸液 泵應符合密封性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調范圍寬，便于 迅速更換溶劑及耐腐蝕等要求。常用的輸液泵分為恒流泵和恒壓泵 兩種。恒流泵特點是在一定操作條件下，輸出流量保持恒定而與色 譜柱引起阻力變化無關；恒壓泵是指能保持輸出壓力恒定，但其流 量則隨色譜系統(tǒng)阻力而變化，故保留時間的重現(xiàn)性差，它們各有優(yōu) 缺點。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。 (GB 5413.92010 ) （一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) u高壓輸液系統(tǒng) 優(yōu)點：泵容積小，易于清洗及更換流動相，泵壓較高，可達400MPa。 缺點：脈沖較大，需要有阻尼器或采用雙泵系統(tǒng)來克服脈沖，達到恒 定的流速。雙泵系統(tǒng)根據(jù)連接方式的不同分為串聯(lián)式和并聯(lián)式雙柱塞 往復泵。 (GB