專題歸納整合5

1、專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)和蛋白質(zhì)技術(shù) 專題整合歸納專題整合歸納 1 1網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 2 2真題演練真題演練 網(wǎng)網(wǎng) 絡(luò)絡(luò) 構(gòu)構(gòu) 建建 真真 題題 演演 練練 1(2015江蘇卷，25)圖1、2分別為“DNA的粗提取與 鑒定”實(shí)驗(yàn)中部分操作步驟示意圖，下列敘述正確的是 ( ) A圖1、2中加入蒸餾水稀釋的目的相同 B圖1中完成過濾之后保留濾液 C圖2中完成過濾之后棄去濾液 D在圖1雞血細(xì)胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質(zhì) BCD 圖圖1圖圖2 解析圖1加入蒸餾水的目的是使雞血細(xì)胞吸水漲破，圖 2加入蒸餾水的目的是稀釋NaCl溶液，A錯(cuò)誤；圖1中加入 蒸餾水后，DNA存在于濾液中，B正確；圖2

2、中加入蒸餾 水后，NaCl溶液濃度降低，DNA析出，所以棄去濾液，C 正確；嫩肉粉主要成分是蛋白酶，雞血細(xì)胞液中加入少許 嫩肉粉可將蛋白質(zhì)水解成小分子肽或氨基酸，除去蛋白質(zhì) ，D正確。 2(2015廣東卷，3)關(guān)于DNA的實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是( ) A用兔的成熟紅細(xì)胞可提取DNA BPCR的每個(gè)循環(huán)一般依次經(jīng)過變性延伸復(fù)性三步 CDNA溶液與二苯胺試劑混合，沸水浴后生成藍(lán)色產(chǎn)物 D用甲基綠對(duì)人的口腔上皮細(xì)胞染色，細(xì)胞核呈綠色， 細(xì)胞質(zhì)呈紅色 解析成熟的哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核和眾多細(xì)胞 器，不含DNA，不適于提取DNA，A錯(cuò)；PCR每個(gè)循環(huán)依 次為變性、復(fù)性、延伸三步，B錯(cuò)誤；DNA與二苯胺試

3、劑 混合，在沸水浴條件下呈藍(lán)色，可以用來鑒定DNA，C正 確；用甲基綠吡羅紅試劑對(duì)人的口腔上皮細(xì)胞染色，細(xì)胞 核呈綠色，細(xì)胞質(zhì)呈紅色。 C 乳糖乳糖 凝固劑凝固劑 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 (2)培養(yǎng)微生物L(fēng)前，宜采用_方法對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅 菌。 (3)純化后的乳糖酶可用電泳法檢測(cè)其分子量大小。在相同 條件下，帶電荷相同的蛋白質(zhì)電泳速度越快，說明其分子 量越_。 (4)乳糖酶宜采用化學(xué)結(jié)合法(共價(jià)鍵結(jié)合法)進(jìn)行固定化， 可通過檢測(cè)固定化乳糖酶的 _確定其應(yīng)用價(jià)值。 除化學(xué)結(jié)合法外，酶的固定化方法還包括_、 _、離子吸附法及交聯(lián) 法等。 灼燒灼燒 小小 (酶酶)活性活性或或(酶酶)活力活力 包埋法包埋

4、法物理吸附法物理吸附法(注：兩空可顛倒注：兩空可顛倒) 解析已知乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖 ，篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L(fēng)時(shí)，宜用乳糖作為培養(yǎng)基中的 唯一碳源，培養(yǎng)基中瓊脂的作用是凝固劑，從功能上講， 這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)為了避免雜菌污染，在培 養(yǎng)微生物前，對(duì)接種環(huán)等接種工具應(yīng)采用灼燒滅菌。(3)用 電泳法純化乳糖酶時(shí)，若在相同條件下分離帶電荷相同的 蛋白質(zhì)，則其分子量越小，電泳速度越快。(4)固定化酶的 應(yīng)用價(jià)值與酶的活性(或活力)有關(guān)，因此用化學(xué)結(jié)合法固 定化乳糖酶時(shí)，可通過檢測(cè)固定化乳糖酶的活性(或活力) 來確定其應(yīng)用價(jià)值。酶的固定化方法包括化學(xué)結(jié)合法、包 埋法、物理吸

5、附法、離子吸附法及交聯(lián)法等。 4(2017江蘇卷，33)金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的 金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金 屬?gòu)U水的凈化處理。PCR擴(kuò)增過程示意圖如下，請(qǐng)回答下 列問題： (1)從高表達(dá)MT蛋白的生物組織中提取mRNA，通過 _獲得_用于PCR擴(kuò)增。 (2)設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物(引物1和 引物2)，為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)?_位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物 之間形成_，而造成引物自連。 (3)圖中步驟1代表_，步驟2代表退火，步驟3代 表延伸，這三個(gè)步驟組成一輪循環(huán)。 (

6、4)PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫 度過高會(huì)破壞_的堿基配對(duì)。退火溫度的 設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān)，長(zhǎng)度相同但 _的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。 (5)如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則可以采取的改 進(jìn)措施有_(填序號(hào)：升高退火溫度降低退 火溫度重新設(shè)計(jì)引物)。 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄 cDNA 限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì) 變性變性 引物與模板引物與模板 GC含量高含量高 解析(1)PCR技術(shù)可在體外對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，模板可以 是mRNA經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA。(2)設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因 兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物(引物1和引物2)時(shí)，需在引物中 增加適當(dāng)?shù)南拗菩院怂醿?nèi)切酶的識(shí)別序列，便于目的基因 與質(zhì)粒的連接。為了避免引物自連，設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免 引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)。(3)根據(jù)PCR的過程可知， 圖中步驟1為變性，步驟2為退火(復(fù)性)，步驟3為延伸， 這三個(gè)步驟構(gòu)成一個(gè)循環(huán)。(4)退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度 、堿基組成有關(guān)，過高的退火溫度會(huì)破壞引物與模板的堿 基配對(duì)。因G、C之間的氫鍵數(shù)多于A、T之間的氫鍵數(shù)， 故GC含量高的引物需