藤茶對食品的防腐抑菌研究

1、 學(xué)科分類號 0818 本科生畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))題目（中文）： 藤茶對食品的防腐抑菌研究 （英文）： the preservative research of rattan in food學(xué)生姓名： 彭璐璐學(xué)號：0512402025 系別： 生命科學(xué)系 專業(yè)： 生物工程指導(dǎo)教師： 劉勝貴 起止日期：2008.1-2009.5 2009年5月16日 懷化學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠信聲明作者鄭重聲明：所呈交的本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)），是在指導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果，成果不存在知識產(chǎn)權(quán)爭議。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的成果。對論文的研究做出重要貢

2、獻(xiàn)的個人和集體均已在文中以明確的方式標(biāo)明。本聲明的法律結(jié)果由作者承擔(dān)。本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者簽名：彭璐璐2009年5月16日 目 錄摘 要 1關(guān)鍵詞1abstract 2key words2前言31 材料與方法41.1 材料41.1.1 試驗(yàn)樣品41.1.2 生化試劑41.1.3 供試菌種4 1.1.4 供試食品41.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器51.1.6 培養(yǎng)基51.2 方法51.2.1 水提取物制備51.2.2 菌懸液制備51.2.3 抗微生物活性試驗(yàn)61.2.4 最低抑菌濃度（mic）測定6 1.2.5 食品溶液制備 7 1.2.6 抑菌食品溶液制備 7 1.2.7 食品防腐測驗(yàn) 82 結(jié)果 9

3、2.1不同月份顯齒蛇葡萄葉抗微生物活性。 10 2.2 7月份顯齒蛇葡萄葉最低抑菌濃度（mic） 102.3抑菌食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)結(jié)果112.3.1牛奶抑菌食品液 112.3.2豆?jié){抑菌食品液 122.3.3西瓜抑菌食品液 132.3.4肉湯抑菌食品液 143 討論 15參考文獻(xiàn) 16致 謝 17藤茶對食品的防腐抑菌研究摘 要 為研究藤茶類植物對食品的防腐抑菌效果，采摘顯齒蛇葡萄葉作為試驗(yàn)材料，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、腐生葡萄球菌6種微生物為試驗(yàn)菌株，用藥敏紙片擴(kuò)散法測定不同月份的顯齒蛇葡萄葉抑菌圈直徑，通過二倍稀釋法測定mic值，以平板菌落計(jì)數(shù)法

4、進(jìn)行食品防腐測驗(yàn)。結(jié)果表明：葉提取物對腐生葡萄球菌抑菌作用最強(qiáng)，不同月份的抑菌圈直徑分別為9.1、18.2、12.3mm；抑菌效果最強(qiáng)的7月份葉mic為0.0078 g/ml；1/2mic、1mic濃度抑菌食品溶液對細(xì)菌生長有一定的抑制作用，但防腐作用都不太明顯，而2mic、和4mic濃度抑菌食品溶液都可相對的延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間，相比較對肉湯和牛奶防腐作用更強(qiáng)，對西瓜和豆?jié){防腐作用較弱。結(jié)論說明：藤茶植物有抑菌作用，而且對肉類、奶制品、水果和豆制品都有防腐作用。關(guān)鍵詞顯齒蛇葡萄；水提取物；藥敏紙片擴(kuò)散法；二倍稀釋法；菌落計(jì)數(shù)法 the preservative research of rat

5、tan in food abstract for the study of the rattan plants preservative effect in food, picked some leaves of ampelopsis grossedentata as materials, adopted e.coli, staphylococcus aureus ,proteus vulgaris, salmonella typhimurium, bacillus subtilis, staphylococcus saprophyticas as microbial strains, use

6、d drug diffusion study the ampelopsis leaves bacteriostasis zone diameter for different months, made double dilution method study their mic, counted the number of colonies study its antiseptic effect in food. the results showed that there is the strongest inhibitory effect for staphylococcus saproph

7、yticas and the biggest bacteriostasis zone diameter of 9.1, 18.2,12.3 millimeter, and the ampelopsis leaves for july had the strongest inhibitory effect and its minimum bacteriostasis concentration is the 0.0078g / ml, and the foods bacteriostasis solution of 1/2mic, 1mic concentration had inhibitor

8、y effect for bacterial growth, but less obvious role in anti-corrosion, and the foods bacteriostasis solution of 2mic, 4mic concentration could relatively extend time which is the shelf life of food solution, compared each other, the meat and milk had better effect than fruit and soy. the result sho

9、wed that rattan leaves had preservative effect for meat, milk, fruit and soy.key words ampelopsis grossedentata; water extract; drug diffusion in disk ; double dilution ; count the number of colonies;前言藤茶即顯齒蛇葡萄(ampelopsis grossedentata)系葡萄科蛇葡萄屬中的一種野生藤本植物，為粵蛇葡萄的變種。顯齒蛇葡萄的嫩葉經(jīng)過殺青、揉捻、烘干而成的“保健茶”制品稱為藤茶，既可用

10、于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型肝炎、皰疔等癥，又可日常沖泡飲用，清涼解渴，是典型的藥食兩用植物。藤茶的形態(tài)特征為：小枝圓柱形，有顯著的縱棱紋，無毛，卷須2叉分枝；相隔2節(jié)間斷與葉對生、葉為12回羽狀復(fù)葉，2回羽狀復(fù)葉者，基部一對為3小葉，小葉卵圓形、卵橢圓形、長橢圓形，長25厘米，寬12.5厘米，頂端急尖或間尖、基部近圓形，邊緣每側(cè)有25個鋸齒，葉面綠色，背面淺綠色，兩面均無毛；聚傘花序，5月現(xiàn)蕾，6月開花，花小，黃綠色，非常袖珍點(diǎn)綴于藤蔓上燦若繁星；漿果紫黑色，可食用，像葡萄一樣開胃。藤茶的適應(yīng)性很強(qiáng)，喜溫暖濕潤山坡的環(huán)境，一般生長在海拔2001300米的溝谷林中或灌木叢里，廣泛分布于長江

11、以南的廣東、廣西、湖南、湖北西部、江西、福建、云南、貴州等省，喜濕潤而略偏酸性的紅黃壤或肥沃砂質(zhì)壤土，在砂地或鹽堿地上生長發(fā)育嚴(yán)重受阻或不能生存。由于生長環(huán)境遠(yuǎn)離工礦區(qū)、城鎮(zhèn)、交通線、人類活動場所及醫(yī)院、避開了三廢污染及病原生物污染。顯齒蛇葡萄以茶葉的形式在食品中的應(yīng)用有著數(shù)百年的歷史,把顯齒蛇葡萄加工成具有高品質(zhì)的茶葉在顯齒蛇葡萄應(yīng)用于食品行業(yè)過程中顯得相當(dāng)?shù)闹匾?。為得到一條能很好的把顯齒蛇葡萄加工成茶葉的工藝,易誠根據(jù)傳統(tǒng)的民間藤茶加工工藝設(shè)計(jì)出三條加工工藝,對藤茶成品和成品的茶水以感官評定,選取了一條最佳的工藝:原料分級清洗攤放殺青揉捻燜青曬干冷卻回潤密封保存,并通過實(shí)驗(yàn)設(shè)定了關(guān)鍵工藝參

12、數(shù):將藤茶進(jìn)行分級后在150-160的溫度下殺青,經(jīng)手工揉捻20min-25min,40-50下燜青6h12h,太陽光下曬或烘至產(chǎn)品表面呈白霜狀物質(zhì)出現(xiàn)。目前不少學(xué)者對顯齒蛇葡萄的藥理功能已進(jìn)行了一系列的研究。劉勝貴等人使用藥敏紙片法、試管二倍稀釋法測定了顯齒蛇葡萄對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、雞沙門氏桿菌、糞腸球菌、陰溝腸桿菌等5種細(xì)菌的抑菌效果，結(jié)果表明:顯齒蛇葡萄的根、莖、幼葉提取物對5種細(xì)菌均有抑菌作用,以幼葉提取物抑菌效果最強(qiáng),說明顯齒蛇葡萄具有廣譜高效的抑菌作用,但不同器官的抑菌作用有較大的差別。曾春暉等對藤茶中aps體外抗菌實(shí)驗(yàn)表明:aps對標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄

13、球菌、綠膿桿菌有直接抑制作用,且與藥物劑量呈正相關(guān)。廣西中醫(yī)學(xué)院覃驪蘭全面分析了藤茶的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展，說明了藤茶有效成分為黃酮類物質(zhì),如蛇葡萄素、雙氫楊梅樹皮素、楊梅樹皮素、福建茶素、龍涎香醇、-谷甾醇、楊梅黃素、楊梅甙等;顯齒蛇葡萄總黃酮為其主要化學(xué)成分,含量高達(dá)45.52%，雙氫楊梅樹皮素(aps)是含量最高的黃酮類化合物,又名雙氫楊梅素、二氫楊梅素、福建茶素、白敬素、蛇葡萄素。張友勝等從顯齒蛇葡萄中分離出4種化合物,分別是蘆丁、沒食子酰-d-葡萄糖、沒食子酸乙酯和沒食子酸。王華夫等用gc和ms系統(tǒng)測定顯齒蛇葡萄中的香氣組成,鑒定出28種香氣成分,占香精油總量的64%,主要成分

14、為反-2-己烯醛、乙酸順-3-己烯酯、三甲基吡嗪、苯乙醛、-萜品醇、水楊酸甲酯、香葉醇、紫羅酮、順茉莉酮、雪松醇、6,10,14-三甲基地-十五烷酮等。中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所對藤茶的營養(yǎng)成分進(jìn)行了分析,結(jié)果如下:每100 g 藤茶產(chǎn)品含水分9. 4 g、熱量291kcal 、蛋白質(zhì)20. 4 g、脂肪0. 8 g、胡蘿卜素5. 23 mg、維生素e 6. 32 mg、鐵10. 1 mg、鋅1. 58 mg、鈣411. mg、銅0. 67 mg、鎂121. 6 mg、錳68. 9 mg、鉀468. 9mg、磷344. 1 mg、膳食纖維14. 6 g、硒10. 62g。與茶葉類相

15、比,其營養(yǎng)成分較齊全,優(yōu)于一般茶葉,可與我國名茶相媲美,而硒的含量高于綠茶和花茶。唐瑛的實(shí)驗(yàn)證明,agtf能極顯著抑制h2o2誘導(dǎo)的小鼠紅細(xì)胞溶血,有較強(qiáng)的抗h2o2誘導(dǎo)氧化的活性;小鼠血清體外抗氧化實(shí)驗(yàn)顯示,agtf可明顯增加小鼠血清抗活性氧能力,從而表明agtf可增加小鼠血清和紅細(xì)胞的抗氧化損傷能力。伍楊等實(shí)驗(yàn)證明鳳鳴藤茶能有效降低小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平,防止體內(nèi)抗氧化酶受自由基誘導(dǎo)的氧化損傷,顯著增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所將京湘牌中國藤茶用水(醇) 提取其有效成分,并進(jìn)行抗菌、抗病毒篩選,結(jié)果表明,提取物對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有抗菌活性,因此具有廣普抗菌作用,其中

16、對5 株金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和肺炎桿菌抗菌活性最強(qiáng);對流感甲型及乙型病毒均有抑制作用，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,京湘牌中國藤茶對流感、肺炎、咽喉炎、結(jié)膜炎等病毒與細(xì)菌性感染疾病有預(yù)防及治療作用。這些研究全面、系統(tǒng)地分析了顯齒蛇葡萄的主要生化成分的含量及組成；探明顯齒蛇葡萄的抗菌效果及藥理。結(jié)果表明：顯齒蛇葡萄及其提取物具有多種保健作用,包括抗炎鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰,保肝護(hù)肝、減輕乙醇中毒,抗高血壓、消脂、抗腫瘤。因此藤茶是一種非常寶貴的植物資源，我們要合理的開發(fā)利用。 為發(fā)展藤茶資源，許多學(xué)者通過選擇顯齒蛇葡萄嫩莖，采用不同培養(yǎng)基質(zhì)、不同濃度、類型的生長調(diào)節(jié)劑處理，對顯齒蛇葡萄綠枝扦插繁殖技術(shù)進(jìn)行了研

17、究，同時(shí)選擇不同的培養(yǎng)基，不同濃度、類型的激素在不同條件下進(jìn)行顯齒蛇葡萄組織培養(yǎng)育苗試驗(yàn)的研究。在此基礎(chǔ)上，以顯齒蛇葡萄葉為原料進(jìn)行藤茶手工加工和藤茶機(jī)械加工工藝的研究；以加工的藤茶為原料，進(jìn)行藤茶袋泡茶及藤茶飲料生產(chǎn)工藝的研究。使之在不影響顯齒蛇葡萄生態(tài)資源的情況下，能盡可能得滿足人們對它在茶飲用和作為藥物原材料上的需求。1 材料與方法1.1 材料 1.1.1 試驗(yàn)樣品 顯齒蛇葡萄葉，于2008年4月、7月、11月采自湖南通道侗族自治縣。1.1.2 生化試劑 蛋白胨（生化試劑，上海東海制藥廠出品），酵母浸粉（生化試劑，北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司），瓊脂粉（生化試劑，北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任

18、有限公司），nacl（分析純，成都市金山化工試劑廠），naoh（分析純，天津市化學(xué)試劑批發(fā)部經(jīng)銷）。1.1.3 供試菌種 大腸桿菌(escherichia coli )，金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus cctccab91053)，普通變形桿菌(proteteus vulgaris cctccab91103)，鼠傷寒沙門氏菌（salmonella typhi），枯草芽孢桿菌(bacillus subtilis)，腐生葡萄桿菌(staphylococcus saprophytic)，以上菌種均由懷化學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。1.1.4供試食品 牛奶，豆?jié){，鮮豬肉，新鮮西瓜

19、均為市售。1.1.5 試驗(yàn)儀器 立式壓力蒸汽滅菌器（yxq-ls-50s1，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），電熱恒溫培養(yǎng)箱（dhp-2000型，天津市華北實(shí)驗(yàn)有限公司），cj型水平層流凈化工作臺（蘇州潔凈技術(shù)研究所制造），sigma3k-18型離心機(jī)(德國sigma公司生產(chǎn))，qyq-1000-ul/qyq- 200-ul移液槍（北京青云航空儀表有限公司生產(chǎn)）。1.1.6 培養(yǎng)基 lb(luria-bertani)液體培養(yǎng)基：蛋白胨10g，nacl 10g，酵母粉5g，用1mol/l naoh調(diào)節(jié)ph 7.0，蒸餾水定容至1000 ml。lb固體培養(yǎng)基：在lb液體培養(yǎng)基中加1.6%的瓊脂粉。

20、于0.1 mpa、121下滅菌1520 min，置于潔凈環(huán)境備用。1.2 方法1.2.1 水提取物制備 顯齒蛇葡萄提取物制備方法按照文獻(xiàn)6進(jìn)行改進(jìn)。將顯齒蛇葡萄葉洗凈，于60恒溫箱中烘干至恒重，用組織粉碎機(jī)粉碎后，稱取4月、7月、11月葉粉末每種30g，分別加入100 ml蒸餾水，待煮沸后再用文火煎30 min，濾出煎液，在濾渣中加100ml蒸餾水再用文火煎30 min，把兩次煎液混合，于8 000 r/min離心10 min，去除沉淀，并將煎液濃縮至30 ml，制備成的提取物濃度為1 g/ml， 4冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2 菌懸液制備 菌懸液制備方法按文獻(xiàn)進(jìn)行。將供試菌種分別接種在lb固體培

21、養(yǎng)基上，37 活化培養(yǎng)24 h，挑取活化后的菌落與無菌生理鹽水中混合，并用生理鹽水調(diào)至0.5 mcfarland單位的標(biāo)準(zhǔn)接種物，即為11082108 cfu/ ml的菌懸液濃度。再用無菌生理鹽水按10倍稀釋法將標(biāo)準(zhǔn)接種物配成106 cfu/ ml的菌懸液。1.2.3 抗微生物活性試驗(yàn) 將濾紙打成直徑為6 mm的圓形濾紙片，滅菌、烘干后放入顯齒蛇葡萄提取物中充分浸泡，取出后低溫烘干，制成藥敏紙片。按照固體培養(yǎng)基的制備方法準(zhǔn)備數(shù)量充足的固體平板，用200 ul移液槍吸取0.1 ml濃度為106 cfu/ ml的菌懸液于含lb固體培養(yǎng)基的平板中央，用玻璃涂棒在超凈工作臺上的酒精燈火焰周圍利用無菌操

22、作將菌液均勻涂布于平板上。含菌平板倒置干燥約30 min后，用鑷子取藥敏紙片均勻貼在平板上，每個平板貼3個藥敏紙片，相對應(yīng)地貼好標(biāo)簽。20 min后，放入37 恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h。測量抑菌圈直徑，以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。1.2.4 最低抑菌濃度（mic）測定 在無菌條件下，將無菌試管分成5大組，每組10支。第1支試管中加入1 ml2倍濃度的lb液體培養(yǎng)基，其余各支試管加入1 ml lb液體培養(yǎng)基，再向第1支試管中加入1 ml提取液后混勻，然后從第一支試管中取1 ml溶液到第二支試管中混勻，以此類推，一直到加入第十支試管混勻后，從第十支試管中取出1 ml溶液棄取。結(jié)果使各管中的提取液濃度呈二

23、倍稀釋變化。然后向各管中加入0.1 ml的含1106 cfu/ml的細(xì)菌懸液，將培養(yǎng)物置于37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。觀察培養(yǎng)物生長情況，測定mic值。1.2.5食品溶液制備 牛奶和豆?jié){加熱煮沸4 冰箱保存?zhèn)溆?。鮮豬肉用搗碎機(jī)搗碎成泥后，加100ml蒸餾水用文火煮50min后取湯汁4 冰箱保存?zhèn)溆谩Ｐ迈r西瓜在無菌條件下打開取汁4 冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.6不同提取物濃度的食品溶液制備按7月份顯齒蛇葡萄最低抑菌濃度配制不同提取物濃度的食品溶液。如下表1-1所示數(shù)據(jù)配制后將制備液裝入容器中4 冰箱保存?zhèn)溆谩Ｌ崛∫后w積（ml）食品液體積（ml）總體積（ml）提取物最終濃度（g/ml）00101001

24、/2mic0.6259.375100.00391mic1.258.75100.00782mic2.57.5100.01564mic55100.0313 1-1表1.2.7食品防腐實(shí)驗(yàn)將配制好的不同濃度的抑菌食品液分裝入大試管中，每支試管10ml共20支試管。將其放入37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間以不同的時(shí)間4小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、16小時(shí)、20小時(shí)為間隔每次取0.1 ml的樣品溶液于含lb固體培養(yǎng)基的平板中央，用玻璃涂棒在超凈工作臺上的酒精燈火焰周圍利用無菌操作將菌液均勻涂布于平板上。放入37恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h。第二天觀察細(xì)菌生長情況，并通過菌落計(jì)數(shù)法來記錄細(xì)菌的生長情

25、況。2 結(jié)果2.1 不同生長時(shí)期顯齒蛇葡萄抑菌效果通過三次重復(fù)的藥敏紙片試驗(yàn)，得到顯齒蛇葡萄提取物抑菌圈直徑的平均值（包含藥敏紙片部分），結(jié)果如表2-1：實(shí)驗(yàn)菌種提取物抑菌圈直徑（mm）4月份7月份11月份escherichia coli8.017.011.3staphylococcus aureus7.817.612.1staphylococcus saprophytic9.118.212.3bacillus subtilis7.516.810.8proteteus vulgaris7.016.110.0 2-1表顯齒蛇葡萄提取物對所有供試菌都顯示了抗菌活性。其中對腐生葡萄球菌抑菌作用最強(qiáng)，

26、其7月份的顯齒蛇葡萄提取物的抑菌圈直徑達(dá)到18.2 mm；其次是大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，對枯草芽孢桿菌和普通變形桿菌抑菌活性相對較弱，變形桿菌4月份的抑菌圈直徑只有7.0 mm。三個不同生長時(shí)期的顯齒蛇葡萄提取物抑菌效果最強(qiáng)的是7月份的顯齒蛇葡萄，抑菌效果最弱的是4月份的顯齒蛇葡萄。2.2 7月份顯齒蛇葡萄葉最低抑菌濃度（mic）7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對7供試菌種的最低抑菌濃度如下表2-2所示： 供試菌種mic（g/ml）escherichia coli0.0078staphylococcus aureus0.0078 staphylococcus saprophytic0.0039 sa

27、lmonella typhi0.0078 proteteus vulgaris0.0156 2-2表7月份顯齒蛇葡萄提取物對腐生葡萄球菌抑菌效果最強(qiáng)，mic為0.0039 g/ml；對普通變形桿菌抑菌效果最弱，mic為0.0156 g/ml。但對于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌大部分供試菌種來說其最低抑菌濃度為0.0078g/ml。2.3 不同提取物濃度的食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1牛奶食品溶液不同提取物濃度的牛奶食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表2-3-1所示：時(shí)間0（對照）1/2 mic1 mic2 mic4 mic 4h4.3*1037.5*103 - - 8h5.8*104

28、4.35*1047.1*102 - - 12h2.27*10512.9*10412.4*104 - - 16h2.29*1057.78*1052.6*105 - - 20h1.6*1061.228*1064.4*105 - - 24h1.6*1064.8*1065.7*105 - - 32h+4.8*1061.06*1062.45*104 - 40h + +1.06*1068.43*105 - 48h + + +8.8*105 - 56h + + +2.4*106 - 64h + + +2.4*106 - 72h + + + + - 80h + + + +2.3*102 90h + + + +

29、5.8*103 106h + + +1.46*104 120h + + + +2.0*105 124h + + + +1.86*106 136h + + +1.86*106 2-3-1表 “-”表示不長菌，“+”表示細(xì)菌成片生長趨于穩(wěn)定。對以上數(shù)據(jù)做細(xì)菌生長對數(shù)圖所示(x表示時(shí)間，y表示細(xì)菌生長對數(shù)；b-f分別代表0、1/2、1、2、4mic的濃度)：不同提取物濃度的牛奶食品溶液防腐效果有很大差別。1/2mic濃度牛奶食品溶液無防腐作用，不能延長牛奶的抑菌時(shí)間，并且與0mic一樣在020 h細(xì)菌呈對數(shù)生長；1mic濃度牛奶食品溶液防腐效果不明顯，延長抑菌時(shí)間4小時(shí)，在432 h呈對數(shù)生長；2m

30、ic可以延長抑菌時(shí)間24 h，在2456 h呈對數(shù)生長；4mic牛奶食品溶液防腐效果最明顯，可延長食品溶液抑菌時(shí)間72h ，在72124h細(xì)菌也呈對數(shù)生長。2.3.2豆?jié){食品液不同提取物濃度的豆?jié){食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表2-3-2所示：時(shí)間0mic（對照）1/2 mic1 mic2 mic4 mic 4h1.05*1061.5*105 3.49*103 - 8h3.5*1069.35*1055.28*104 - - 12h7.3*1066.5*1064.59*106 - - 16h7.3*1073.65*1073.2*107 - - 20h7.3*1073.65*1073.2*107

31、6.9*103 - 24h+2.6*105 - 32h+ +5.3*1062.08*102 40h + +2.28*1074.6*104 48h + + +2.28*1071.86*105 56h + + +2.27*106 64h + + + +3.49*107 72h + + + +3.49*107 2-3-2表 “-”表示不長菌，“+”表示細(xì)菌生長趨于穩(wěn)定對以上數(shù)據(jù)做細(xì)菌生長對數(shù)圖 (x表示時(shí)間，y表示細(xì)菌生長對數(shù)；b-f分別代表0、1/2、1、2、4mic的濃度)：不同提取物濃度的豆?jié){食品溶液防腐效果不同。其中1/2mic、1mic豆?jié){抑菌食品溶液無防腐作用，不能延長食品抑菌時(shí)間；2m

32、ic豆?jié){食品溶液防腐效果較強(qiáng)，可延長食品溶液抑菌時(shí)間16h，在1640 h細(xì)菌生長的對數(shù)圖成拋物線；而4mic豆?jié){食品溶液可延長食品溶液抑菌時(shí)間24 h，在2464 h細(xì)菌呈對數(shù)生長。2.3.3西瓜食品溶液不同mic濃度西瓜抑菌食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表2-3-3所示：時(shí)間0mic（對照）1/2 mic1 mic2 mic4 mic 4h6.0*1022.0*102 5.2*102 - 8h4.96*1061.8*1051.46*104 - - 12h3.85*1072.0*1074.1*106 - - 16h3.85*1072.0*1074.9*107 - - 20h+4.9*107

33、8.1*104 - 24h+1.3*106 - 32h+ +2.4*1071.8*102 40h + +2.4*1073.37*103 48h + + +8.39*104 56h + + +1.0*106 64h + + + +4.8*107 72h + + + +4.8*107 2-3-3表 “-”表示不長菌，“+”表示細(xì)菌生長趨于穩(wěn)定不同mic濃度西瓜抑菌食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表生長曲線對數(shù)圖所示(x表示時(shí)間，y表示細(xì)菌生長對數(shù)；b-f分別代表0、1/2、1、2、4mic的濃度)：不同mic濃度西瓜抑菌食品溶液防腐效果不一樣。其中1/2mic、1mic西瓜抑菌食品溶液防腐作用很弱

34、。2mic和4mic西瓜抑菌食品溶液防腐效果較強(qiáng)，分別延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間約20h、52h。2.3.4肉湯抑菌食品液不同mic濃度肉湯抑菌食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表2-3-4所示：時(shí)間0mic（對照）1/2 mic1 mic2 mic4 mic 4h1.08*104- - - 8h3.3*1061.38*105- - - 12h8.13*1066.0*105- - - 16h2.27*1071.34*1071.03*106 - - 20h2.27*1071.34*1072.68*107 6.0*102 - 24h+2.68*107 9.3*104 - 32h+ +2.27*106 -

35、40h + +3.6*106 - 56h + + +3.6*107 - 64h + + +3.6*107 - 72h + + + + - 92h + + + +- 116h + + + +- 140h + + +4.72*103 148h + + + +8.35*104 156h + + + +2.33*105 164h + + +2.27*106172h+6.83*107180h+6.83*107 2-3-4表 “-”表示不長菌，“+”表示細(xì)菌成片生長無法記數(shù)不同mic濃度肉湯抑菌食品溶液防腐實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生長情況如下表生長曲線對數(shù)圖所示(x表示時(shí)間，y表示細(xì)菌生長對數(shù)；b-f分別代表0、1/2、

36、1、2、4mic的濃度)：不同mic濃度肉湯抑菌食品溶液防腐效果有很大差別。其中1/2mic肉湯抑菌食品溶液防腐作用很弱。1mic肉湯抑菌食品溶液與1/2mic相比防腐作用要強(qiáng)，但延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間并不長。2mic肉湯抑菌食品溶液防腐效果較強(qiáng)，可延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間約40h。4mic肉湯抑菌食品溶液防腐效果很強(qiáng)，可延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間約156h。7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對四種食品的防腐作用相互比較，其中1/2mic、1mic濃度抑菌食品溶液對細(xì)菌生長有一定的抑制作用，但防腐作用都不太明顯。而2mic、和4mic濃度抑菌食品溶液都可相對的延長食品溶液保質(zhì)時(shí)間，其中7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對肉湯

37、和牛奶防腐作用更強(qiáng)，對西瓜和豆?jié){防腐作用相對較弱。3 討論由于目前化學(xué)食品防腐劑的泛濫，對人類的身體健康造成了十分嚴(yán)重的危害，尋找新的天然抗菌防腐劑已成為食品防腐研究的熱點(diǎn)。從民族本土傳統(tǒng)抗菌植物中篩選新的抗菌防腐植物是食品防腐研究與開發(fā)的有效途徑，并已取得了進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)使用的顯齒蛇葡萄葉是湖南通道侗族人們?nèi)粘Ｉ钪酗嬘玫牟枞~中的最為常見的一種，并且指導(dǎo)老師劉勝貴老師早前已通過實(shí)驗(yàn)證明其有很強(qiáng)的抑菌作用。通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)了顯齒蛇葡萄葉對肉類、奶制品、水果和豆制品都有防腐作用，為開發(fā)新的天然抗菌防腐劑奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。顯齒蛇葡萄葉提取物良好的抗微生物作用，也可以用于治療感染性疾病的研究。其

38、中的抗微生物活性物質(zhì)成分有待更進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)使用藥敏紙片擴(kuò)散法和試管二倍稀釋法分別測定了微生物抗菌活性，顯示了兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果相關(guān)性。并通過以上兩個實(shí)驗(yàn)的結(jié)果利用菌落計(jì)數(shù)法測定微生物的生長情況以反映食品防腐抑菌效果。藥敏紙片擴(kuò)散法結(jié)果取決于抗菌有效成分的溶解性和在瓊指培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散性，是一種半定量的研究方法，是初步篩選抗菌植物有效途徑。試管二倍稀釋法則是一種精確測定抗菌活性的方法。菌落計(jì)數(shù)法是通過數(shù)菌落的方式直觀的反映出細(xì)菌的生長狀況。研究結(jié)果表明，顯齒蛇葡萄葉對肉類、奶制品防腐抑菌作用較強(qiáng)，但對水果和豆制品的防腐抑菌效果稍弱。但由于顯齒蛇葡萄葉提取液有很深的顏色，添入食品中會對其外觀造成很大

39、影響，進(jìn)而影響食品的銷售。因此將顯齒蛇葡萄葉開發(fā)成新的天然抗菌防腐劑并投入食品工廠大批量添加生產(chǎn)目前還不適宜。需要更進(jìn)一步的研究。參考文獻(xiàn)1 rabe t, van j: antibacterial activity of south african plants used for medicinal purposes. j ethnopharmacol 1997, 56:81-87.2 olukoya, d.k., idiaka, n., odugbemi, a. antibacterial activities of some plants in nigeriaj. ethonopharm., 2003,4:1522.3 j