（完整版）發(fā)光免疫類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

1、 發(fā)光免疫類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）2010-11-09 01:29發(fā)光免疫類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）一、前言本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范申請人對發(fā)光免疫類檢測試劑的主要原材料研究資料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究資料的準備，并對產(chǎn)品質(zhì)量控制提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。本指導(dǎo)原則系對發(fā)光免疫類檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)

2、要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準體系以及當(dāng)前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。二、適用范圍 該指導(dǎo)原則主要適用于利用發(fā)光免疫分析技術(shù)對蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進行檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查，第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行三、基本要求（一）基本原則1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準，并符合有關(guān)法規(guī)的要求。2.診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得

3、醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準（試行）的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準。3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。4.研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。5.試劑生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)： 保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有效。（二）原材料質(zhì)量控制1.主要生物原料 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的

4、生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準品（標(biāo)準品）等。一般按工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準。 主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉

5、末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準。（2）純度和分子量主要經(jīng) SDS-PAGE電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為 5g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。（3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry法、 280nm光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。（4）效價效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。效價應(yīng)達到規(guī)定的要求。（5）功能性實驗

6、功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。2.生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準應(yīng)符合 2000年版的中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準規(guī)定的標(biāo)準要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗：（1 ）牛血清或羊血清外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物無菌試驗：將血清直接 37度放置 7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀?？偟鞍缀浚河秒p縮脲法測定，蛋白含量不小于32mg/ml。球蛋白含量：取待

7、測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于 0.85%NaCl溶液，至 1ml，用 Lowry方法測定，蛋白 含量應(yīng) 2mg/ml。（2 ）牛血清白蛋白：外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18-26時，溶解時間應(yīng)不大于 15分鐘。 1%牛血清白蛋白水溶液的 pH值應(yīng)為6.5 7.1?？偟鞍缀浚河秒p縮脲方測定，質(zhì)量標(biāo)準為95?？偟鞍字械?BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準為 95%。BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA含量，其標(biāo)準為 90%。（3 ）酪蛋白：酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需

8、的質(zhì)量標(biāo)準。（4）標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm ）應(yīng)大于 3.0。對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行測定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定， 不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液值、重金屬檢測、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準（ 2000年版）

9、分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。pH（1）無機類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。（2）有機類：主要包括有吐溫 20、三羥基氨基甲烷等。（3）特殊化學(xué)原料： Eu-DTTA，魯米諾等。Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求 Eu-DTTA各功能團符合分子結(jié)構(gòu)，純度在 96%以上。4.其他原輔料（1）微孔板條外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加 200?L增強液，用發(fā)光免疫分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光值1500。吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值， C

10、V值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準， 一般批內(nèi)CV 5,批間 CV 10。（2）其他 粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準。（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。1.固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準 96孔微孔反應(yīng)板為例進行描述）（1）包被板的準備準備經(jīng)檢驗合格的包被板，記錄批號、數(shù)

11、目、狀態(tài)標(biāo)識。質(zhì)控項目：尺寸，外觀，包裝。（2）包被液的配制配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)使用。質(zhì)控項目：包被緩沖液配方， pH值，包被物成份。（3）包被板的包被包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。質(zhì)控項目：包被體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。（4）洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板） 按配方配制洗板工作液。質(zhì)控項目：洗板工作液配方， pH值。（5）封閉液的配制按配方配制封閉液。質(zhì)控項目：封閉液配方， pH值。（6）洗板和封閉包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以

12、不洗板），加入封閉液。質(zhì)控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。質(zhì)檢項目：封閉前檢驗包被均一性。（7）抽干封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。質(zhì)控項目：過程監(jiān)控。（8）干燥反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進行干燥。質(zhì)控項目：溫度，濕度，時間，過程監(jiān)控等。（9）密封包裝將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。質(zhì)控項目：密封性能，標(biāo)示及效期等。（10）反應(yīng)板（半成品）檢驗對裝袋密封后的反應(yīng)板進行抽樣檢驗，外觀、板內(nèi)變異、板 間變異。2.滴配過程（1）酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實際情況，該步驟可不進行）采用常規(guī)過碘酸鈉乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶

13、標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo劑保存于低溫。質(zhì)控項目：標(biāo)記方法，過程控制。（2 ）酶結(jié)合物的鑒定功能性實驗將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準。穩(wěn)定性將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋，進行 2-8，及熱穩(wěn)定性實驗，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準。（3）酶結(jié)合物稀釋液按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在2-8保存，并于規(guī)定時間內(nèi)使用。質(zhì)控項目：酶結(jié)合物稀釋液配方， pH值。（4）酶結(jié)合物工作濃度的滴配取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進行滴配。測定系列標(biāo)準品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定 使體系達到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。（5）酶結(jié)合

14、物工作液配制將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應(yīng)板進行檢驗，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準品線性檢測。（6）酶結(jié)合物工作液的分裝按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。（7）酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗對分裝后的酶結(jié)合物工作液進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準品劑量 -反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測定值。3.校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品的制備（1）稀釋液按稀釋液的配方配制，存放在 2 8或 -20保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項目：稀釋液配方， pH值。（2）校準品、陰 /陽性對

15、照或質(zhì)控品的配制校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國家標(biāo)準品、 WHO標(biāo)準品或其他級別的標(biāo)準物質(zhì)進行配制。質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，準確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。 （3）校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品的分裝按工藝要求分裝校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品。質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量。（4）校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品（半成品）檢驗對分裝后的校準品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。4.化學(xué)發(fā)光底物的制備（1）底物緩沖液按底物緩沖液的配方配制，存放在 2-8保存，并

16、于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項目：底物緩沖液配方， pH值。（2）化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑質(zhì)控項目：氧化劑和發(fā)光劑配方。質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，本底、發(fā)光強度。（3）化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。（4）化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗 對分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強度。5.銪標(biāo)記物的制備針對不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪-DTTA與標(biāo)記生物原料的比例，標(biāo)記溫度和

17、標(biāo)記時間、標(biāo)記得率的計算標(biāo)準等。在實際操作過程中要求嚴格按照 SOP進行操作6.凍干各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。7.分裝、燈檢和貼簽分裝量用減重稱量法進行測量，把質(zhì)量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。8.包裝根據(jù)試劑盒包裝 SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進行包裝。包裝時應(yīng)嚴格檢查品名、批號、裝量，認真核對各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進行復(fù)核。（四）質(zhì)量控制1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半 成品

18、各組分，作號標(biāo)記、待檢。（2）質(zhì)控品的要求用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰 /陽性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，檢測范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準品（參考品）標(biāo)化的企業(yè)參考品進行檢驗。如無國家標(biāo)準品（參考品），可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。（3）半成品檢驗根據(jù)各個試劑盒的企業(yè)標(biāo)準或者制檢規(guī)程進行半成品的檢驗，檢驗指標(biāo)一般包括準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性等，均應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準。企業(yè)應(yīng)對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣， 2 8定期作穩(wěn)定性考核，同時作 37熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準。2.成品質(zhì)量控制（1）成品抽樣產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢 人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。每一批試劑的報批批量應(yīng)至少為 10000人份。（2）成品檢驗一般使用國家標(biāo)準品（參考品）對成品進行檢