牛肝菌中含尼古丁成因研究報告

1、牛肝菌中含尼古丁成因研究報告 彭云霞1 馬曉剛1 李云飛1 熊清1 趙永昌2 車玥泉3 劉自強 4 （1、云南出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心 昆明650028; 2、云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，昆明650054； 3、云南省牛肝菌協(xié)會，昆明650032；4、中國食品土畜進(jìn)出口商會食用菌分會） 摘要：在2009年野生食用菌的生產(chǎn)季節(jié)，研究小組通過對尼古丁外源性污染的排查和內(nèi)源性成因的驗證等兩方面的工作得出牛肝菌等食用菌含尼古丁是內(nèi)源性次生代謝產(chǎn)物的結(jié)論，并對影響牛肝菌尼古丁含量水平的自然因素和牛肝菌中含尼古丁的風(fēng)險評估依據(jù)進(jìn)行了初步的研究。 關(guān)鍵詞：牛肝菌 尼古丁 內(nèi)源性次生代謝產(chǎn)物 一

2、、研究方法及樣本 1、檢測方法 本項目組所采用的檢測方法是中國正式公布的由云南ciq實驗室同eurofins蘇州實驗室共同起草的進(jìn)出口行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)sn/t2397-2009進(jìn)出口食品中尼古丁檢測方法，同時近期云南ciq實驗室還參加了歐盟基準(zhǔn)實驗室crl組織的國際實驗室間能力驗證實驗，檢測結(jié)果為滿意結(jié)果。在11月4日-5日在德國漢堡由esa協(xié)會主辦的中歐尼古丁成因研究會已確認(rèn)：對尼古丁的檢測eurofins方法為篩選檢測方法，云南ciq方法為確證方法。 2、樣本采集 2.1實驗樣本數(shù)量 2.1.1各類牛肝菌樣本：700份，其中鮮樣：100份、速凍樣品73份，鹽漬加工樣品59份；干片468份； 2.1

3、.2其它食用菌干片樣本96份； 2.1.3云南主產(chǎn)區(qū)及四川、東北的食用菌生長周邊環(huán)境樣本55份進(jìn)行尼古丁含量的檢測：其中根系土壤樣品30個，水樣品 10個，大氣樣品15份； 2.1.4 實驗室培養(yǎng)的人工菌絲體四種: 本研究在實驗室內(nèi)人工培育了羊肚菌（morchellaesculenta）、暗褐色網(wǎng)柄牛肝(phlebopus portentosus)、黑曲霉（aspergillus niger ）、青霉菌（penicillum sp.）等四種菌絲體。 2.2樣本來源 2.2.1云南食用菌主產(chǎn)區(qū)的樣本由項目組到產(chǎn)地直接采集后在實驗室進(jìn)行加工，其采集加工過程嚴(yán)格控制，保證樣本不受任何外界環(huán)境的污染。

4、 2.2.2 歐洲區(qū)的牛肝菌干片樣本是在歐盟市埸上購買 2.2.3中國其它產(chǎn)區(qū)的實驗樣本由云南省牛肝菌協(xié)會會員在當(dāng)?shù)厥召徍筇峁┙o項目研究小組。 2.2.4大氣樣本委托云南省楚雄、思茅、麗江環(huán)境監(jiān)測站對當(dāng)?shù)卮髿猸h(huán)境按相關(guān)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行采集。 2.2.5 真菌菌絲體由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所提供，其菌菌絲體培養(yǎng)條件： 試驗菌株在ypda（0.2%酵母膏，0.2&蛋白胨，2%葡萄糖，1.2%瓊脂粉）斜面上25培養(yǎng)7-8天，培養(yǎng)的菌絲接入ypd液體培養(yǎng)基（500ml的三角瓶裝入200ml的培養(yǎng)基），接種后搖床振蕩培養(yǎng)（250c,150rm）10天，每個菌株設(shè)三個重復(fù)，培養(yǎng)好后采用離心收集

5、法收集菌絲體，8000rpm離心20分鐘菌絲體培養(yǎng)液，棄上清收集沉淀即為培養(yǎng)所需的菌絲體，于40度下儲存?zhèn)溆?。同時使用不接入菌絲的培養(yǎng)基同上述操作條件同步培養(yǎng)進(jìn)行空白實驗。 3、 實驗結(jié)果的第三方驗證 為保證實驗結(jié)論的科學(xué)準(zhǔn)確，本項目研究組專門送了9份比對樣本到eurofins蘇州實驗室進(jìn)行檢測，同期也收集了由中國出口商送至歐洲第三方實驗室檢測結(jié)果的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析研究。 二、 試驗結(jié)果數(shù)據(jù) 1、項目研究組的檢測結(jié)果數(shù)據(jù) 表1人工培育的菌絲體中的尼古丁 樣本名稱樣本數(shù)量尼古丁檢出值（pg） morchella esculenta 羊肚菌菌絲體315.8-77 phlebopus portentos

6、us暗褐色網(wǎng)柄牛肝315.2-35.2 aspergillus niger 黑曲霉318.3-24.8 penicillum sp.青霉菌320.8-27.6 空白培養(yǎng)基3陰性 表2 云南產(chǎn)區(qū)鮮牛肝菌子實體樣本的檢測結(jié)果 樣本樣本數(shù)量取樣地尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 1期牛肝菌 10楚雄33-7157 10麗江41-6452 10思茅28-8863 10大理42-9265 10文山38-7961 2期牛肝菌 10楚雄19-4835 10麗江24-5838 10思茅27-4941 10大理26-4539 10文山23-5336 備注：1期牛肝菌比2期生長期長 表3云南產(chǎn)區(qū)牛肝

7、菌干片尼古丁的檢測結(jié)果 樣本名稱數(shù)量產(chǎn)區(qū)尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 牛肝菌干片a級（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理228-2060756 15麗江391-27891343 20楚雄189-30451089 15文山110-2031897 15思茅562-29911213 牛肝菌干片b級（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理455-54521798 15麗江678-35121431 20楚雄441-38811888 15文山567-30781982 15思茅334-36772011 牛肝菌干片c級（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理1797-44982458 15麗江1899-56722321 20楚雄2016-51222678 15文山1688-45672201 15思茅1908-69852532 牛肝菌干片d級（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理988-112343679 15麗江2061-221344012 20楚雄2455-341225618 15文山2299-178994234 15