HPLC常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法總匯

1、壓力異常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在 右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。A、沒(méi)有壓力顯示，沒(méi)有流動(dòng)相流動(dòng)原因解決方法1、電源問(wèn)題1、接通電源，開(kāi)機(jī)2、保險(xiǎn)絲被燒壞2、更換保險(xiǎn)絲3、控制器設(shè)疋不正確或設(shè)疋失敗3、a、米取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定 b、修理或更換控制器4、柱塞桿折斷4、更換柱塞桿5、泵頭內(nèi)有空氣乙、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣6流動(dòng)相不足6、a、補(bǔ)充流動(dòng)相 b、更換入口濾頭7、單向閥損壞：7、更換單向閥8、漏液8擰緊或更換手緊接頭B、流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒(méi)有壓力顯示原因解決方法1、儀表?yè)p壞1、更換儀表2、壓力傳感器損壞2、更換壓力傳感器C、壓力持續(xù)偏咼原因解決方法1、

2、流速設(shè)定過(guò)高1、調(diào)整流速設(shè)定2、柱前篩板堵塞2、a、在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板C、更換色譜柱3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相 b、沖洗色譜柱4、色譜柱選擇不當(dāng)4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱5、進(jìn)樣閥損壞5、清洗或更換進(jìn)樣閥6柱溫過(guò)低6提高溫度7、控制器失常7、修理或更換控制器8、保護(hù)柱阻塞8、清洗或更換保護(hù)柱9、在線過(guò)濾器阻塞9、清洗或更換在線過(guò)濾器D壓力持續(xù)偏低原因解決方法1、流速設(shè)定過(guò)低1、調(diào)整流速2、系統(tǒng)漏液2、確定漏液位置并維修3、色譜柱選擇不當(dāng)3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱:4、柱溫過(guò)高4、降低溫度5、控制器失常5、維修或更換控制器E、壓力不斷上升原因解決方法1、見(jiàn)列

3、表C1、見(jiàn)列表CF、壓力降為零原因解決方法1、見(jiàn)列表A B1、見(jiàn)列表A BG壓力不斷下降，但不回零原因解決方法1、見(jiàn)列表D1、見(jiàn)列表DH、壓力波動(dòng)原因解決方法1、泵中有氣體1、a、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體2、單向閥損壞2、更換單向閥:3、泵密圭寸損壞3、更換泵密封4、脫氣不充分改變4、a、溶劑脫氣脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、系統(tǒng)漏液5、確定漏液位置并維修6使用梯度洗脫、由日于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)漏液通?？梢酝ㄟ^(guò)擰緊或更換管路接頭來(lái)解決漏液的問(wèn)題。 但值得注意的是過(guò)份擰緊 會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過(guò)稍微擰緊接頭不能解決漏液 的問(wèn)題，就必須將接頭取下，檢查是否損

4、壞（例如，卡套損壞、密圭寸表面有雜質(zhì)）； 損壞的接頭應(yīng)該更換掉。A、接頭處漏液原因r解決方法1、接頭松動(dòng)1、擰緊2、接頭磨損2、更換3、接頭過(guò)緊3、a、擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染4、a、拆下清洗b、更換5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、泵漏液原因解決方法1、單向閥松動(dòng)1、a、擰緊單向閥（不必?cái)Q的過(guò)緊） b、更換單向閥2、接頭松動(dòng)2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過(guò)緊）3、混合器密封損壞3、a更換混合器密封b、更換混合器4、泵密封損壞4、維修或更換泵密封件5、壓力傳感器損壞5、維修或更換壓力傳感器6脈沖阻尼器損壞6、更換脈沖阻尼器7、比例閥損壞7、a檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手緊接

5、頭，損壞的立即更換8、放空閥的損壞8 a、擰緊放空閥b、更換放空閥C、進(jìn)樣閥漏液原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞：1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥2、定量環(huán)阻塞2、更換定量環(huán)3、進(jìn)樣口密圭寸松動(dòng)3、調(diào)整4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適：4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針5、廢液管中產(chǎn)生虹吸5、保持廢液管咼于廢液液面6廢液管阻塞6更換或疏通廢液管D色譜柱漏液原因解決方法1、尾端接頭松動(dòng)1、擰緊接頭2、卡套內(nèi)有填料2、拆下、清洗卡套、重新安裝3、篩板厚度不合適3、使用合適的篩板（參考下表）篩板選擇指導(dǎo)物質(zhì)粒徑篩板孔徑3-4u0.5u5-20u2uE、檢測(cè)器漏液原因解決方法1、流通池墊片損壞1、a、避免過(guò)大的背景壓力（壓力降） b、更

6、換墊片2、流通池窗破碎2、更換窗口13、手緊接頭漏液3、擰緊或更換4、廢液管阻塞4、更換廢液管5、流通池阻塞5、重新安裝或更換液相色譜系統(tǒng)的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)題可以通 過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色 譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾原因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板C、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更 有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn) 發(fā)生反應(yīng)圖

7、5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法1、柱溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、樣品過(guò)載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見(jiàn) A1、A2C、峰分叉原因解決方法保護(hù)柱或分析柱污染 圖1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要 更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái) 清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子 被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕?施。如果問(wèn)題仍然存在，入口可能被阻 塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng) 相作為樣品溶劑。D、峰變形原因解決方法1、樣品過(guò)載1、減少樣品載量E、早出的峰變形原

8、因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑 更小的管路）b、使用小體積的流通池GK 增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重原因解決方法1、一級(jí)保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入水（或多官能團(tuán)化合物） d、試用另一種方法3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原因解決方法1

9、、緩沖不合適1、a使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液I、額外的峰原因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速3、空位或鬼峰3、a檢查流動(dòng)相是否純凈b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑C、減少進(jìn)樣體積J、保留時(shí)間波動(dòng)原因解決方法1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動(dòng)相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒(méi)有平衡3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間 平衡色譜柱K、保留時(shí)間不斷變化原因解決方法1、流速變化1、重新設(shè)定流速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的

10、混合流動(dòng)相L、基線漂移原因解決方法1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化 都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢 測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外 檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。）1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢 測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引 起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和 添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使 用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通 池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不 要用鹽酸）4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成流通池 窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè) 器

11、手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題 可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。6柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化 時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改 流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的 新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑 配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的 化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高 K值） 以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè) 逐步升高的基線。8使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之 間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗 柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范 圍發(fā)生變化時(shí)，使

12、用新的流動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng) 處。10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處M基線噪音（規(guī)則的）原因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè) 器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見(jiàn)第三部分。檢查管路接頭是否松 動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正 常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度 的溶劑4、溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加 熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開(kāi)LC檢測(cè)器和記錄儀，檢查干 擾是否來(lái)自于外部，加以更正。6泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N、基線噪音（不規(guī)則的）原因

13、解決方法漏液 圖1、見(jiàn)第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)， 泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的 噪音。如有必要，更換密圭寸。檢查流通 池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配 成2、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題4、斷開(kāi)檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查 并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6檢測(cè)器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背 景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污染物 也會(huì)產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流 通池8、檢測(cè)器燈能量不足8更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均

14、勻或混合器工作不 正常10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走 梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置O寬峰原因解決方法1、流動(dòng)相組成變化1、重新制備新的流動(dòng)相2、流動(dòng)相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別疋在柱了和檢測(cè)器之間）3、見(jiàn)section 3。檢杳接頭疋否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常 的噪音。如果必要更換密封。4、檢測(cè)器設(shè)定不止確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響柱子過(guò)載a、b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大b、c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管C、路內(nèi)徑太大d、d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)圖小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1: 10或1: 100的比例稀釋樣品減少響應(yīng)時(shí)間或使用更

15、小的流通池使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路減少響應(yīng)時(shí)間6緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8更換同樣類型的色譜柱。如果新柱 子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑 沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開(kāi)柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物 質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離 效果11、柱溫過(guò)低11、提咼柱溫。除非特殊情況，溫度不 宜超過(guò)75 r12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)a、P、分離度降低原因解決方法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間 變化）1、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞 圖

16、2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t 更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行 反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被 強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)?再生程序。如果冋題仍然存在，進(jìn)口可 能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色 譜柱。Q所有的峰面積都太小原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、所有的峰面積都太大原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低1、米取較大的衰減2、進(jìn)樣過(guò)多2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀以下問(wèn)題在使用進(jìn)樣閥過(guò)程中有可能發(fā)生 A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)

17、動(dòng)不靈原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難原因解決方法1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)1、重新安裝2、定量環(huán)阻塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染3、清洗或更換進(jìn)樣器4、管路阻塞4、清洗或更換管路C、自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)原因解決方法1、無(wú)壓力（或電源）1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)3、重新安裝D自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題原因解決方法1、阻塞1、清洗或更換阻塞部件2、機(jī)械故障2、見(jiàn)隨機(jī)維修手冊(cè)3、控制器故障3、維修或更換控制器由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問(wèn)題。

18、你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天 花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了味覺(jué)）來(lái)“感覺(jué)”你的液相色譜是否存在問(wèn)題， 這樣可以幫助你迅速找到問(wèn)題所在。 例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到 它的氣味。大部分的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1、見(jiàn) section 32、濺出2、a檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過(guò)熱1、a、檢杳并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施 b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定C、關(guān)掉儀器，查找維修手冊(cè)C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1、見(jiàn) section 22、柱溫箱問(wèn)題2、a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定b、參照用戶手冊(cè)3、檢測(cè)器燈失效3、更換燈D；燈警告|原因解決方法1、壓力超出極限值a、1、檢杳是否阻塞b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見(jiàn)用戶手冊(cè)E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見(jiàn)用戶手冊(cè)F、刺耳的短音或長(zhǎng)音原因解決方法1、軸承失效1、見(jiàn)用戶手冊(cè)2、潤(rùn)滑不夠2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑3、機(jī)械故障3、見(jiàn)用戶手冊(cè)常見(jiàn)故障及日常維護(hù)下表中列出了液相色譜常見(jiàn)的一些問(wèn)題，右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法 可以減少問(wèn)題出現(xiàn)的頻率。括號(hào)中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時(shí)間間隔。 用戶手冊(cè) 則提供您更多的維護(hù)方法。溶劑瓶問(wèn)題維護(hù)1、進(jìn)口篩板阻塞a、1、更換（3-6個(gè)月）b、過(guò)濾流動(dòng)相，0.5u濾膜2、氣泡2、流動(dòng)