高效液相色譜檢查十一酸睪酮其他甾體課件

1、高效液相色譜高效液相色譜檢查檢查十一酸睪酮十一酸睪酮其他甾體其他甾體 何偉康 陳忠堅(jiān)過(guò)程 查資料（藥典，文獻(xiàn)，藥物分析及儀器分析課本等） 進(jìn)行討論，確定方法，制定儀器清單 實(shí)驗(yàn) 成果實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)一步修改查資料 藥典 藥物的理化性質(zhì)，檢查方法及具體操作 網(wǎng)絡(luò) 結(jié)構(gòu)式，功效及一些產(chǎn)品名 文獻(xiàn) 同類藥物高效液相色譜法的使用情況 分析化學(xué)和藥物分析教材 高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)方案 主成分自身對(duì)照法（無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品） 將供試品稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)臐舛?，作為?duì)照溶液。分別取供品試溶液和對(duì)照溶液進(jìn)樣，計(jì)算供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積總和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，確定雜質(zhì)是否超過(guò)限量。 供試品溶液配制 取本品

2、約0.1g，精密稱定，加入流動(dòng)相約20ml，溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供試品溶液）。 自身對(duì)照品溶液配制 精密量取供試品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg）。實(shí)驗(yàn)清單 儀器： 高效液相色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，（柱長(zhǎng)？柱長(zhǎng)？） 乙腈異丙醇水（40:40:20）為流動(dòng)相；檢測(cè)溫度室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。（靈敏度？流速？靈敏度？流速？） 50ml容量瓶2 1ml移液管 電子天平 小漏斗 250ml 燒杯 50ml量筒 濾紙 洗耳球方案修改 供試品溶液 2mg 1ml 0.5mg1ml 自身對(duì)照溶液 0.04 mg 1ml 0.01

3、mg1ml 色譜條件的確定 ： 色譜柱：agilent c185um（1504.6mm） 流動(dòng)相的確定：？ 流速：1.0mlmin 靈敏度：0.01檔溶液配置及儀器操作供試品溶液配置：0.5mg/1ml精密稱定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流動(dòng)相定容至10ml（乙腈-水=75：25）自身對(duì)照品溶液配制：0.01mg/ml移液管移取供試品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml）液相色譜儀器操作 開始：裝柱 檢漏 甲醇沖洗0.5h 流動(dòng)相沖洗0.5h 設(shè)定參數(shù) 待基線穩(wěn)定后進(jìn)樣 結(jié)束：用沖柱水沖洗1h 純甲醇沖洗1h 收

4、好柱子。藥典方法藥典方法流動(dòng)相 乙腈-異丙醇-水4040：4040：2020下色譜圖下色譜圖 主峰 r:1.960 t: 1.258 n:9443r:1.960 t: 1.258 n:9443思考： 1.主成分峰與雜質(zhì)的分離度不夠（1.960） 2.主成分出峰時(shí)間太長(zhǎng)（21.538min）如何改變條件呢？流動(dòng)相配比流動(dòng)相乙腈異丙醇 水19055285105380155乙腈-異丙醇-水（90：5：5）r: 1.182 t: 1.329 n: 10321乙腈：異丙醇：水（85：10：5）r:3.709 t: 1.834 n: 9309乙腈：異丙醇：水（80：15：5）r: 1.591 t: 1.7

5、32 n:10495 流流動(dòng)動(dòng)相相rtn出峰時(shí)間（min）11.1821.329 10321 11.1712 3.791.84 930916.12931.5911.732 10495 13.529 第二次思考： 乙腈價(jià)格昂貴，毒性大。 而甲醇粘度小，柱壓低，價(jià)格便宜，適用范圍廣，常用于色譜分析的流動(dòng)相，激素類藥物中較常用。 藥典為什么不用甲醇代替乙腈呢？ 甲醇甲醇-異丙醇異丙醇-水水=90：5：5 r: 1.225 t: 1.338 n: 8099甲醇-異丙醇-水=80：15：5r：1.208 t : 1.334 n:8564結(jié)論甲醇替代乙腈后分離度較低，柱效有所下降，所以在實(shí)驗(yàn)中使用乙腈較為合適。 選取流動(dòng)相，進(jìn)行雜質(zhì)限量檢查。 乙腈-異丙醇-水=80：15：5 1.進(jìn)溶劑 2.進(jìn)低濃度對(duì)照溶液 3.進(jìn)高濃度供試品溶液溶劑峰高濃度（高濃度（0.5mgml）低濃度低濃度0.01mgml計(jì)算及結(jié)論 自身對(duì)照溶液主峰峰面積：1691935 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積：666831 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積自身對(duì)照溶液主峰 峰面積 即雜