生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)

1、第二章 生物制藥藥基本技術(shù)術(shù) 生物制藥生物制藥是把生物體內(nèi)的具有生物活性的基本物質(zhì)，是把生物體內(nèi)的具有生物活性的基本物質(zhì)，保持原來的結(jié)構(gòu)和功能保持原來的結(jié)構(gòu)和功能，又能在含有多種物質(zhì)的液相，又能在含有多種物質(zhì)的液相或固相中或固相中較高純度的分離出來較高純度的分離出來。它是一項(xiàng)嚴(yán)格、細(xì)致、。它是一項(xiàng)嚴(yán)格、細(xì)致、復(fù)雜的工藝過程，涉及物理、化學(xué)、生物學(xué)、工程等復(fù)雜的工藝過程，涉及物理、化學(xué)、生物學(xué)、工程等方面的知識(shí)和操作技術(shù)。方面的知識(shí)和操作技術(shù)。 對(duì)于一個(gè)新研制的生物藥物，從查閱文獻(xiàn)開始，到對(duì)于一個(gè)新研制的生物藥物，從查閱文獻(xiàn)開始，到探索實(shí)驗(yàn)、條件考察（記錄客觀）、總結(jié)制定工藝規(guī)探索實(shí)驗(yàn)、條件考察

2、（記錄客觀）、總結(jié)制定工藝規(guī)程、制定分析鑒定方法，再進(jìn)行中試放大，全面考察程、制定分析鑒定方法，再進(jìn)行中試放大，全面考察工藝是否成熟，是否穩(wěn)定等。工藝是否成熟，是否穩(wěn)定等。問題：問題：1 1、標(biāo)準(zhǔn)化方法？、標(biāo)準(zhǔn)化方法？ 2 2、如何發(fā)現(xiàn)或研制新藥？、如何發(fā)現(xiàn)或研制新藥？基本制造方法 1、提取法(Extraction) 2、發(fā)酵法（ Zymotechnics） 3、化學(xué)合成（Chemical synthesize） 4、組織培養(yǎng)法（Tissue culture） 5、現(xiàn)代生物技術(shù)(Modern Biotechnics): Gene engineering, Enzyme engineering,

3、 Cell engineering , protein Engineering, Fermentation engineering生化制藥藥的六個(gè)階個(gè)階段 1. 原料的選擇和預(yù)處理原料的選擇和預(yù)處理 2. 固液分離固液分離 3. 提取提取：從原料中經(jīng)溶劑分離有效成分，制成粗品的工：從原料中經(jīng)溶劑分離有效成分，制成粗品的工 藝過程。藝過程。 4. 精制精制/純化純化：粗制品經(jīng)鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、吸附、層析、：粗制品經(jīng)鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、吸附、層析、透析、超離心透析、超離心 、膜分離、結(jié)晶等步驟進(jìn)行精制的工藝、膜分離、結(jié)晶等步驟進(jìn)行精制的工藝 過程。過程。 5.成品加工成品加工/濃縮、干燥及保存、

4、制劑濃縮、干燥及保存、制劑：原料藥（精制品）：原料藥（精制品）經(jīng)精細(xì)加工制成片劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應(yīng)用的經(jīng)精細(xì)加工制成片劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應(yīng)用的各種劑型。各種劑型。一、原料選擇選擇和預(yù)處預(yù)處理（Raw Material Selecting and Pretreatment） 原料選擇的基本準(zhǔn)則原料選擇的基本準(zhǔn)則：1、在大量的信息資料和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇目標(biāo)原料。、在大量的信息資料和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇目標(biāo)原料。2、選擇有效成分含量高的新鮮材料；、選擇有效成分含量高的新鮮材料；3、來源豐富易得；、來源豐富易得；4、制造工藝簡單易行；、制造工藝簡單易行；5、成本比較低；

5、、成本比較低；6、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境, 選擇對(duì)環(huán)境友好的原材料資選擇對(duì)環(huán)境友好的原材料資 源，防止生物入侵。源，防止生物入侵。預(yù)處理方法預(yù)處理方法：1 1、動(dòng)物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分；、動(dòng)物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分；植物種子去殼除脂；微生物要進(jìn)行菌體與發(fā)酵液分離等植物種子去殼除脂；微生物要進(jìn)行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運(yùn)輸?；静僮?。便于貯存和運(yùn)輸。2 2、冷凍法預(yù)處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便、冷凍法預(yù)處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便抑制微生物和酶的作用。抑制微生物和酶的作用。3 3、有機(jī)溶劑

6、除去部分水分：用丙酮或乙醇進(jìn)行脫水和脫脂，、有機(jī)溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進(jìn)行脫水和脫脂，有利于貯存。有利于貯存。 原料的粉碎原料的粉碎：在提取前先將大塊的原料粉碎或在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎成適度的粒度，或?qū)⒓?xì)胞破碎，使胞內(nèi)活絞碎成適度的粒度，或?qū)⒓?xì)胞破碎，使胞內(nèi)活性物質(zhì)充分釋放到溶液中，有利于提取或吸附。性物質(zhì)充分釋放到溶液中，有利于提取或吸附。 動(dòng)物臟器組織：常用絞肉機(jī)機(jī)械法粉碎；動(dòng)物臟器組織：常用絞肉機(jī)機(jī)械法粉碎； 植物肉質(zhì)組織：常用磨碎法；植物肉質(zhì)組織：常用磨碎法； 微生物：常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、微生物：常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲、加壓等超聲、加壓等 處理方

7、法。處理方法。 1.機(jī)械法機(jī)械法：組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽、球磨機(jī)、萬能粉碎組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽、球磨機(jī)、萬能粉碎機(jī)、絞肉機(jī)、擊碎機(jī)、刨片機(jī)。機(jī)、絞肉機(jī)、擊碎機(jī)、刨片機(jī)。 動(dòng)物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。動(dòng)物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。 2.物理法物理法 A、反復(fù)凍融法反復(fù)凍融法：把待破碎的樣品冷至把待破碎的樣品冷至-20-15 ，使，使 之凝固，然后緩慢的溶解，如此反復(fù)操作，大部分動(dòng)物性之凝固，然后緩慢的溶解，如此反復(fù)操作，大部分動(dòng)物性細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？梢云扑椤＜?xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？梢云扑椤?B、冷熱交替法冷熱交替法：將材料投入沸水中，在：將材料投入沸水中，在90左右維持?jǐn)?shù)左右維持?jǐn)?shù)分鐘

8、，立即置于冰浴中，使之迅速冷卻，絕大部分細(xì)胞被破分鐘，立即置于冰浴中，使之迅速冷卻，絕大部分細(xì)胞被破壞。此法多用于細(xì)菌或病毒中提取蛋白和核酸。壞。此法多用于細(xì)菌或病毒中提取蛋白和核酸。 C、超聲波處理法超聲波處理法：多用于微生物材料，處理的效果與多用于微生物材料，處理的效果與 樣品濃度、使用頻率有關(guān)。用大腸桿菌制備各種酶樣品濃度、使用頻率有關(guān)。用大腸桿菌制備各種酶 時(shí)，常用時(shí)，常用50100mg/L菌體濃度，在菌體濃度，在110KC頻率下頻率下 處理處理1015min。操作時(shí)注意避免溶液中氣泡的存在。操作時(shí)注意避免溶液中氣泡的存在。 D、加壓破碎法加壓破碎法：加氣壓或水壓，達(dá)：加氣壓或水壓，達(dá)

9、0.5934.32MPa (210350kgf/cm2)的壓力時(shí)，的壓力時(shí)， 可使可使90%以上細(xì)胞被以上細(xì)胞被 壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。3. 3. 生化及化學(xué)法生化及化學(xué)法： A. A. 自溶法自溶法：將新鮮的生物材料存放在一定的：將新鮮的生物材料存放在一定的pHpH和適當(dāng)溫和適當(dāng)溫度下，利用組織細(xì)胞中自身的酶系將細(xì)胞破壞，使細(xì)胞內(nèi)含度下，利用組織細(xì)胞中自身的酶系將細(xì)胞破壞，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來的方法。自溶的溫度，動(dòng)物材料在物釋放出來的方法。自溶的溫度，動(dòng)物材料在0-4 0-4 ，微生，微生物在室溫下。自溶時(shí)，需加少量的防腐劑，甲苯、氯仿，以物

10、在室溫下。自溶時(shí)，需加少量的防腐劑，甲苯、氯仿，以防止外界細(xì)菌的污染。防止外界細(xì)菌的污染。 * * 由于自溶時(shí)間較長，不易控制，故制造具有活性的核酸由于自溶時(shí)間較長，不易控制，故制造具有活性的核酸和蛋白質(zhì)時(shí)比較少用。和蛋白質(zhì)時(shí)比較少用。 B. 溶菌酶處理法溶菌酶處理法：溶菌酶是專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶。：溶菌酶是專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶。多用于微生物，對(duì)蝸牛酶、纖維酶及植物細(xì)胞也適用。如多用于微生物，對(duì)蝸牛酶、纖維酶及植物細(xì)胞也適用。如用噬菌體感染大腸桿菌細(xì)胞制造用噬菌體感染大腸桿菌細(xì)胞制造DNA時(shí)，采用時(shí)，采用pH8.0的的0.1mol/L Tris-0.01mol/L EDTA 制成制成

11、2 億億/ml的細(xì)胞懸液，的細(xì)胞懸液，然后加然后加 入入100g1mg的溶菌酶，在的溶菌酶，在37 C保溫保溫10min，細(xì)菌胞壁即被破壞。細(xì)菌胞壁即被破壞。 C. 表面活性劑處理法表面活性劑處理法：表面活性劑的分子中，兼有親脂：表面活性劑的分子中，兼有親脂性和親水性基團(tuán)，能降低水的界面張力，具有乳化、分散、性和親水性基團(tuán)，能降低水的界面張力，具有乳化、分散、增溶作用。常用有：增溶作用。常用有：SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸鈉。鈉。也稱抽提、萃取，就是利用一種溶劑對(duì)物質(zhì)的不同溶解也稱抽提、萃取，就是利用一種溶劑對(duì)物質(zhì)的不同溶解度，從化合物中分離出一種或幾種組分的

12、過程。分為固體處度，從化合物中分離出一種或幾種組分的過程。分為固體處理（液理（液固萃?。┖鸵后w處理（液固萃取）和液體處理（液液萃?。Ｒ狠腿。?。提取條件的選擇提取條件的選擇： 1 1、溶劑、溶劑: :常用水、稀鹽、稀酸、稀堿，有機(jī)溶劑如乙醇、常用水、稀鹽、稀酸、稀堿，有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳、丁醇等。丁醇提取的丙酮、氯仿、四氯化碳、丁醇等。丁醇提取的pHpH、溫度范圍、溫度范圍較廣（較廣（pH3-6, -2-40pH3-6, -2-40）。適用于動(dòng)植物和微生物原料。）。適用于動(dòng)植物和微生物原料。 2 2、pH : pH : 與溶解度和穩(wěn)定性有很大關(guān)系，一般選擇在與溶解度和穩(wěn)定性有很

13、大關(guān)系，一般選擇在 pI pI 的兩側(cè)。的兩側(cè)。 三、提三、提 取取 Extraction3 3、溫度：一般在、溫度：一般在5 5 以下，但對(duì)溫度耐受力較大的藥物，可以下，但對(duì)溫度耐受力較大的藥物，可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟?，使雜蛋白變性分離，有利于提取和純化。適當(dāng)?shù)奶岣邷囟?，使雜蛋白變性分離，有利于提取和純化。如胃蛋白酶、酵母醇脫氫酶及多肽激素類，選擇如胃蛋白酶、酵母醇脫氫酶及多肽激素類，選擇37-50 37-50 提提取，效果較好。取，效果較好。影響提取的因素：影響提取的因素： 1 1、被提取物質(zhì)溶解度的大?。阂话銟O性對(duì)極性；非極性、被提取物質(zhì)溶解度的大?。阂话銟O性對(duì)極性；非極性對(duì)非極性；高溫；遠(yuǎn)離

14、等電點(diǎn)。對(duì)非極性；高溫；遠(yuǎn)離等電點(diǎn)。 2 2、擴(kuò)散作用的影響：、擴(kuò)散作用的影響： 3 3、分配作用的影響：分配定律、分配作用的影響：分配定律四、分離純純化Separation and Purification1 1、鹽析法、鹽析法 利用不同的蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中，溶解度不同程度利用不同的蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中，溶解度不同程度的降低來進(jìn)行分離純化。在低鹽濃度下，溶解度隨著鹽濃的降低來進(jìn)行分離純化。在低鹽濃度下，溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱度升高而增加，稱鹽溶作用鹽溶作用；當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí)，不同；當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí)，不同蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程度下降并先后析出沉淀，稱蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程

15、度下降并先后析出沉淀，稱鹽鹽析作用析作用。 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備和條件要求低，安全應(yīng)用范圍廣泛。在高鹽情況：設(shè)備和條件要求低，安全應(yīng)用范圍廣泛。在高鹽情況下，蛋白質(zhì)不易發(fā)生變化，一般在室溫下操作。下，蛋白質(zhì)不易發(fā)生變化，一般在室溫下操作。 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：分級(jí)分離能力不高。分級(jí)分離能力不高。 常用的中性鹽常用的中性鹽：硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉：硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉。 鹽析時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題：鹽析時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題： （1 1）鹽飽和度鹽飽和度：由于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，鹽析要：由于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，鹽析要求的飽和度也不同。要按工藝要求，正確計(jì)算飽和度。求的飽和度也

16、不同。要按工藝要求，正確計(jì)算飽和度。 （2 2）pH pH 值的選擇值的選擇：蛋白質(zhì)在：蛋白質(zhì)在pIpI時(shí)的溶解度最小。因此，時(shí)的溶解度最小。因此，進(jìn)行鹽析時(shí)的進(jìn)行鹽析時(shí)的pHpH，要選擇在被分離蛋白質(zhì)的，要選擇在被分離蛋白質(zhì)的pI pI 附近。附近。 （3 3）蛋白質(zhì)濃度蛋白質(zhì)濃度：在相同條件下，蛋白質(zhì)濃度越大越易：在相同條件下，蛋白質(zhì)濃度越大越易沉淀，使用鹽的飽和度極限也愈低。蛋白質(zhì)濃度愈高，其沉淀，使用鹽的飽和度極限也愈低。蛋白質(zhì)濃度愈高，其他蛋白質(zhì)共沉作用也愈強(qiáng)，這是不希望的。選擇適當(dāng)?shù)牡八鞍踪|(zhì)共沉作用也愈強(qiáng)，這是不希望的。選擇適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)濃度，可避免共沉的干擾。白質(zhì)濃度，可避免共沉

17、的干擾。 （4 4）溫度溫度：一般在室溫下進(jìn)行，濃鹽對(duì)蛋白質(zhì)有保護(hù)作用。：一般在室溫下進(jìn)行，濃鹽對(duì)蛋白質(zhì)有保護(hù)作用。但對(duì)溫度敏感的，要在低溫下進(jìn)行。但對(duì)溫度敏感的，要在低溫下進(jìn)行。 常在常在0-4 0-4 范圍內(nèi)迅速操作。范圍內(nèi)迅速操作。如尿激酶。如尿激酶。 （5 5）鹽析沉淀物的）鹽析沉淀物的脫鹽脫鹽：鹽析的沉淀分離后，經(jīng)脫鹽才能：鹽析的沉淀分離后，經(jīng)脫鹽才能獲得純品。最常用的脫鹽方法是透析，時(shí)間一般較長，應(yīng)常獲得純品。最常用的脫鹽方法是透析，時(shí)間一般較長，應(yīng)常換透析液，注意防止污染。換透析液，注意防止污染。2 2、有機(jī)溶劑沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法 利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度

18、差異利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度差異而分離目的蛋白質(zhì)的方法。蛋白質(zhì)的沉淀與溶解，與溶劑的而分離目的蛋白質(zhì)的方法。蛋白質(zhì)的沉淀與溶解，與溶劑的介電常數(shù)有關(guān)。降低溶液的介電常數(shù)，使其溶解度變小，同介電常數(shù)有關(guān)。降低溶液的介電常數(shù)，使其溶解度變小，同時(shí)，還破壞蛋白質(zhì)的水化膜而使蛋白質(zhì)沉淀析出。時(shí)，還破壞蛋白質(zhì)的水化膜而使蛋白質(zhì)沉淀析出。 幾種溶劑的介電常數(shù)幾種溶劑的介電常數(shù)溶劑名稱溶劑名稱 20 時(shí)的介電常數(shù)時(shí)的介電常數(shù) 溶劑名稱溶劑名稱 20 時(shí)的介電常數(shù)時(shí)的介電常數(shù) 乙醚乙醚 4.33 甲醇甲醇 33 丙酮丙酮 21.4 水水 80 乙醇乙醇 24 2.5mol/L甘氨酸水溶液甘

19、氨酸水溶液 137經(jīng)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)：如：如30-40%乙醇沉淀的物質(zhì)，改用丙酮時(shí)，其體積分?jǐn)?shù)可減少乙醇沉淀的物質(zhì)，改用丙酮時(shí)，其體積分?jǐn)?shù)可減少10%左右。即可用左右。即可用 20-30%的丙酮；的丙酮； 而而70-80%乙醇沉淀的物質(zhì)，可用乙醇沉淀的物質(zhì)，可用50-60%的丙酮即可。的丙酮即可。注：水有較高的介電常數(shù)，具有很好的溶劑性能，是一種廣譜溶劑。有機(jī)溶劑注：水有較高的介電常數(shù)，具有很好的溶劑性能，是一種廣譜溶劑。有機(jī)溶劑法比鹽析法分辨力強(qiáng)，沉淀也好過濾，易干燥，但對(duì)有些生物活性物質(zhì)能引起法比鹽析法分辨力強(qiáng)，沉淀也好過濾，易干燥，但對(duì)有些生物活性物質(zhì)能引起失活和變性。應(yīng)用時(shí)還要注意揮發(fā)和火災(zāi)等。

20、失活和變性。應(yīng)用時(shí)還要注意揮發(fā)和火災(zāi)等。有機(jī)沉淀法應(yīng)應(yīng)注意的問題問題 （1 1）控制工藝過程的溫度控制工藝過程的溫度：整個(gè)操作過程應(yīng)在低溫下進(jìn)：整個(gè)操作過程應(yīng)在低溫下進(jìn)行，而且最好是同一溫度。行，而且最好是同一溫度。 （2 2）防止溶劑局部濃度過高防止溶劑局部濃度過高：加入有機(jī)溶劑時(shí)攪拌要均：加入有機(jī)溶劑時(shí)攪拌要均勻，速度要適當(dāng)，避免局部濃度過高，引起沉淀物的破壞、勻，速度要適當(dāng)，避免局部濃度過高，引起沉淀物的破壞、變性或失活。變性或失活。 （3 3）及時(shí)處理沉淀物及時(shí)處理沉淀物：沉淀物經(jīng)過濾或離心后，要立即：沉淀物經(jīng)過濾或離心后，要立即用水或緩沖液溶解，降低有機(jī)溶劑的濃度。用水或緩沖液溶解，

21、降低有機(jī)溶劑的濃度。 （4 4）pHpH的選擇的選擇：在待沉淀蛋白質(zhì)的：在待沉淀蛋白質(zhì)的pIpI附近。附近。 （5 5）有機(jī)溶劑是酶和蛋白質(zhì)的）有機(jī)溶劑是酶和蛋白質(zhì)的變性因素變性因素，尤其是對(duì)敏感，尤其是對(duì)敏感酶類。酶類。3 3、等電點(diǎn)沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法 利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)又利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)又具有不同的等電點(diǎn)的特性進(jìn)行分離的工藝過程。具有不同的等電點(diǎn)的特性進(jìn)行分離的工藝過程。 由于各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，仍有一定的溶解度而沉淀由于各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，仍有一定的溶解度而沉淀不完全，多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)又都十分接近，所以單獨(dú)使用不完全，多數(shù)

22、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)又都十分接近，所以單獨(dú)使用效果不理想，分辨力差，多用于提取后除雜蛋白。實(shí)際生產(chǎn)效果不理想，分辨力差，多用于提取后除雜蛋白。實(shí)際生產(chǎn)中常與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法聯(lián)合使用。中常與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法聯(lián)合使用。4 4、膜分離法、膜分離法 膜分離技術(shù)包括：膜分離技術(shù)包括： 超濾、反滲透析、電滲析、微孔過濾、超濾、反滲透析、電滲析、微孔過濾、氣體滲析和超精密過濾。氣體滲析和超精密過濾。 （1 1）超濾：根據(jù)溶質(zhì)分子和懸浮粒子是否通過多孔膜來）超濾：根據(jù)溶質(zhì)分子和懸浮粒子是否通過多孔膜來進(jìn)行篩分。在液壓的驅(qū)動(dòng)下，能通過超濾膜的分離粒子的進(jìn)行篩分。在液壓的驅(qū)動(dòng)下，能通過超濾膜的分離粒子的范圍

23、，一般在范圍，一般在0.0010.01m0.0010.01m。即利用一種特制的膜對(duì)溶。即利用一種特制的膜對(duì)溶液中的各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過濾。液中的各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過濾。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：成本低、操作方便、條件溫和、能較好地保持藥物：成本低、操作方便、條件溫和、能較好地保持藥物活性、回收率高。適用于酶和蛋白質(zhì)藥物的分離、濃縮、活性、回收率高。適用于酶和蛋白質(zhì)藥物的分離、濃縮、脫鹽、提純、除菌、除病毒和熱原。脫鹽、提純、除菌、除病毒和熱原。（2 2）反滲透：以高分子透過性薄膜為分離介質(zhì)，在超過溶液滲）反滲透：以高分子透過性薄膜為分離介質(zhì)，在超過溶液滲透壓力的情況下，使溶液中的溶劑透過薄膜，同時(shí)使溶

24、質(zhì)和不溶透壓力的情況下，使溶液中的溶劑透過薄膜，同時(shí)使溶質(zhì)和不溶物阻截在膜前。這一過程類似于滲透物阻截在膜前。這一過程類似于滲透, ,但方向相反，即溶劑從高但方向相反，即溶劑從高濃度一側(cè)傳遞到濃度低的一側(cè)，故稱反滲透。濃度一側(cè)傳遞到濃度低的一側(cè)，故稱反滲透。 特點(diǎn)特點(diǎn)：能耗少，體積小，適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)。：能耗少，體積小，適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)。（3 3）微孔濾膜：由高分子材料制成的薄膜過濾介質(zhì)，可以過濾）微孔濾膜：由高分子材料制成的薄膜過濾介質(zhì)，可以過濾一般介質(zhì)不能截留的細(xì)菌和微粒。膜的孔徑在一般介質(zhì)不能截留的細(xì)菌和微粒。膜的孔徑在0.2-10 m0.2-10 m。（4 4）超精密過濾：以聚乙烯醇為主體

25、的中空多孔濾膜，分級(jí)性）超精密過濾：以聚乙烯醇為主體的中空多孔濾膜，分級(jí)性能在超濾膜與微孔濾膜之間。為能在超濾膜與微孔濾膜之間。為0.010.2 m0.010.2 m。用于水的精制、。用于水的精制、循環(huán)水的凈化、除懸浮固體粒子以及糖液、酶液的精制。循環(huán)水的凈化、除懸浮固體粒子以及糖液、酶液的精制。 5 5、離子交換層析、離子交換層析 采用不溶性高分子化合物作為離子交換劑，分離純化各采用不溶性高分子化合物作為離子交換劑，分離純化各種生化物質(zhì)。種生化物質(zhì)。基本原理基本原理：離子交換樹脂在水中能溶脹，溶脹后，其分子中：離子交換樹脂在水中能溶脹，溶脹后，其分子中的極性基團(tuán)（活性基團(tuán)），具有可擴(kuò)散的離子

26、，能與溶液中的極性基團(tuán)（活性基團(tuán)），具有可擴(kuò)散的離子，能與溶液中的離子起交換作用；非極性基團(tuán)作為樹脂的骨架，使樹脂不的離子起交換作用；非極性基團(tuán)作為樹脂的骨架，使樹脂不溶于水并具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為離子交換的進(jìn)行及溶液和樹脂的溶于水并具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為離子交換的進(jìn)行及溶液和樹脂的分離創(chuàng)造了條件。離子交換層析包括吸附、吸收、穿透、擴(kuò)分離創(chuàng)造了條件。離子交換層析包括吸附、吸收、穿透、擴(kuò)散、離子交換、離子親和力等物理化學(xué)過程。散、離子交換、離子親和力等物理化學(xué)過程。樹脂種類和理化性能：樹脂種類和理化性能： （1 1）強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為磺酸基，）強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為磺酸基，pHpH一般一

27、般沒有限制。沒有限制。 （2 2）弱酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為羧基、酚基。在）弱酸性陽離子交換樹脂：功能團(tuán)為羧基、酚基。在酸性溶液中不發(fā)生交換，酸性溶液中不發(fā)生交換，pHpH愈大交換能力愈強(qiáng)。愈大交換能力愈強(qiáng)。 （3 3）強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為三甲基季胺基團(tuán)。）強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為三甲基季胺基團(tuán)。pHpH沒有限制。沒有限制。 （4 4）弱酸性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為伯胺基、仲胺基、）弱酸性陰離子交換樹脂：功能團(tuán)為伯胺基、仲胺基、叔胺基。叔胺基。 pHpH愈低交換能力愈大。愈低交換能力愈大。 影響交換速度的因素：影響交換速度的因素： （1 1）樹脂顆粒的大?。侯w粒小，表面積大

28、，能促進(jìn)內(nèi)部）樹脂顆粒的大?。侯w粒小，表面積大，能促進(jìn)內(nèi)部和外部擴(kuò)散。和外部擴(kuò)散。 （2 2）攪拌和流速：加快攪拌速度或加大液體流速，都能）攪拌和流速：加快攪拌速度或加大液體流速，都能減少樹脂外液膜的厚度，從而使液相擴(kuò)散速度增加。減少樹脂外液膜的厚度，從而使液相擴(kuò)散速度增加。 （3 3）離子濃度：交換速度隨離子濃度的上升而增加，達(dá)）離子濃度：交換速度隨離子濃度的上升而增加，達(dá)到一定濃度后交換速度不在升高。到一定濃度后交換速度不在升高。 （4 4）離子的水化半徑：水化半徑小的易被吸附。）離子的水化半徑：水化半徑小的易被吸附。 （5 5）樹脂酸堿性的強(qiáng)弱和溶液的）樹脂酸堿性的強(qiáng)弱和溶液的pHpH：

29、 （6 6）交聯(lián)度大?。航宦?lián)度愈小，樹脂愈易膨脹，交換速度）交聯(lián)度大?。航宦?lián)度愈小，樹脂愈易膨脹，交換速度愈快。但交聯(lián)度小的樹脂選擇性較差。愈快。但交聯(lián)度小的樹脂選擇性較差。 （7 7）有機(jī)溶劑的影響：當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí)，會(huì)降低樹）有機(jī)溶劑的影響：當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí)，會(huì)降低樹脂對(duì)有機(jī)離子的選擇性，而容易吸附無機(jī)離子。脂對(duì)有機(jī)離子的選擇性，而容易吸附無機(jī)離子。6 6、凝膠層析、凝膠層析 指化合物隨流動(dòng)相流經(jīng)裝有凝膠的固定相的層析柱時(shí)，指化合物隨流動(dòng)相流經(jīng)裝有凝膠的固定相的層析柱時(shí)，因其各種物質(zhì)分子大小不同而被分離的技術(shù)。又稱凝膠過濾、因其各種物質(zhì)分子大小不同而被分離的技術(shù)。又稱凝膠過濾、凝膠滲透

30、過濾、分子篩過濾、阻滯擴(kuò)散層析、排阻層析。凝膠滲透過濾、分子篩過濾、阻滯擴(kuò)散層析、排阻層析。 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，操作方便，分離效果好，回收率高，分優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，操作方便，分離效果好，回收率高，分離條件緩和，不使活性物質(zhì)失活變性，凝膠可重復(fù)使用，無離條件緩和，不使活性物質(zhì)失活變性，凝膠可重復(fù)使用，無需再生處理。需再生處理。 缺點(diǎn)：分離速度慢。缺點(diǎn)：分離速度慢。 廣泛用于分離氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶及多糖等藥物。廣泛用于分離氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶及多糖等藥物。 幾種常用的凝膠：幾種常用的凝膠： （1 1）葡聚糖凝膠：基本骨架是）葡聚糖凝膠：基本骨架是1-61-6糖苷鍵。由葡聚糖和甘油糖苷鍵。由葡

31、聚糖和甘油以醚橋形式交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。最著名的商品為以醚橋形式交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。最著名的商品為SephadexSephadex葡聚糖凝膠，珠狀顆粒物，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水、弱酸、葡聚糖凝膠，珠狀顆粒物，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水、弱酸、堿和鹽溶液。低溫時(shí)，在堿和鹽溶液。低溫時(shí)，在0.1mol/L 0.1mol/L 鹽酸中保持鹽酸中保持1-2h1-2h不改變性不改變性質(zhì)；室溫時(shí)，在質(zhì)；室溫時(shí)，在 0.01mol/L 0.01mol/L 鹽酸中放置半年也不改變；在鹽酸中放置半年也不改變；在0.25mol/L0.25mol/L的的 氫氧化鈉中，氫氧化鈉中， 6060 兩個(gè)月沒有發(fā)改變?？稍趦蓚€(gè)月沒

32、有發(fā)改變?？稍?20120 加熱加熱 30min 30min 滅菌而不破壞，但高于滅菌而不破壞，但高于 120120 即變黃。即變黃。濕狀貯存易發(fā)霉，若長期不用，需加防腐劑。濕狀貯存易發(fā)霉，若長期不用，需加防腐劑。（2 2）聚丙烯酰胺凝膠：由碳）聚丙烯酰胺凝膠：由碳- -碳骨架構(gòu)成。完全為惰性。碳骨架構(gòu)成。完全為惰性。穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好，洗脫時(shí)不會(huì)有凝膠物質(zhì)下來。穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好，洗脫時(shí)不會(huì)有凝膠物質(zhì)下來。 缺點(diǎn)：不耐酸。遇酸時(shí)酰胺鍵會(huì)水解為羧基，使凝膠帶缺點(diǎn)：不耐酸。遇酸時(shí)酰胺鍵會(huì)水解為羧基，使凝膠帶有一定的離子交換基團(tuán)。有一定的離子交換基團(tuán)。 （3 3）瓊脂糖凝膠：天然凝膠，不是共價(jià)

33、交聯(lián)，是以氫）瓊脂糖凝膠：天然凝膠，不是共價(jià)交聯(lián)，是以氫鍵交聯(lián)?？障抖纫云跫?zhí)堑臐舛葋砀淖儯瘜W(xué)穩(wěn)定性不如鍵交聯(lián)。空隙度以契紙?zhí)堑臐舛葋砀淖?，化學(xué)穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。沒有干凝膠，必須在溶脹狀態(tài)保存，遇脫水葡聚糖凝膠。沒有干凝膠，必須在溶脹狀態(tài)保存，遇脫水劑、冷凍和一些有機(jī)溶劑即破壞，丙酮和乙醇對(duì)它無影響。劑、冷凍和一些有機(jī)溶劑即破壞，丙酮和乙醇對(duì)它無影響。在在pH 4.5-9,pH 4.5-9,溫度溫度0-40 0-40 穩(wěn)定。對(duì)硼酸有吸附，不能用硼穩(wěn)定。對(duì)硼酸有吸附，不能用硼酸緩沖液。他能分離及萬到幾千萬相對(duì)分子質(zhì)量的物質(zhì)，酸緩沖液。他能分離及萬到幾千萬相對(duì)分子質(zhì)量的物質(zhì)，彌補(bǔ)了葡聚糖和聚

34、丙烯酰胺凝膠的不足。彌補(bǔ)了葡聚糖和聚丙烯酰胺凝膠的不足。 瑞典商品名瑞典商品名SepharoseSepharose，美國稱生物凝膠，美國稱生物凝膠AA（Bio-Bio-Gel-AGel-A）, ,英國稱英國稱Sagavac.Sagavac. ( (4)4)疏水性凝膠：疏水性凝膠：常用的為聚甲基丙烯酸酯（Polymethacrylate）凝膠、聚苯乙烯凝膠（如Styrogel , Bio-Beads-S）7 7、親和層析、親和層析 生物活性物質(zhì)都有親和作用，如酶與底物、激素與受體、生物活性物質(zhì)都有親和作用，如酶與底物、激素與受體、核酸的互補(bǔ)鏈間，多糖與蛋白質(zhì)復(fù)合體。核酸的互補(bǔ)鏈間，多糖與蛋白質(zhì)復(fù)

35、合體。親和層析是利用生親和層析是利用生物大分子的特異親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)。物大分子的特異親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)?？赡娼Y(jié)合的特異可逆結(jié)合的特異性物質(zhì)稱為性物質(zhì)稱為配基配基，與配基結(jié)合的層析介質(zhì)稱為，與配基結(jié)合的層析介質(zhì)稱為載體載體。 親和層析能從粗提液中，通過一次簡便處理，便可得到高純親和層析能從粗提液中，通過一次簡便處理，便可得到高純度的活性物質(zhì)，既可分離一些生物材料中含量極微的物質(zhì)，度的活性物質(zhì)，既可分離一些生物材料中含量極微的物質(zhì)，又能分離一些性質(zhì)十分相似的物質(zhì)。又能分離一些性質(zhì)十分相似的物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備要求不高，操作簡便，適用范圍廣，特異性強(qiáng)，：設(shè)備要求不高，操作簡便，適用范圍廣

36、，特異性強(qiáng)，分離速度快，效果好，條件溫和。分離速度快，效果好，條件溫和。缺點(diǎn)缺點(diǎn)：通用性較差，洗脫條件要求苛刻。：通用性較差，洗脫條件要求苛刻。幾種常用的載體幾種常用的載體： （1 1）纖維素：自然界中數(shù)量最大的大分子生物材料，?。├w維素：自然界中數(shù)量最大的大分子生物材料，取材十分方便。但由于其結(jié)構(gòu)緊密、均一性差，不利于大分材十分方便。但由于其結(jié)構(gòu)緊密、均一性差，不利于大分子的滲入?；罨蟪в须姾?，非特異性吸附較強(qiáng)，加上子的滲入?；罨蟪в须姾?，非特異性吸附較強(qiáng)，加上空間位阻等原因，其應(yīng)用不如凝膠載體廣泛。目前主要用空間位阻等原因，其應(yīng)用不如凝膠載體廣泛。目前主要用于分離與核酸有關(guān)的物質(zhì)。

37、如用寡聚脫氧胸腺核苷酸纖維于分離與核酸有關(guān)的物質(zhì)。如用寡聚脫氧胸腺核苷酸纖維素作固定相分離細(xì)胞提取液中的素作固定相分離細(xì)胞提取液中的mRNA.mRNA.市售商品有市售商品有：無定型微纖維、微晶纖維素、珠狀纖維素。：無定型微纖維、微晶纖維素、珠狀纖維素。（2）瓊脂糖凝膠：用于親和層析的主要為交聯(lián)珠狀凝膠。其瓊脂糖的質(zhì)量濃度為20g/L(2%)、40g/L(4%)、60g/L(6%)幾種，相應(yīng)的商品稱為Sepharose 2B、4B、6B(Pharmacia)和Ultrogels A-2,A-4,A-6)。這類載體能使吸附物質(zhì)保持活性，能迅速活化并接上各種功能基團(tuán)，結(jié)構(gòu)疏松孔徑大，流速快。 （3）

38、葡聚糖凝膠：與瓊脂糖凝膠相比孔徑太小，特別是經(jīng)配基偶聯(lián)后，凝膠膨脹度會(huì)進(jìn)一步邊小，所以應(yīng)用受到限制。（4）聚丙烯酰胺凝膠：碳-碳骨架，有丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，具有網(wǎng)狀三維空間結(jié)構(gòu)。商品名為Biogel P。 注意避免接觸強(qiáng)氧化劑，配基偶聯(lián)后會(huì)使它的網(wǎng)格縮小，在一定程度上限制了它的應(yīng)用。 （5）多孔玻璃珠：化學(xué)和物理穩(wěn)定性好，機(jī)械強(qiáng)度高，不但能抵御酶及微生物的作用，還能耐受高溫滅菌和較劇烈的反應(yīng)條件。 缺點(diǎn)：親水性不強(qiáng)，對(duì)蛋白質(zhì)尤其是堿性蛋白質(zhì)有非特異性吸附，而且可供連接的化學(xué)活性基團(tuán)也少。 改良方法：為了克服其缺點(diǎn)，市售Bio-Glass的商品都已事先連接了氨烷基（烷基胺）。用葡聚

39、糖包被玻璃珠，則可改善其親水性，并增加化學(xué)活性基團(tuán)。用抗原涂布的玻璃珠已成功地分離了免疫淋巴細(xì)胞，在DNA連接的玻璃珠上純化了大腸桿菌的DNA和RNA聚合酶。 （6 6）其他載體：）其他載體： 由聚丙烯酰胺和瓊脂糖混合組成的載體，商品名為Ultrogels ACA。它的特點(diǎn)是載體上既有羥基又有酰胺基，并且都能與配基單獨(dú)作用。但不能接觸強(qiáng)堿，以免酰胺水解，使用溫度不超過40C。 在丙烯酰胺和瓊脂糖的混合膠中加入7%的四氧化三鐵，則可制得一種稱為磁性膠（Magnogels ACA44）的載體。當(dāng)懸浮液中含有不均勻粒子時(shí)，依靠磁性能將載體與其他粒子分離。磁性膠載體常用于酶的免疫測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、放

40、射免疫測(cè)定、免疫吸收劑和細(xì)胞分離等的微量測(cè)定和制備。 影響吸附親和力的幾個(gè)因素影響吸附親和力的幾個(gè)因素： （1）配基濃度；）配基濃度； （2）空間障礙；）空間障礙； （3）配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)；）配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)； （4）載體的孔徑；）載體的孔徑； （5）微環(huán)境（化學(xué)因素）。）微環(huán)境（化學(xué)因素）。Concentration 濃縮濃縮濃縮：低濃度溶液通過除去熔劑邊為高濃度溶液的過程。常濃縮：低濃度溶液通過除去熔劑邊為高濃度溶液的過程。常在提取后和結(jié)晶前進(jìn)行，有時(shí)也貫穿與整個(gè)制藥過程。在提取后和結(jié)晶前進(jìn)行，有時(shí)也貫穿與整個(gè)制藥過程。 蒸發(fā)裝置的設(shè)計(jì)原理：加熱、擴(kuò)大液體表面積、低壓。蒸發(fā)裝置的設(shè)

41、計(jì)原理：加熱、擴(kuò)大液體表面積、低壓。 薄膜蒸發(fā)濃縮薄膜蒸發(fā)濃縮Film evaporation concentration Film evaporation concentration 臥式噴淋臥式噴淋降膜蒸發(fā)器、降膜蒸發(fā)器、RoseRose蒸發(fā)器、板式蒸發(fā)器蒸發(fā)器、板式蒸發(fā)器 減壓蒸發(fā)濃縮減壓蒸發(fā)濃縮Decompression evaporation concentration Decompression evaporation concentration 減壓抽真空（真空濃縮），適用不耐熱的藥物和制品。減壓抽真空（真空濃縮），適用不耐熱的藥物和制品。 吸收濃縮吸收濃縮Absorbing c

42、oncentration 通過吸收劑直接吸收除去溶液中的溶劑分子使溶液濃縮的方法。吸收劑與溶液不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)生化藥物不起吸附作用，易與溶液分開。吸附劑除去溶劑后可重復(fù)使用。 常用的吸收劑常用的吸收劑：聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、凝膠。 凝膠可直接投入待濃縮的溶液中，溶劑和小分子被吸收到凝膠內(nèi)，大分子留在溶液中，然后離心過濾。使用聚乙二醇時(shí)，先將溶液裝入半透膜的袋內(nèi)，扎緊袋口，外加聚乙二醇覆蓋，袋內(nèi)溶劑滲出即被聚乙二醇吸去。 Crystallization 結(jié)晶結(jié)晶結(jié)晶結(jié)晶：利用某些藥物具有形成晶體的性質(zhì)是目標(biāo)藥物（溶質(zhì)）呈晶態(tài)從溶液中析出的過程。結(jié)晶的條件結(jié)晶的條件：（1）純度purit

43、y：各種物質(zhì)在溶液中均需達(dá)到一定的純度才能析出結(jié)晶。蛋白質(zhì)和酶，純度不低于50%?？傏厔?shì)是越純?cè)揭捉Y(jié)晶，但已結(jié)晶的制品不表示達(dá)到了絕對(duì)的純化，只能說到了相當(dāng)純的程度。有時(shí)純度不高，但加入有機(jī)溶劑和制成鹽，也能達(dá)到結(jié)晶。（2）濃度consideration：結(jié)晶液的濃度要較高，以利于分子間的碰撞聚合。但濃度過高，相應(yīng)雜質(zhì)和溶液黏度增大，反而不利于結(jié)晶，或生成純度較差的粉末結(jié)晶。（3）pH：選擇pH在pI附近，有利于晶體析出。（4）溫度 temperature：通常在低溫條件進(jìn)行，活性物質(zhì)不易變性，又可避免細(xì)菌繁殖。（5）時(shí)間Time：結(jié)晶的生成和生長需要時(shí)間。但生物藥物要求在幾小時(shí)內(nèi)完成，時(shí)間不

44、宜過長。 （6）晶種 Crystal seed：不易結(jié)晶的藥物常加晶種。干干 燥燥 Desiccation干燥干燥：是從濕的固體生物藥物中，除去水分或溶劑而獲得相對(duì)或絕對(duì)干燥制品的工藝過程。它也是一種蒸發(fā)，但不同于濃縮。通常包括原料藥的干燥和制成的臨床制劑的干燥。 （1）常壓干燥 Normal press desiccation：通風(fēng)與加熱結(jié)合。成本低干燥量大。但時(shí)間長，易污染。 （2）減壓干燥 Decompression desiccation：利用專用設(shè)備減壓加速，使溶劑迅速蒸發(fā)。時(shí)間短，溫度低。制藥常用方法。 （3）噴霧干燥 Spray desiccation：將液體通過噴射裝置噴成霧滴

45、后，在一定流速的熱氣流中，迅速蒸發(fā)干燥的方法。 從理論推算：每升液體，如果噴成10m直徑的霧滴，約有1.91*1012多個(gè)，表面積有600m2。實(shí)驗(yàn)表明：把含水量為80%的1L溶液，噴成直徑約10-60 m霧滴，當(dāng)與熱空氣接觸時(shí)，僅3-5s可使霧滴水分氣化而得到干燥產(chǎn)品。 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：快速高效，可在無菌條件下操作，應(yīng)用廣泛。 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：熱利用率不高，設(shè)備費(fèi)用投資大。 （4）冷凍干燥Freezing desiccation：在低溫（ -60-10 ）及高真空6.67-40Pa（0.05-0.3mmHg）下，將物料與溶液中的水分直接升華的干燥方法。 適用于高度熱敏的生物藥物。制劑應(yīng)具有多孔性、疏松、

46、易溶的特點(diǎn)，一般含水量在1%-3%。設(shè)備投資及維護(hù)費(fèi)用高，生產(chǎn)能力不大。改進(jìn)的干燥設(shè)備改進(jìn)的干燥設(shè)備 環(huán)型噴射干燥器 振動(dòng)流動(dòng)干燥器 渦流干燥器Sterilization 滅菌滅菌滅菌：指殺滅或除去一切微生物的操作技術(shù)。 干熱空氣滅菌干熱空氣滅菌：通常在烘箱里利用熱空氣殺滅微生物，在100 ，1h可殺死繁殖的細(xì)菌。但某些細(xì)菌在一定情況下可以變成芽孢，有較強(qiáng)的耐熱力，一般需160-170 滅菌1h以上或140 滅菌3h以上。滅菌的時(shí)間應(yīng)自全部進(jìn)行滅菌的物品達(dá)到滅菌溫度時(shí)算起。待滅菌物品的溫度常落后于烘箱室的溫度，特別是導(dǎo)熱性能差或裝量大的待滅菌物品。要確保滅菌完全，應(yīng)測(cè)定溫度延后時(shí)間，將延后的時(shí)

47、間考慮到規(guī)定的滅菌時(shí)間內(nèi)。濕熱滅菌濕熱滅菌： 常壓滅菌常壓滅菌，即在常壓下用100 流通蒸汽或在水內(nèi)煮沸來殺滅細(xì)菌。 減壓滅菌減壓滅菌：在熱壓滅菌器中，用超過101.325kPa的飽和蒸汽殺滅細(xì)菌。 熱壓滅菌所需溫度、相對(duì)壓力和時(shí)間熱壓滅菌所需溫度、相對(duì)壓力和時(shí)間： 115.5 115.5 1.7 kgf/cm2 ( 1.7 kgf/cm2 (表壓表壓 0.7 kgf/cm2 0.7 kgf/cm2 ） 30min30min 121.5 121.5 2.0 kgf/cm2 ( 2.0 kgf/cm2 (表壓表壓 1.0 kgf/cm2 1.0 kgf/cm2 ） 20min20min 126.

48、5 126.5 2.4 kgf/cm2 ( 2.4 kgf/cm2 (表壓表壓 1.4 kgf/cm2 1.4 kgf/cm2 ） 15min15min 紫外線滅菌紫外線滅菌：主要用于空氣和物體的表面滅菌。一般紫外燈高度距操作臺(tái)面不超過1.5m，被滅菌物距燈與臺(tái)面的垂直點(diǎn)中心不超過1.5 m。用于室內(nèi)空氣滅菌時(shí)，約6-15m3的空間裝一盞紫外燈。 人體若照射紫外線過久會(huì)產(chǎn)生眼結(jié)膜炎、紅斑和皮膚變紅等。故一般均在操作前照射1-2h。若操作時(shí)必須照射時(shí)，對(duì)操作人員的眼睛和皮膚要加以防護(hù)。 過濾滅菌過濾滅菌：通過適宜的濾器除去藥液中所含的細(xì)菌。常用有硅藻土濾柱、素瓷濾柱、垂熔玻璃濾器、石棉板呂器和微

49、孔濾膜（纖維素酯膜、聚碳酸酯膜）。濾器孔徑約為0.2m時(shí)，滅菌結(jié)果才可靠。 適用于不耐熱的藥物溶液的滅菌、除去活菌和死菌。滅菌后的藥液進(jìn)行分裝時(shí)，要特別注意防止染菌，應(yīng)進(jìn)行無菌操作。 化學(xué)滅菌化學(xué)滅菌：用化學(xué)藥品抑制或殺滅細(xì)菌的方法。常用其氣體或蒸汽殺滅細(xì)菌的藥品有甲醛、丙二醇、乳酸等，適用于無菌室的空氣滅菌。小結(jié)小結(jié) 生物制藥生物制藥是利用一定的生物制備技術(shù)從生物材料中獲是利用一定的生物制備技術(shù)從生物材料中獲取特殊的生物活性物質(zhì)的過程。取特殊的生物活性物質(zhì)的過程。需要經(jīng)常注意的幾個(gè)問題：需要經(jīng)常注意的幾個(gè)問題：1 1、生物材料的組成成分復(fù)雜，各種化合物的形狀、大小、生物材料的組成成分復(fù)雜，各

50、種化合物的形狀、大小、相對(duì)分子質(zhì)量和理化性質(zhì)都各不相同，有些還屬于未知。相對(duì)分子質(zhì)量和理化性質(zhì)都各不相同，有些還屬于未知。且這些化合物在分離時(shí)仍在不斷的代謝之中。且這些化合物在分離時(shí)仍在不斷的代謝之中。2 2、有些化合物含量很低或極微。制備時(shí)，原材料用量很大，、有些化合物含量很低或極微。制備時(shí)，原材料用量很大，得到產(chǎn)品很少。得到產(chǎn)品很少。3 3、生物活性物質(zhì)，一旦離開了生物體內(nèi)環(huán)境，很易變性。、生物活性物質(zhì)，一旦離開了生物體內(nèi)環(huán)境，很易變性。4 4、分離制備的過程幾乎在溶液中進(jìn)行，各種溫度、分離制備的過程幾乎在溶液中進(jìn)行，各種溫度、PHPH、離、離子強(qiáng)度等參數(shù)，對(duì)溶液中各種組成的綜合影響，常常

51、無法子強(qiáng)度等參數(shù)，對(duì)溶液中各種組成的綜合影響，常常無法固定，有些實(shí)驗(yàn)或工藝設(shè)計(jì)的合理性不強(qiáng)，常帶有很大的固定，有些實(shí)驗(yàn)或工藝設(shè)計(jì)的合理性不強(qiáng)，常帶有很大的經(jīng)驗(yàn)成分。因此，要建立重復(fù)性好的成熟工藝，對(duì)生物材經(jīng)驗(yàn)成分。因此，要建立重復(fù)性好的成熟工藝，對(duì)生物材料、各種試劑及其輔料都要加以嚴(yán)格規(guī)定。料、各種試劑及其輔料都要加以嚴(yán)格規(guī)定。一、原料選擇選擇和預(yù)處預(yù)處理（Raw Material Selecting and Pretreatment） 原料選擇的基本準(zhǔn)則原料選擇的基本準(zhǔn)則：1、在大量的信息資料和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇目標(biāo)原料。、在大量的信息資料和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇目標(biāo)原料。2、選擇有效成

52、分含量高的新鮮材料；、選擇有效成分含量高的新鮮材料；3、來源豐富易得；、來源豐富易得；4、制造工藝簡單易行；、制造工藝簡單易行；5、成本比較低；、成本比較低；6、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境, 選擇對(duì)環(huán)境友好的原材料資選擇對(duì)環(huán)境友好的原材料資 源，防止生物入侵。源，防止生物入侵。預(yù)處理方法預(yù)處理方法：1 1、動(dòng)物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分；、動(dòng)物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分；植物種子去殼除脂；微生物要進(jìn)行菌體與發(fā)酵液分離等植物種子去殼除脂；微生物要進(jìn)行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運(yùn)輸。基本操作。便于貯存和運(yùn)輸。2 2、冷凍法預(yù)處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便、冷凍法預(yù)處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便抑制微生物和酶的作用。抑制微生物和酶的作用。3 3、有機(jī)溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進(jìn)行脫水和脫脂，、有機(jī)溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進(jìn)行脫水和脫脂，有利于貯存。有利于貯存。幾種溶劑的介電常數(shù)幾種溶劑的介電常數(shù)溶劑名稱溶劑名稱 20 時(shí)的介電常數(shù)時(shí)的介電常數(shù) 溶劑名稱溶劑名稱