不規(guī)則抗體篩選和鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、精品不規(guī)則抗體篩選和鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 .檢驗(yàn)?zāi)康牟灰?guī)則抗體篩選和鑒定可在交叉配合之前進(jìn)行或一起進(jìn)行， 這樣有利于患者抗體的早期確認(rèn)及鑒定， 發(fā)現(xiàn)臨床上有意義的抗體， 避免一些可能的情況而造成病情的延誤。2 .檢驗(yàn)方法分鹽水介質(zhì)法、抗球蛋白法和微柱凝膠法。3 .檢驗(yàn)原理讓待檢者的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞（I、H、m套）起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37 中有反應(yīng)活性的抗體。這種抗體可引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)、 或使輸入的紅細(xì)胞存活期縮短等。 當(dāng)不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性后，再進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，即利用譜紅細(xì)胞（ 11 套鑒定細(xì)胞）與待檢者的血清反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機(jī)體所產(chǎn)生的同種抗體類別

2、。4 .標(biāo)本要求受檢者不抗凝靜脈血4.0ml ，分離血清， 48 小時(shí)內(nèi)使用5 .試劑5.1. 篩選紅細(xì)胞：由 2 或 3 人份的 O 型紅細(xì)胞組成為一套試劑，每套試劑篩選紅細(xì)胞中至少有以下常見(jiàn)的抗原： D、 C、 E、 c、 e、 M 、 N 、 S、 s、 P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb 等。每次用 3 套試劑（I、H、m） 進(jìn)行抗體篩選，見(jiàn)表1005-1 。5.2. 鑒定譜細(xì)胞： 除包括常見(jiàn)的抗原以外還有：Cw、 Kpa、 Kpb、 Jsa、 Jsb、 Lua、Lub、Xr/min a等。每次用11套試劑進(jìn)行抗體鑒定，見(jiàn)表1005-2。5.3. 抗球蛋白試劑：

3、多特異性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。5.4. 致敏紅細(xì)胞（質(zhì)控細(xì)胞）。5.5. 0.9%生理鹽水。5.6. Coombs微柱凝膠卡。6 .器材試管、吸管、37 c水浴箱、臺(tái)式離心機(jī)、濾紙、微量加樣器等。7 .操作程序7.1. 鹽水介質(zhì)法7.1.1. 取受檢者血清2滴于標(biāo)記有I、H、m的3支小試管中。7.1.2. .對(duì)應(yīng)加入I、H、m套 2%5%篩選紅細(xì)胞生理鹽水懸液1滴, 37 C孵育30分鐘。7.1.3. 以3000r/min 離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并記錄反應(yīng)情況于表1005-1中。如果抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，繼續(xù)做以下試驗(yàn)。表1005-1紅細(xì)胞血型篩選細(xì)胞反應(yīng)格局表序血型系Rh-h

4、rKellDuffyKillLewisPMNSsLuth號(hào)基因DCEceKkFyFyJkJkLeLePMNSsLuLuababab1abIR1R1+00+00+0+0+0+RR2R2+0+00+00+0+00+mR1r1+0+0+0+00+0+00+0+試驗(yàn)結(jié)果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）I R1R1RR2R2mR1r1注：+為陽(yáng)性；0為陰性7.1.4. 取受檢者血清2滴于標(biāo)記有111的11支小試管中。7.1.5. 在11支小試管中分別加入11套2%5%鑒定譜細(xì)胞生理鹽水懸液1滴，37c孵育30分鐘。7.1.6. 以3000r/min 離心10秒，觀察凝集和溶血情況,并將反應(yīng)情況記錄于表

5、1005-2中表1005-2紅細(xì)胞血型譜細(xì)胞反應(yīng)格局表序號(hào)血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLuaLub1R1wR1+00+0+0+0+0+2R1R1+00+0+00+0+0+0+3R2R2+0+00+0+00+0+00+4r r0+0+00+00+5r r00+0+0+00+0+0+6r r000+0+00+0+0+0+0+7r r000+0+0+0+0+0+0+0+8Ror+00+0+00+00+0+0+9r r000+0+00+0+00+10r r000+0+0+0+00+0+11r r

6、000+0+0+0+00+結(jié) 果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）1R1wR12R1R13R2R24r r5r r6r r7r r8Ror9r r10r r11r r注：+為陽(yáng)性；0為陰性；W為弱陽(yáng)性7.2. 球蛋白法7.2.1. 如果鹽水法（1）（3）抗體篩選試驗(yàn)陰性，繼續(xù)做以下試驗(yàn)。7.2.2. 冉振搖試管，使管底紅細(xì)胞重新懸浮，用生理鹽水洗滌3次。7.2.3. 最后一次洗滌后，棄去全部鹽水，將試管邊緣鹽水用濾紙吸干。7.2.4. 立即加入多特異性抗球蛋白血清 1滴，混勻。7.2.5. 3000r/min 離心10秒，輕輕懸浮細(xì)胞，肉眼觀察凝集和溶血情況，并用顯微鏡確證，記錄結(jié)果于表100

7、5-1中。7.2.6. 如果抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，再取受檢者血清2滴于標(biāo)記有111的11支 小試管中-可編輯-精品7.2.7. 在11支小試管中分別加入11套鑒定譜細(xì)胞懸液1滴和多特異性抗球蛋白血清1滴，37 c孵育30分鐘。7.2.8. 以3000r/min 離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并將反應(yīng)情況記錄于表1005-2中。7.3. 微柱凝膠法（強(qiáng)生卡）7.3.1. 在Coombs微柱凝膠卡上標(biāo)記I、H、田，分別加入I、H、田套篩選紅細(xì)胞40仙和被檢血清40仙l。7.3.2. 將Coombs微柱凝膠卡置于微柱凝膠孵育器內(nèi)，孵育15分鐘。7.3.3. 取出微柱凝膠卡觀察結(jié)果，并記錄于表1005-

8、1中。7.3.4. 如果抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，將11套鑒定譜細(xì)胞對(duì)應(yīng)加入標(biāo)記有111的微柱凝膠卡中各40仙l。7.3.5. 然后，再各加入被檢血清40仙l。7.3.6. 重復(fù)操作7.3.2.和7.3.3,觀察結(jié)果，并記錄于表 1005-2中。8 .結(jié)果判斷8.1. 必須記錄觀察到的每個(gè)細(xì)胞樣本的凝集強(qiáng)度或溶血現(xiàn)象。8.2. 鹽水法和抗球蛋白法以土+ + + +為陽(yáng)性凝集結(jié)果；微柱凝膠法中抗原抗體復(fù)合物浮在微柱凝膠卡表面或膠中，為陽(yáng)性反應(yīng)；沉于尖底部為陰性反應(yīng)，見(jiàn)精品圖 1005-1 微柱凝膠法結(jié)果判斷8.3. 抗球蛋白法陰性無(wú)凝集，應(yīng)加入致敏紅細(xì)胞（質(zhì)控細(xì)胞） 1 滴，混勻后以1000r/min

9、離心 15 秒， 觀察結(jié)果， 若凝集表示試驗(yàn)結(jié)果為陰性； 若不凝集，表示抗球蛋白血清可能失效，試驗(yàn)無(wú)意義。8.4. 鹽水法和抗球蛋白法判斷溶血和凝集的終點(diǎn)必須準(zhǔn)確和前后一致，如果溶血和凝集都存在， 離心后要立即觀察上清液的情況， 然后輕輕地把細(xì)胞搖散以觀察凝集。8.5. 紅細(xì)胞血型篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞反應(yīng)格局見(jiàn)表1005-1 和 1005-2 。9 .注意事項(xiàng)9.1. 每種試驗(yàn)必須做自身對(duì)照，即待檢者自身血清和自身紅細(xì)胞反應(yīng)，無(wú)凝集則試驗(yàn)有效；若有凝集則提示存在自身免疫抗體。9.2. 抗體篩選陽(yáng)性后，要用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3 次，離心后再觀察結(jié)果，避免假陽(yáng)性反應(yīng)。9.3. 根據(jù)反應(yīng)凝集強(qiáng)度土+ + + +記為陽(yáng)性結(jié)果，表示待檢者血清中有不規(guī)則抗體， 結(jié)合譜細(xì)胞反應(yīng)格局， 確定抗體特性； 無(wú)凝集表示待檢者