液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書.

1、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀1范圍本作業(yè)指導(dǎo)書適用于新安裝、使用中和修理后的離子阱和四極桿（包括三重四級(jí)）兩種類型LC-MS的校準(zhǔn)，四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)等其它類型臺(tái)式LC-MS的校準(zhǔn)可參照此作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。2引用文獻(xiàn)下列文獻(xiàn)所包含的條文，通過(guò)在本指導(dǎo)書中的引用而構(gòu)成本指導(dǎo)書的條文。本指導(dǎo)書發(fā)布時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范或規(guī)程都會(huì)被修訂，使用本指導(dǎo)書的各方應(yīng)探討使用下列文獻(xiàn)最新版本的可能性。JJF1001-1998通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義JJF1059-1999測(cè)量不確定度評(píng)定與表示JJF1164-2006臺(tái)式氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范3概述液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀是以液相色譜為進(jìn)樣分離系統(tǒng)并通過(guò)一定的接

2、口與質(zhì)譜儀耦合到儀器的分析儀器。樣品經(jīng)過(guò)色譜分離后經(jīng)離子源離子化產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)的離子，采用不同的質(zhì)量分析器把電離子按質(zhì)荷比（m/z）分開,得到依質(zhì)量順序排列的質(zhì)譜圖。通過(guò)對(duì)質(zhì)譜圖的分析處理，進(jìn)行定性、定量分析。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由液相色譜、離子源、質(zhì)量分析器、檢測(cè)器、真空系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)等幾部分組成。4計(jì)量特性LC-MS各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)見表1表1 LC-MS主要技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)要 求質(zhì)量范圍不低于1000 u質(zhì)量準(zhǔn)確性* 0.6 u分辨力（R）*1 u信噪比*正ESI10 pg利血平，m/z609處 S/N10：1 （峰峰值）負(fù)ESI 20 pg氯霉素，m/z321處 S/N10：1 （

3、峰峰值）正APCI 20 pg利血平，m/z609處 S/N10：1 （峰峰值）整機(jī)定量重復(fù)性*RSD10%注：1 標(biāo)*的為必須校準(zhǔn)項(xiàng)目 2 本技術(shù)指標(biāo)僅供參考,不作為合格性判斷依據(jù)5校準(zhǔn)/測(cè)試條件5.1 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求5 儀器室內(nèi)不得有強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾，不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的易燃、易爆和強(qiáng)腐蝕性氣體或試劑。5 實(shí)驗(yàn)室溫度：2030。 相對(duì)濕度：70。5.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與試劑5 利血平-50%乙腈水溶液：10 pg/L；5 利血平-50%乙腈水溶液：10.0 pg/L； 氯霉素-50%乙腈水溶液：20 pg/L； 氯霉素-50%乙腈水溶液：20.0 pg/L；5.2.5 碘化銫鈉-異丙醇水

4、溶液：2 g/L碘化鈉，50 ng/L碘化銫溶于50%異丙醇水溶液；5.3 標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備 微量注射器：10 L6校準(zhǔn)/測(cè)試項(xiàng)目與校準(zhǔn)/測(cè)試方法6.1外觀檢查6儀器應(yīng)具有下列標(biāo)識(shí)：名稱、型號(hào)、制造廠名(或公司名)、出廠編號(hào)，并附使用說(shuō)明書。6儀器主機(jī)、色譜儀、計(jì)算機(jī)、真空部件和檢測(cè)器等完好(符合出廠說(shuō)明書要求)，各部件連接正確，各插件緊密配合，接觸良好，儀器啟動(dòng)后無(wú)異常噪聲。6儀器的按鍵開關(guān)、各調(diào)節(jié)旋紐均能正常工作，無(wú)松動(dòng)現(xiàn)象，指示燈顯示正常。6儀器運(yùn)行中使用的高電壓、大電流和高溫等應(yīng)在儀器的顯著部位貼有警示標(biāo)志，提醒操作者注意這些潛在危險(xiǎn)。6儀器應(yīng)標(biāo)明使用電壓和頻率等。6.2 分辨力儀器穩(wěn)定后，選

5、擇ESI正離子模式，采用手動(dòng)調(diào)諧，將碘化銫鈉溶液 直接注入質(zhì)譜中，參照附錄D均勻選擇5個(gè)掃描質(zhì)量，優(yōu)化儀器至最佳狀態(tài)，記錄各目標(biāo)離子峰得到半峰寬W1/2。6.3 質(zhì)量范圍參照6.2條件將碘化銫鈉溶液通過(guò)進(jìn)樣泵直接注入質(zhì)譜中，選擇Scan模式，設(shè)定掃描范圍為（202000）m/z，觀察是否出現(xiàn)質(zhì)量數(shù)1000以上的質(zhì)譜峰。6.4 質(zhì)量準(zhǔn)確度參照6.2條件，將碘化銫鈉溶液通過(guò)進(jìn)樣泵直接注入質(zhì)譜中，記錄133，323,473,623,922,1072等碘化銫鈉主要離子的質(zhì)量數(shù)，理論值見附錄D，根據(jù)公式（1）計(jì)算質(zhì)量準(zhǔn)確度 (1)式中第i個(gè)離子三次測(cè)量平均值，u；第i個(gè)離子理論值，u。6.5 信噪比6.

6、5.1 正ESI源儀器穩(wěn)定后，將100pg/ul的利血平溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子609至最佳響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。調(diào)諧完畢后根據(jù)調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用C或等效色譜柱分離，注入10pg利血平溶液，選擇SIM模式，提取特征離子，根據(jù)公式（2）計(jì)算信噪比。 (2)式中：提取離子的峰高； 基線噪聲。6.5.2 負(fù)ESI源儀器穩(wěn)定后，將200pg/ul的氯霉素溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子321至最佳響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。調(diào)諧完畢后根據(jù)調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用C或等效色譜柱分離，注入20pg氯霉素溶液，選

7、擇SIM模式，提取特征離子，根據(jù)公式（2）計(jì)算信噪比。 6.5.3 正APCI源儀器穩(wěn)定后，將100pg/ul的利血平溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子609至最佳響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。調(diào)諧完畢后根據(jù)調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用C或等效色譜柱分離，注入20pg利血平溶液，選擇SIM模式，提取特征離子，根據(jù)公式（2）計(jì)算信噪比。6.6 測(cè)量重復(fù)性參照6.5.1條件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，選擇SIM模式，提取特征離子，連續(xù)測(cè)量6次，記錄相應(yīng)峰面積，根據(jù)公式（3）計(jì)算重復(fù)性 式中：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，%； 第i次測(cè)量峰面積； 峰面積的算術(shù)平均值。

8、7 校準(zhǔn)/測(cè)試結(jié)果處理與復(fù)校周期7.1按程序文件CX 34-01 證書/報(bào)告管理程序要求出具校準(zhǔn)/測(cè)試報(bào)告。7.2檢測(cè)部門對(duì)原始記錄進(jìn)行整理和歸檔。7.3根據(jù)校準(zhǔn)結(jié)果，發(fā)校準(zhǔn)證書或校準(zhǔn)通知書。在校準(zhǔn)結(jié)論中明確說(shuō)明被校準(zhǔn)儀器是否合格、存在問(wèn)題及建議。7.4液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的校準(zhǔn)周期為2年，更換重要部件、維修或?qū)x器性能懷疑時(shí)，應(yīng)隨時(shí)校準(zhǔn)。附錄A液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比擴(kuò)展不確定度A.1 概述 測(cè)量依據(jù)SSY 0052-2010液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書 環(huán)境條件溫度（1527），相對(duì)濕度小于75%RH。 測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 被測(cè)對(duì)象Agilent6100 測(cè)量過(guò)程S

9、SY 0052-2010液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書 評(píng)定結(jié)果的使用符合上述條件的測(cè)量結(jié)果，一般可直接使用本不確定度的評(píng)定結(jié)果。A.2 數(shù)學(xué)模型 數(shù)學(xué)模型： (1)式中： ：提取離子(m/z)的峰高：噪聲峰高度A.3 不確定度分量的計(jì)算A.3.1信號(hào)峰高值測(cè)量不確定度：儀器測(cè)量峰高時(shí)，它與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度、進(jìn)樣量和峰高測(cè)量值的不確定度有關(guān)，因此信號(hào)峰高值測(cè)量不確定度應(yīng)包括三個(gè)方面：信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度進(jìn)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度、微量進(jìn)樣器的不確定度和儀器重復(fù)測(cè)量的不確定度。A.3.1.1信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度進(jìn):信號(hào)峰高測(cè)量值的測(cè)量有兩種方法：一是根據(jù)工作站中記錄的選擇離子流圖，讀取

10、峰高值和基線值，以兩點(diǎn)差的絕對(duì)值作為峰高的測(cè)量值，這種峰高的測(cè)量方法的相對(duì)不確定度優(yōu)于0.2%；二是用工作站記錄相應(yīng)的選擇離子流圖，再用游標(biāo)卡尺量取譜圖的峰高的高度。譜圖的高度一般為100mm,峰高為7090nm，其相對(duì)不確定度的分量估計(jì)為。A.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度是檢定質(zhì)譜計(jì)的不確定度的主要來(lái)源之一，它直接影響檢定結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度通常由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出其定值的誤差為10mg2%，認(rèn)為其為矩形分布，所以。A.3.1.3微量進(jìn)樣器校準(zhǔn)的相對(duì)不確定度：微量注射器的體積刻度是重要的不確定度來(lái)源之一，所以，微量注射器必須經(jīng)校準(zhǔn)后才能使用

11、。規(guī)程中規(guī)定校準(zhǔn)一般稱量6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1%。(進(jìn)行檢定結(jié)果計(jì)算時(shí)，應(yīng)當(dāng)采用校準(zhǔn)值)。A.3.1.4重復(fù)測(cè)量相對(duì)不確定度:現(xiàn)在以一臺(tái)6310的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀為例做重復(fù)性測(cè)量：在相同的條件重復(fù)進(jìn)樣10次，按儀器本身計(jì)算信噪比的軟件進(jìn)行計(jì)算，所得的表1中的數(shù)據(jù)：表1：型號(hào)為6310的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀10次連續(xù)測(cè)量的數(shù)據(jù)序號(hào)12345678910信噪比185132185225228219196174231212由上表可計(jì)算出其單次相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差A(yù).3.1.5由于，相對(duì)獨(dú)立，則A.3.2基線噪聲測(cè)量值的不確定度：基線噪聲測(cè)量的不確定度主要來(lái)自卡尺檢定的不確定度和用卡尺測(cè)量的不確定度，一般為2

12、%。如果用色譜工作站記錄基線噪聲，則其不確定度優(yōu)于1%。A.4合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：數(shù)學(xué)模型： 式中： ：提取離子(m/z)的峰高：噪聲峰高度方差與傳播系數(shù)由：依據(jù)(1)可以推導(dǎo)出： 由于式中各不確定度分量彼此獨(dú)立， 表3 不確定度一覽表不確定度分量標(biāo)準(zhǔn)不確定度來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量值信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度0.5%標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度1.2%微量進(jìn)樣器校準(zhǔn)的相對(duì)不確定度0.4%重復(fù)測(cè)量不確定度%基線噪聲值測(cè)量的不確定度2.0%合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：由,得：擴(kuò)展不確定度：為了計(jì)算的方便，均取=2由公式可得：A.5 擴(kuò)展不確定度的評(píng)定為了計(jì)算的方便，均取=2由公式可得：A.6 測(cè)量不確定度的報(bào)告該液相色

13、譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比的擴(kuò)展不確定度表示為U=30%，k=2。附錄B液相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀量值溯源圖國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心化學(xué)基準(zhǔn)直接測(cè)量深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院標(biāo)準(zhǔn)名稱：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)量范圍：離子阱和四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀準(zhǔn)確度等級(jí)：二級(jí)直接測(cè)量客戶被測(cè)名稱：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)量范圍：離子阱和四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比不確定度：Urel= 30%，k=2附錄C 深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院 校準(zhǔn)記錄格式（供參考）客戶名稱：儀器名稱：液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀型號(hào)規(guī)格：出廠編號(hào)：資產(chǎn)編號(hào)：制造廠名：技術(shù)依據(jù)： 檢定/校準(zhǔn)日期： 年 月 日有效期/復(fù)校周期： 年檢定/校準(zhǔn)地點(diǎn)： 環(huán)境條件： %RH標(biāo)準(zhǔn)器名稱特征設(shè)備編號(hào)檢定/校準(zhǔn)證書號(hào)有效期使用前后狀態(tài)