甘油的檢測方法匯總.

1、甘油的檢測方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會影響外源蛋白的啟動表達效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標，是 提高工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物，其含 量直接影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標之一。此外，甘油 能與水結(jié)合以防止紅細胞的冷凍損傷，能延長紅細胞的保存期，被普遍用作細胞內(nèi)冷凍保 護劑等。由于甘油用途很廣，因此其含量的測定具有非常重要的意義。目前國內(nèi)外甘油含量的測定方法較多，主要有高碘酸氧化法、cU2 +絡合比色法、酶比色法法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法、

2、氣相色譜法、近紅外光譜法以及原子吸 收法等。下面將對其進行簡要概述：一、高碘酸法1. 原理：高碘酸氧化法是目前常見用于甘油含量檢測的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧化還原反應，剩余高碘酸及反應生成的碘酸與碘化鉀反應生成碘，再用硫代硫酸鈉進行滴定，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉的量來計算甘油的含量。2. 操作步驟準確發(fā)酵液10ml于100mL小、燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至 100mL容量瓶中，用水稀 釋至標線，搖勻，靜置。用移液管準確移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入 20mL高碘酸鈉溶液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置 40mi n,然后加入碘化鉀溶液和20溉酸溶液各 15mL調(diào)節(jié)pH值在之間，然后用

3、硫代硫酸鈉標準溶液滴定， 近終點時，加入2mL 淀粉指示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍色消失。同時做試樣空白。3. 計算：w（V2 V1）C M 10010/50 4 1000式中：w樣品中甘油的含量，;V1空白試樣消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mLV2試樣消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mL；C硫代硫酸鈉標準溶液的濃度， mol/L; M甘油相對分子質(zhì)量；二、酶比色法1. 原理：它是利用酶的特異性催化反應建立的測定甘油的一種酶學方法，是指甘油在甘油激酶作用下轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫， 然后過氧化氫和4-氨基安普比林、4-氯酚在過氧化物酶催化下反應生成紫蘭

4、色、 能在500 nm 左右有特征吸收峰的醌亞胺，通過顏色深淺即吸光度的變化測定所生成的HQ，甘油的含量與生成的Q成正比，這樣用比色法就可以測定甘油的含量。2. 操作步驟波長：500nm?（480520nm）反映溫度：37C ?比色杯光徑：1cm?取一定量R1（參看R2瓶簽）加入1瓶R2中，溶解后即為工作液，工作液預先保溫至測試溫 度。空白管校準管1樣品管工作液1ml1ml1ml蒸餾水00標準品樣品00分別混合均勻，在反應溫度保溫10分鐘，以試劑空白管校零，記錄校準及樣品0D值3. 計算：？甘油濃度=A樣品/A校準X校準濃度(mmol/L或mg/dl) ?三、高效液相色譜法1. 原理：高效液相

5、色譜法(HPLC)的原理是以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，利用色譜柱對待測混合物先進行分離，然后再進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析，因而其 測量的準確性和精確度較高，目前已成為檢測生化分子較常用的一種方法。2. 操作步驟(1) 首先用水將發(fā)酵液稀釋 倍，然后加HPO調(diào)pH至5.5,在轉(zhuǎn)速8000r/min、溫度4C 下離心10min,經(jīng)微孔濾膜過濾用于HPLC分析；(2) 將甘油標準系列溶液在最佳色譜條件下進行HPLC分析,以峰面積外標法定量得到甘油標準曲線;（3）按照樣品預處理方法處理后進樣 5微升,記錄峰面

6、積，代入線性方程中，計算其測定值。將計算值乘以稀釋倍數(shù)后，即得發(fā)酵液中甘油的含量四、氣相色譜法1. 原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一定 量的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進樣口中，在載氣帶動下通過色譜柱，分析物的 分子會受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學性質(zhì)，與特定 的固定相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過速率，因此，分析 物中的各種不同組分就會在不同的時間到達柱的末端，從而得到分離。當化合物從柱的末 端流出時，它們被檢測器檢測到，產(chǎn)生相應的信號，并被轉(zhuǎn)化為電信號輸出，從而確定每 一個組分到達色譜柱末端

7、的時間順序以及每一個組分的含量。2. 操作步驟（1）標準溶液的配制 在7個25mL容量瓶中分別準確稱入0、甘油（精確至），再分別移入2mL內(nèi)標貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作為標準工作溶液。其中甘油質(zhì)量濃度分別為0、2、4、8、12、20g/L，內(nèi)標質(zhì)量濃度均為8g/L。（2）樣品的制備 在25mL容量瓶中加入5ml的發(fā)酵液樣品，移入2mL內(nèi)標貯備液，用混 合溶劑定容至刻度并搖勻。（3）GC條件色譜柱：HP-5石英毛細管柱，30m （柱長）x 0.32mm （內(nèi)徑）X 卩m （膜厚）。柱溫： 初始溫度120C，保留5min，以20C/min升至290E，保留10min。進樣口溫度：280C，進

8、樣量：卩L,分流比：100： 1。檢測器(FID)溫度：300C，氫氣流速：40mL/min,空氣流速：300mL/mi n。載氣：氮氣，流速：1mL/mi n,恒流模式(4) 進樣，計算五、酶電極法1、檢測原理利用生物酶只能催化一種或一類底物的性質(zhì)，將甘油氧化酶進行固定化處理，樣本中的甘油在甘油酶膜的作用下被催化生成過氧化氫，根據(jù)電化學的原理，過氧化氫的濃度與電壓值正相關，根據(jù)標準液、緩沖液的電壓值響應值來確定樣本中甘油濃度。甘油濃度與電壓值相關性分析2. 操作步驟按相關操作說明進行。整個檢測過程不超過 45秒應用范圍：發(fā)酵過程甘油濃度檢測，食品中甘油檢測，西爾曼科技有限公司國內(nèi)唯一一家有能力生產(chǎn)可以不用預稀釋樣本就可以檢測高達 1甘油濃度的分析的制造商。六、總結(jié)甘油的測定方法很多，最常用的是化學法?；瘜W法測定甘油含量費用較低，但操作繁瑣, 試劑用量大，耗時長,且有時誤差極大。酶法測定甘油專一性強，只與溶液中的甘油特異性地 反應，但所需試劑昂貴，不利于工業(yè)應用和大量樣品的檢測。測定游離甘油最靈敏的方法是 氣相色譜法、液相色譜法，精確度較高，但需對甘油進行硅烷化，操作麻煩，成本也較高由于高碘量法受發(fā)酵液中的雜質(zhì)（糖