第二章 熒光和化學(xué)發(fā)光分析法

1、嘉興學(xué)院嘉興學(xué)院儀器分析儀器分析第二章第二章 熒光和化學(xué)發(fā)光分析法熒光和化學(xué)發(fā)光分析法15:41:5815:41:58Stokes 用分光計觀察到：熒光的波長比入射光的波長稍微長些五顏六色雨后路面上水珠油膜呈現(xiàn)15:41:58 基態(tài)分子吸收基態(tài)分子吸收能量能量( (電能、熱能、化學(xué)能或光能等電能、熱能、化學(xué)能或光能等) )，電子，電子由基態(tài)由基態(tài)躍遷躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子由激發(fā)態(tài)到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子由激發(fā)態(tài)返回返回基態(tài)時，以發(fā)射基態(tài)時，以發(fā)射電電磁輻射磁輻射( (即光即光) )的形式釋放能量。的形式釋放能量。 分子發(fā)光：分子發(fā)光：分子分子 +電能電能化學(xué)能化學(xué)能光能光能生物活性參生物活性參與化學(xué)發(fā)光

2、與化學(xué)發(fā)光 電致發(fā)光電致發(fā)光化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光光致發(fā)光光致發(fā)光生物發(fā)光生物發(fā)光熒光熒光磷光磷光15:41:58分子發(fā)光：分子發(fā)光：M +能能量量M*M +hv光致發(fā)光：光致發(fā)光：M + hvM*M +hv光15:41:582.1 2.1 熒光分析法熒光分析法2.1.1 2.1.1 熒光分析法基本概念熒光分析法基本概念2.1.2 2.1.2 熒光強(qiáng)度及影響因素?zé)晒鈴?qiáng)度及影響因素2.1.3 2.1.3 儀器裝置儀器裝置2.1.4 2.1.4 定量分析方法定量分析方法2.1.5 2.1.5 熒光分析測定方法、特點(diǎn)和應(yīng)用熒光分析測定方法、特點(diǎn)和應(yīng)用15:41:58A A 分子的激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)態(tài)分子激發(fā)

3、態(tài)和三線激發(fā)態(tài)分子激發(fā)態(tài)和三線激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)：激發(fā)態(tài)： 基態(tài)分子吸收能量后，價層電子躍遷到基態(tài)分子吸收能量后，價層電子躍遷到高能高能級級的分子軌道上稱為電子激發(fā)態(tài)的分子軌道上稱為電子激發(fā)態(tài) 。是分子的。是分子的亞穩(wěn)亞穩(wěn)定狀態(tài)定狀態(tài)?；鶓B(tài)：基態(tài)： 在正常狀態(tài)下，分子處于在正常狀態(tài)下，分子處于最低能級最低能級的分子軌的分子軌道上稱為基態(tài)。是分子的道上稱為基態(tài)。是分子的穩(wěn)定狀態(tài)穩(wěn)定狀態(tài)。2.1.1 2.1.1 熒光分析法基本概念熒光分析法基本概念2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:58l 電子自旋多重度電子自旋多重度 電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，分子中的電子電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，分子中的電子可以處在

4、不同的自旋狀態(tài)可以處在不同的自旋狀態(tài), ,常用常用電子自旋多重度電子自旋多重度來描述來描述。M = 2S + 1S是電子的總自旋量子數(shù)，各電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和。是電子的總自旋量子數(shù)，各電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:58 單重態(tài)（單重態(tài)（M=1）：）：電子自旋都配對的分子的電電子自旋都配對的分子的電子態(tài)稱為單重態(tài)，子態(tài)稱為單重態(tài)，用用“S”表示。表示。 三重態(tài)（三重態(tài)（M=3）：）：分子中的電子對的電子自旋分子中的電子對的電子自旋平行的電子態(tài)稱為三重態(tài)，平行的電子態(tài)稱為三重態(tài)，用用“T”表示。表示。S2 T2 S1 T1 S0 ( (洪特規(guī)則洪特規(guī)則) ) M

5、 = 2S + 1M自旋多重度自旋多重度S總自旋量子數(shù)總自旋量子數(shù)2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:592021-9-13S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外轉(zhuǎn)換l l 2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫分子熒光和磷光發(fā)射過程15:41:59 電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過通過輻射躍遷輻射躍遷( (發(fā)光發(fā)光) )和和非輻射躍遷非輻射躍遷( (熱熱) )等方式失去等方式失去能量。能量。傳遞途徑傳遞途徑輻射躍遷輻射躍遷熒光熒光磷光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換系間跨越系間跨越振動弛豫振動

6、弛豫非輻射躍遷非輻射躍遷延遲熒光延遲熒光外轉(zhuǎn)換外轉(zhuǎn)換返回速度快的途徑，發(fā)生幾率大返回速度快的途徑，發(fā)生幾率大!B B 分子去激發(fā)過程及熒光的產(chǎn)生分子去激發(fā)過程及熒光的產(chǎn)生2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59S2S0ehv（1）. 振動弛豫：振動弛豫：同一電子能級同一電子能級內(nèi)以內(nèi)以熱能量交換熱能量交換形形式由高振動能級至低相鄰振動能級間的躍遷。發(fā)生式由高振動能級至低相鄰振動能級間的躍遷。發(fā)生振動時間振動時間10 -11 10 -13 s。1 1、非輻射躍遷、非輻射躍遷2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59S2S0S1ehv（2）. 內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換：相同多重度相同多重度的電子能級中的

7、電子能級中, 相等能級相等能級間的非輻射能級交換。發(fā)生內(nèi)轉(zhuǎn)換的時間間的非輻射能級交換。發(fā)生內(nèi)轉(zhuǎn)換的時間10-12 s。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59S2S0S1T1ehv（3）. 系間跨越系間跨越：不同不同多重態(tài)在有重疊多重態(tài)在有重疊的轉(zhuǎn)動能級的轉(zhuǎn)動能級間的非輻射躍遷。電子自旋改變，躍遷禁阻，通過間的非輻射躍遷。電子自旋改變，躍遷禁阻，通過自旋自旋- -軌道耦合等躍遷。軌道耦合等躍遷。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59（4）. 外轉(zhuǎn)換外轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)分子與溶劑或其他分激發(fā)態(tài)分子與溶劑或其他分子之間產(chǎn)生相互作用而損失能量回到基態(tài)的非子之間產(chǎn)生相互作用而損失能量回到基態(tài)的非輻

8、射躍遷。輻射躍遷。 外轉(zhuǎn)換使熒光或磷光減弱或外轉(zhuǎn)換使熒光或磷光減弱或“猝滅猝滅”。2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59S2S0S1T1（1）. 熒光發(fā)射：熒光發(fā)射：電子由電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級能級基態(tài)各振動能級基態(tài)各振動能級，發(fā)射時間約為發(fā)射時間約為10-710-9 s 。 發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長長波長長。 ehvhv2 2、輻射躍遷、輻射躍遷2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:59（2）. 磷光發(fā)射磷光發(fā)射：電子由電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級動能級基態(tài)各振動能級基態(tài)各振

9、動能級。發(fā)光時間：。發(fā)光時間：10-410s 。S2S0S1T1hvehvS0 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)振動弛豫振動弛豫內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換系間跨越系間跨越振動弛豫振動弛豫 T1 S0 2.1.1.1 熒光及其產(chǎn)生15:41:591 1、熒光激發(fā)光譜、熒光激發(fā)光譜 固定熒光測量波固定熒光測量波長，改變激發(fā)光的波長，改變激發(fā)光的波長，測量不同波長長，測量不同波長ex激發(fā)光照射下熒光強(qiáng)激發(fā)光照射下熒光強(qiáng)度的變化，記錄熒光度的變化，記錄熒光強(qiáng)度強(qiáng)度F F與激發(fā)光波長的與激發(fā)光波長的關(guān)系曲線。關(guān)系曲線。200260320380440500560620熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜室溫下菲

10、的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜2.1.1.2 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線15:41:592 2、熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜 200260320380440500560620熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜 固定激發(fā)光波長固定激發(fā)光波長和強(qiáng)度，記錄在不同和強(qiáng)度，記錄在不同波長波長emem下所發(fā)射的熒下所發(fā)射的熒光強(qiáng)度所得關(guān)系曲線光強(qiáng)度所得關(guān)系曲線即不同波長下熒光強(qiáng)即不同波長下熒光強(qiáng)度的分布。度的分布。發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān)。發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān)。2.1.1.2

11、 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線15:41:59l 熒光發(fā)射光譜與吸收光譜成鏡像關(guān)系熒光發(fā)射光譜與吸收光譜成鏡像關(guān)系 2.1.1.2 熒光激發(fā)光譜曲線和發(fā)射光譜曲線l 吸收光譜的形狀表明了分子第一激發(fā)單重態(tài)的振動能級；發(fā)射光譜表明分子基態(tài)的振動能級結(jié)構(gòu)。l 基態(tài)與激發(fā)態(tài)兩者的振動能級結(jié)構(gòu)相似，激發(fā)與去激發(fā)組成相反的兩個過程。15:41:59u 分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件1. 具有合適的結(jié)構(gòu)：通常是含有苯環(huán)和稠環(huán)的剛具有合適的結(jié)構(gòu)：通常是含有苯環(huán)和稠環(huán)的剛性結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子；性結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子；2. 具有一定的熒光量子產(chǎn)率。具有一定的熒光量子產(chǎn)率。2.1.1.3 熒光效率1

12、5:41:59=發(fā)射發(fā)射熒光的分子數(shù)熒光的分子數(shù)激發(fā)分子激發(fā)分子總總數(shù)數(shù)2.1.1.3 熒光效率熒光量子產(chǎn)率（熒光量子產(chǎn)率（）：）： 衡量熒光物質(zhì)發(fā)光能力。衡量熒光物質(zhì)發(fā)光能力。 它表示激發(fā)分子發(fā)射出熒光它表示激發(fā)分子發(fā)射出熒光(或磷光或磷光) 的比例。的比例。15:41:59 熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過程的速熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過程的速率常數(shù)有關(guān)，可用各過程的速率常數(shù)來表示熒光率常數(shù)有關(guān)，可用各過程的速率常數(shù)來表示熒光量子產(chǎn)率：量子產(chǎn)率：ffiiKKK 熒光發(fā)射過程的熒光發(fā)射過程的速率常數(shù)，取決速率常數(shù)，取決于分子結(jié)構(gòu)。于分子結(jié)構(gòu)。各種非輻射躍遷過程的速各種非輻射躍遷過程的速

13、率常數(shù)之和。取決于分子率常數(shù)之和。取決于分子所處的化學(xué)環(huán)境，同時也所處的化學(xué)環(huán)境，同時也與化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。與化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。2.1.1.3 熒光效率15:41:59 熒光分子與其他分子相互作用引起熒光強(qiáng)度熒光分子與其他分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低甚至熒光消失的現(xiàn)象為降低甚至熒光消失的現(xiàn)象為熒光猝滅熒光猝滅，又稱熒光，又稱熒光熄滅。熄滅。（1 1）、）、 碰撞猝滅碰撞猝滅-動態(tài)猝滅動態(tài)猝滅 M* + Q M + Q + 熱量熱量激發(fā)態(tài)分子激發(fā)態(tài)分子猝滅劑猝滅劑2.1.1.4 猝滅15:41:59（2 2）、）、 生成化合物的猝滅生成化合物的猝滅-靜態(tài)猝滅靜態(tài)猝滅 M + Q M Q 基態(tài)的熒光物質(zhì)與

14、猝滅劑反應(yīng)生成非熒光的基態(tài)的熒光物質(zhì)與猝滅劑反應(yīng)生成非熒光的化合物，導(dǎo)致熒光的猝滅。化合物，導(dǎo)致熒光的猝滅。2.1.1.4 猝滅（3 3）、）、 能量轉(zhuǎn)移能量轉(zhuǎn)移 M* + Q M + Q* 激發(fā)態(tài)的分子與猝滅劑作用，能量發(fā)生轉(zhuǎn)移激發(fā)態(tài)的分子與猝滅劑作用，能量發(fā)生轉(zhuǎn)移，猝滅劑被激發(fā)。，猝滅劑被激發(fā)。15:41:59（5 5）、）、 自猝滅自猝滅 熒光物質(zhì)的濃度較大時，激發(fā)態(tài)分子之間碰撞熒光物質(zhì)的濃度較大時，激發(fā)態(tài)分子之間碰撞較多，在碰撞中引起能量損失，產(chǎn)生自熄，使熒光較多，在碰撞中引起能量損失，產(chǎn)生自熄，使熒光強(qiáng)度減小。強(qiáng)度減小。2.1.1.4 猝滅（4 4）、）、 氧的猝滅氧的猝滅 氧對溶液

15、熒光產(chǎn)生猝滅作用的原因比較復(fù)氧對溶液熒光產(chǎn)生猝滅作用的原因比較復(fù)雜，可能包含著多種機(jī)理。雜，可能包含著多種機(jī)理。 15:41:592.1.2 熒光強(qiáng)度及影響因素?zé)晒鈴?qiáng)度及影響因素2.1.2.1 熒光強(qiáng)度與溶液濃度的關(guān)系2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系2.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響15:41:59Epsilon（大寫，小寫），是第五個希臘字母。漢字讀音：艾普西龍朗伯-比爾定律0fbc*303. 2IKIP1515:41:59A A 躍遷的類型躍遷的類型 n * max100 平均壽命平均壽命10-510-7 s；* max104 平均壽命平

16、均壽命10-710-8 s l* 是有機(jī)化合物產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型，具是有機(jī)化合物產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型，具有有* 共軛雙鍵的分子才能發(fā)射較強(qiáng)的熒光。共軛雙鍵的分子才能發(fā)射較強(qiáng)的熒光。2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系熒光的產(chǎn)生是分子先經(jīng)歷* 或n * 激發(fā)，然后經(jīng)振動弛豫或其他非輻射躍遷再發(fā)生* 或* n 而得到熒光。15:41:59B B 共軛效應(yīng)共軛效應(yīng)產(chǎn)生熒光的有機(jī)物質(zhì)，都含有共軛雙鍵體系，產(chǎn)生熒光的有機(jī)物質(zhì)，都含有共軛雙鍵體系，共軛體系越大，熒光量子產(chǎn)率越高，向長波方向共軛體系越大，熒光量子產(chǎn)率越高，向長波方向移動移動?；衔锘衔锪孔赢a(chǎn)率量子產(chǎn)率F ex（nm） em（n

17、m） 苯苯萘萘蒽蒽丁省丁省2052863653902.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系0.110.280.360.5227832140448015:41:59C C 分子共平面效應(yīng)分子共平面效應(yīng)芴芴 = 1聯(lián)苯聯(lián)苯 = 0.2熒光分子的共平面性增加，則共軛體系大，有熒光分子的共平面性增加，則共軛體系大，有利于利于* 躍遷。躍遷。2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系15:41:59熒光黃熒光黃 = 0.92酚酞酚酞 = 02.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系15:42:00D D 取代基效應(yīng)取代基效應(yīng)1. 給電子取代基加強(qiáng)熒光給電子取代基加強(qiáng)熒光-NH2，-NHR ，-NR2，

18、-OH， -OR ，-CN產(chǎn)生產(chǎn)生 p 共軛共軛2. 吸電子取代基減弱熒光吸電子取代基減弱熒光-C=O， -COOH ，-NO2摩爾吸光系數(shù)小，熒光發(fā)射弱，系間跨躍較大，摩爾吸光系數(shù)小，熒光發(fā)射弱，系間跨躍較大，同樣使熒光減弱。同樣使熒光減弱。 2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系15:42:00D D 取代基效應(yīng)取代基效應(yīng)2.1.2.2 有機(jī)物的熒光與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系A(chǔ) A 躍遷的類型躍遷的類型B B 共軛效應(yīng)共軛效應(yīng)C C 分子共平面效應(yīng)分子共平面效應(yīng)15:42:002.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光（2 2）螯合物中金屬離子的發(fā)光）螯合物中金屬離子的發(fā)光（1 1）螯合物中配位體的發(fā)光

19、）螯合物中配位體的發(fā)光15:42:002.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光（1 1）螯合物中配位體的發(fā)光）螯合物中配位體的發(fā)光 不少有機(jī)化合物雖然具有共軛雙鍵，但由于不是剛性結(jié)構(gòu)，分子處于非同一平面，因而不發(fā)生熒光。若這些化合物和金屬離子形成螯合物，隨著分子的剛性增強(qiáng)，平面結(jié)構(gòu)的增大，常會發(fā)生熒光。 如8-羥基喹啉本身有很弱的熒光，但其金屬螯合物具有很強(qiáng)的熒光。15:42:002.1.2.3 金屬離子螯合物的熒光 這類發(fā)光過程通常是螯合物首先通過配位體的躍遷激發(fā)，接著配位體把能量轉(zhuǎn)給金屬離子，導(dǎo)致dd 躍遷和ff躍遷，最終發(fā)射的是dd躍遷和ff躍遷光譜。（2 2）螯合物中金屬離子的發(fā)光）螯合物

20、中金屬離子的發(fā)光15:42:002 2、溶劑、溶劑3 3、溶液黏度和、溶液黏度和溫度溫度 4 4、溶液的、溶液的PH值值2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響1 1、激發(fā)光源、激發(fā)光源15:42:002.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響1 1、激發(fā)光源、激發(fā)光源激發(fā)光強(qiáng)度激發(fā)光強(qiáng)度I I0 0大，熒光強(qiáng)度增大，靈敏度增高。大，熒光強(qiáng)度增大，靈敏度增高。2 2、溶劑、溶劑 主要表現(xiàn)為主要表現(xiàn)為溶劑的極性、氫鍵、配位鍵溶劑的極性、氫鍵、配位鍵的形成對的形成對化合物的熒光發(fā)生變化?；衔锏臒晒獍l(fā)生變化。 * * 躍遷類型：躍遷類型：溶劑極性增大溶劑極性增大，躍遷能量降低躍遷能量降低，發(fā)生紅移，

21、發(fā)生紅移，熒光增強(qiáng)熒光增強(qiáng)。 氫鍵、配位鍵的形成主要影響熒光分子的氫鍵、配位鍵的形成主要影響熒光分子的存在型存在型體、電離狀態(tài)體、電離狀態(tài)，熒光強(qiáng)度和形狀均發(fā)生很大變化。，熒光強(qiáng)度和形狀均發(fā)生很大變化。15:42:003 3、溶液黏度和、溶液黏度和溫度溫度 黏度大，溫度低，可減小碰撞引起的熒光熄滅，黏度大，溫度低，可減小碰撞引起的熒光熄滅，熒光強(qiáng)度增大。熒光強(qiáng)度增大。溫度升高，外轉(zhuǎn)換的幾率增加，熒光強(qiáng)度降低。溫度升高，外轉(zhuǎn)換的幾率增加，熒光強(qiáng)度降低。4 4、溶液的、溶液的PH值值不同不同PH值下，熒光分子存在形式不同。值下，熒光分子存在形式不同。2.1.2.4 實驗條件對熒光強(qiáng)度的影響15:4

22、2:002.1.3 2.1.3 儀器裝置儀器裝置Cary Eclipse 熒光分光光度計熒光分光光度計熒光、磷光化學(xué)熒光、磷光化學(xué)/生物發(fā)光生物發(fā)光美國瓦里安技術(shù)中國有限公司美國瓦里安技術(shù)中國有限公司15:42:00一、一、熒光分光光度計結(jié)構(gòu)流程熒光分光光度計結(jié)構(gòu)流程 2.1.3 儀器裝置儀器裝置光源光源樣品池樣品池激發(fā)激發(fā)單色器單色器檢測器檢測器數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理儀器控制儀器控制發(fā)射發(fā)射單色器單色器組成：組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器、檢測器、顯激發(fā)光源、樣品池、雙單色器、檢測器、顯示系統(tǒng)。示系統(tǒng)。特殊點(diǎn)：特殊點(diǎn)：兩個單色器兩個單色器，光源與檢測器通常成，光源與檢測器通常成直角直角。15:4

23、2:001 1、激發(fā)光源激發(fā)光源 汞燈、碘鎢燈、氙弧燈、激光等汞燈、碘鎢燈、氙弧燈、激光等。2 2、樣品池樣品池 I0ItIf樣品池四面透光。樣品池四面透光。2.1.3 儀器裝置儀器裝置15:42:004 4、檢測器檢測器 一般采用硒光電池。一般采用硒光電池。 檢測器的方向與激發(fā)光的方向成直角，以消檢測器的方向與激發(fā)光的方向成直角，以消除樣品池中除樣品池中透射光和雜散光的干擾透射光和雜散光的干擾。 3 3、單色器單色器 激發(fā)單色器：激發(fā)單色器：選擇激發(fā)光波長，選擇激發(fā)光波長，用以分離出所需用的激發(fā)光。用以分離出所需用的激發(fā)光。發(fā)射單色器：發(fā)射單色器：選擇熒光發(fā)射波長，選擇熒光發(fā)射波長，用以濾去

24、雜散光、瑞利光、用以濾去雜散光、瑞利光、拉曼光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。拉曼光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。 2.1.3 儀器裝置儀器裝置15:42:00二、二、磷光分光光度計結(jié)構(gòu)流程磷光分光光度計結(jié)構(gòu)流程 光源樣品池激發(fā)單色器檢測器數(shù)據(jù)處理儀器控制發(fā)射單色器斬波器（磷光鏡）利用熒光和磷光發(fā)射利用熒光和磷光發(fā)射壽命的差別壽命的差別通常情況下，樣品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶內(nèi)，通常情況下，樣品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶內(nèi)，來測定低溫磷光。來測定低溫磷光。15:42:002 2、定量方法定量方法 1 1、定量依據(jù)定量依據(jù) 2.1.4 定量分析方法定量分析方法15:42:001 1、定量依據(jù)定量依據(jù) 熒光強(qiáng)度熒

25、光強(qiáng)度 If 正比于正比于吸收的光強(qiáng)度吸收的光強(qiáng)度 Ia 和熒和熒光量子產(chǎn)率光量子產(chǎn)率 ：faII 001 10bCatIIII由朗伯由朗伯- -比耳定律得：比耳定律得：2.303001 101bCbCfIIIe 熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度 If ：2.1.4 定量分析方法定量分析方法15:42:00對于稀溶液，當(dāng)對于稀溶液，當(dāng) 2.303 bC 0.05時：時：02.303ffIIbC If -熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度I0 -入射光強(qiáng)度入射光強(qiáng)度f -熒光量子產(chǎn)率熒光量子產(chǎn)率b - 吸收光程吸收光程 - 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)C - 物質(zhì)濃度物質(zhì)濃度fIKC2.1.4 定量分析方法定量分析方法15:42:0

26、02 2、定量方法定量方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法：FCsFxCx2.1.4 定量分析方法定量分析方法15:42:00A A 無機(jī)化合物的熒光分析無機(jī)化合物的熒光分析如如MgMg、AlAl、CaCa等，本身不發(fā)射熒光，但與有機(jī)試劑可形成等，本身不發(fā)射熒光，但與有機(jī)試劑可形成熒光配合物進(jìn)行定量測定；熒光配合物進(jìn)行定量測定； 直接法直接法：如：如8-8-羥基喹啉與羥基喹啉與AlAl離子反應(yīng)生成熒光配合物離子反應(yīng)生成熒光配合物 安息香，安息香，水楊醛縮鄰氨基苯酚，黃酮醇，水楊醛縮鄰氨基苯酚，黃酮醇， 二苯乙醇酮二苯乙醇酮 2.1.5 熒光分析測定方法、特點(diǎn)和應(yīng)熒光分析測定方法、特點(diǎn)和應(yīng)用用15:42:00熒光熄滅法15:42:00B B 有機(jī)化合物的熒光分析有機(jī)化合物的熒光分析本身發(fā)射熒光的，如羅丹明本身發(fā)射熒光的，如羅丹明B B、熒光素等可直接測定；、熒光素等可直接測定；不發(fā)射熒光的物質(zhì)可經(jīng)過處理后成為發(fā)射熒光的物質(zhì)進(jìn)行不發(fā)射熒光的物質(zhì)可經(jīng)過處理后成為發(fā)射熒光的物質(zhì)進(jìn)行測定；測定；15:42:00C C：蛋白質(zhì)的熒光分：蛋白質(zhì)的熒光分析析1. 蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)，有的氨基酸自身可以發(fā)熒光，