藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文1

1、分類 藥植與鑒定 年 級 2007級 瀉下藥番瀉葉中番瀉苷a和番瀉苷b的含量測定指 導(dǎo) 教 師： 申請學(xué)位級別：學(xué) 士 專業(yè)名稱： 藥學(xué)論文提交時間： 2011 年5 月 論文答辯時間： 2011年 6 月學(xué)位授予單位： 答辯委員會主席： 評閱人： 2011年 5 月目 錄中文目錄3英文目錄4前 言4一.瀉下藥4二.番瀉葉5三.番瀉苷a和番瀉苷b7實驗部分11一.實驗儀器與試劑11二 實驗方法與結(jié)果11三.結(jié)果與討論16參考文獻.17致 謝18番瀉葉中番瀉苷a與番瀉苷b的含量測定考察中文摘要目的：建立hplc測定番瀉總苷提取物中番瀉苷a和番瀉苷b的含量的方法。方法：采用hypersil ods

2、 c18柱(250 mm4.6 mm，5m)，以乙腈01三氟乙酸的水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測波長為340nm。結(jié)果：番瀉苷a在02188g到10940g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=1000 0)，番瀉苷b在0262g到1310g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=09999)。結(jié)論：采用hplc直接測定番瀉葉中番瀉苷a和番瀉苷b的含量，方法簡單快捷，精密度高、穩(wěn)定性好，加樣回收率高，結(jié)果可靠，可作為番瀉總苷提取物質(zhì)控制的方法。關(guān)鍵詞：hplc 瀉下藥 番瀉苷a 番瀉苷bcontent determination of sennoside a and sennoside b in senna le

3、af by hplcyang keabstract objective： because determining total sennoside by uv is very complex and noteasier to bedone for the operationto establish a hplc method for deteming sennoside a and sennoside b in folium sennae extractmethods：a hypersil ods c18 (250 mm4.6 mm，5m) was usedthe mobile phase wa

4、s can-0.1 trinuomacetic acid，detection wavelength of sennoside a and sennoside b were set up at a1=340nmresults：the linear range of sennoside a concentration was from 02188g to 10940 g(r=1000 0)，then linear range of sennoside b concentration was from 0262g to 1310g(r=0999 9)conclusion：the methed is

5、simple high accuracy, good stability, add kind high efficiency and convenient accurate with a good replloducibility and can be used for determination of sennoside a and sennoside b in leaf of cassia anguscifolia vahl.conclusion：the method is dependable accurate and easykey words: hplc：purging doped；

6、sennoside a & sennoside b前 言一. 瀉下藥凡是能夠攻積、逐水，引起腹瀉，或潤腸通便的藥物，便稱為瀉下藥。主要用于里實的癥候，它的主要功能與用途，大致可以分為以下三點：一為通利大便，以排除腸道內(nèi)的宿食積滯或燥屎；一為清熱瀉火，使實熱壅滯通過瀉下從而解除；一為逐水退腫，使水邪隨著大小便排出，從而達到驅(qū)除停飲、消退水腫的目的。瀉下藥根據(jù)其瀉下作用的強度，可以分為潤下藥、攻下藥和峻下逐水藥三大類，其中后者作用最強，攻下藥次之，潤下藥則比較緩和。凡屬宿食停積，腹部脹滿，大便燥結(jié)所致的里實證，應(yīng)當(dāng)選擇攻下藥主之，并配伍以行氣類藥，來幫助排便，如三承氣湯。根據(jù)近代研究瀉下藥類藥物主

7、要具有下列藥理作用：1.瀉下作用：此類藥物雖然成分有別，但都有比較明顯的瀉下作用，都可以通過不同的作用機理來刺激胃腸道粘膜從而使腸蠕動增加而致瀉。例如芒硝因含硫酸鈉，在腸內(nèi)不容易被吸收，從而致使腸內(nèi)滲透壓升高，大量的水分保留在腸腔，使腸容積變大，腸管擴張，機械性的刺激腸壁從而引起腸道蠕動增加而致瀉；牽牛子固含牽牛子甙，在腸液里面分解出牽牛子素刺激腸壁，使腸液的分泌增多并使之蠕動增強而致瀉；芫花中的芫花素刺激腸壁便能夠引起劇烈的水瀉；火麻仁則是因為含有脂肪油可以潤滑腸道，加之脂肪油在堿性腸液里面可以產(chǎn)生脂肪酸刺激腸壁使蠕動增加，促進排便。 2.利尿作用：芫花、大戟和大黃都有一定利尿的作用。大鼠灌

8、喂芫花煎劑可以使大鼠的尿量增加；麻醉犬靜脈滴注芫花煎劑，尿量亦可明顯的增加，大戟對大鼠的實驗性腹水模型也有明顯的利尿作用。 3.利膽作用：大黃有著清化濕熱，消退黃疽的功能。通過實驗證明，大黃能夠促進膽汁的分泌，其以復(fù)方作用最為突出，如茵陳蒿湯、膽道排石湯等。 4.抗感染作用：甘遂、芫花、大戟和大黃對革蘭氏陰性、陽性菌里面的多種細(xì)菌都有效，并且對某些病毒、真菌以及有些致病性原蟲也都有抑制作用。二. 番瀉葉番瀉葉是一種全世界都比較廣泛應(yīng)用的導(dǎo)瀉劑，它在國外的應(yīng)用歷史已經(jīng)有千余年的歷史。近年來番瀉的果實也被用作導(dǎo)瀉劑的研究開發(fā)以及應(yīng)用，例如德國kattwiga制造的番瀉緩瀉片(laxherba s)

9、，每片里面含有尖葉番瀉葉alex andrian senna果干浸膏47mg-67mg，約相當(dāng)于10mg番瀉苷b，把其作為緩瀉藥應(yīng)用于臨床。德國madaus制藥廠上市的一種腸溶性導(dǎo)腸粒（agiolax）（口服，不應(yīng)嚼碎），是由車前子和番瀉果苷組成，它用來調(diào)整婦女產(chǎn)后腸道的功能以及治療術(shù)后患者、老年人因腸肌力下降引起的便秘1。番瀉葉中的番瀉苷就是瀉下藥中的一種。番瀉葉是豆科植物狹葉番瀉cassiaangustifolia vahl或尖葉番瀉cassia acutifolia delile的干燥葉，收載于中國藥典2005年版一部，主要用于熱結(jié)積滯、便秘腹痛、水腫脹滿的治療，是臨床上最常用的瀉下藥之

10、一2。狹葉番瀉主要含有番瀉苷a、b、c、d等；尖葉番瀉主要含有番瀉苷a、b、c等。根據(jù)文獻報道，這些成分具有抗菌、致瀉、止血、松弛肌肉和解痙等很多種作用。本課題在前期實驗研究的基礎(chǔ)上采用比較方便，操作性強的高效液相色譜法（hplc）測定番瀉葉中番瀉苷a和番瀉苷b的含量，為瀉下藥的進一步研究、開發(fā)提供實驗參考。1.番瀉的分布：狹葉番瀉主要分布在熱帶非洲,我國的臺灣、廣西、云南都有引種和栽培。尖葉番瀉主要分布在埃及,我國的臺灣、海南、云南都有引種和栽培。2.番瀉葉的化學(xué)成分：狹葉番瀉葉主要含有番瀉甙（sennoside)a、b c、d，大黃酚（crysophanol)，大黃素（emodin)，大黃

11、素甲醚（physcion)，3-甲基-8-申氧基-2-乙?；?1，6-萘二酚-6-o-d-葡萄糖甙（tinnevellin glucoside)，小葉中含山奈酚（kaempferol)。尖葉番瀉葉主要含有番瀉甙a、b、c、d，大黃素，大黃素甲醚，大黃酚。嫩葉中含有山奈酚4。3.國內(nèi)外番瀉葉及其制劑的研究和應(yīng)用3.1 國外番瀉葉及其制劑的研究和應(yīng)用根據(jù)文獻對德國1991年上市應(yīng)用的98種導(dǎo)瀉劑進行統(tǒng)計的分析表明，含有番瀉葉和其有效成分番瀉苷的制劑大約占40%。日本最近研制出一種專利產(chǎn)品，將番瀉葉粉或番瀉苷、雙歧桿菌abs41凍干粉與適宜的輔料混合進行壓片，再用羥丙基甲基纖維素苯二甲酸鹽包衣制成的

12、腸溶片，作為瀉下劑，有高效作用。usp（第23版）中收載了番瀉葉流浸膏（senna fluidextract）、番瀉葉糖漿（senna syrup）、總番瀉苷片（sennosides tablets）。bp（1993年版）也收載了番瀉葉流浸膏、番瀉苷顆粒以及總番瀉苷片等制劑，主要用來清潔腸道和進行便秘的治療。martindale（第31版）明確了番瀉葉和其制劑的用法與用量。例如清潔腸道：在英國，成人單劑量口服總番瀉苷按照番瀉苷b計算為1mg/kg，大約72mg；在美國，按照總番瀉苷計算，大約大于158mg。治療便秘：在英國，口服總番瀉苷按照番瀉苷b計算，成人單劑量大約為15mg-30mg；6歲

13、以上兒童，劑量減半。3.2 國內(nèi)番瀉葉及其制劑的臨床和應(yīng)用將6mg-20mg番瀉葉用沸水浸泡然后飲用，臨床上主要用于泌尿系x線造影、腹部x線攝平片、乙狀結(jié)腸鏡等檢查前全腸排空，對比較小和多發(fā)病灶的觀察尤為清晰，同時還可以避免因為清潔灌腸引起的腸粘膜水腫和腸痙攣；還可以用于腹部手術(shù)患者作清潔腸道準(zhǔn)備，開腹后腸管完全空虛，無脹氣，無存便。對老年性及頑固性便秘、藥物性便秘等使用番瀉葉和其制劑大約3g-10g便可以發(fā)揮比較好的療效。20g-30g番瀉葉，單次開水浸泡飲用，觀察對婦產(chǎn)科大、中手術(shù)后腸功能恢復(fù)的效果，表明有促進腸功能恢復(fù)的作用。以上的文獻資料表明，番瀉葉和其制劑近年來在國內(nèi)、國外主要用作腹

14、部和腸道的各種影像檢查前或手術(shù)前腸道的清潔準(zhǔn)備；主要治療各種便秘特別是老年性及頑固性便秘；對腹部術(shù)后腸功能的恢復(fù)也有著促進的作用。服用有效劑量番瀉葉和其制劑具有安全、有效和不良反應(yīng)小等特性，但是大劑量和（或）長期濫用，卻會引起低血鉀、可能的腸粘膜損傷、可能的藥物敏感性降低等3。因此，番瀉葉和其制劑的用量以軟便排泄為度，短期用藥可以增強它的安全性以及有效性。三.番瀉苷a和番瀉苷b1.來源 番瀉苷a來源于豆科植物狹葉番瀉(cassia angutifolia vahl.)的莢。 番瀉苷b來源于豆科植物狹葉番瀉(cassia angutifolia vahl.)的莢，蓼科植物掌葉大黃(rheum p

15、almatum l.)的根莖。2.名稱、結(jié)構(gòu)和分子式番瀉苷a 英文名：sennoside a 分子量：739分子式c42h38o2cas號（化學(xué)物質(zhì)登錄號）:81-27-6番瀉甘a結(jié)構(gòu)式番瀉苷b英文名：sennoside b分子量: 862.739 分子式: c42h38o20cas號（化學(xué)物質(zhì)登錄號）：128-7-4番瀉苷b結(jié)構(gòu)式3.理化性質(zhì)番瀉苷a：為淡黃色結(jié)晶，熔點200240，旋光度-164(c=0.1，60%丙酮)，旋光度-24(c=0.2，70%二氧六環(huán))。不溶于水、苯、乙醚、氯仿，微溶于甲醇、二苷醇-乙醚、丙酮、二氧六環(huán)，溶于碳酸氫鈉水溶液。應(yīng)在2-8c，避光保存，長時間在暴露在

16、空氣中，含量會有所降低。番瀉苷b： 屬二蒽酮苷類，亮黃色棱柱狀結(jié)晶(稀丙酮)。良好的針狀結(jié)晶(水)。分解點180186，旋光度-100(c=0.2，70%丙酮)，旋光度-67(c=0.4，70%二氧六環(huán))。溶解度情況類似(但稍好于)番瀉苷a。4.作用番瀉葉甙具有清熱行滯,通便利水,排毒養(yǎng)顏的功能以及具有促進腸胃蠕動致瀉的作用。并且具一定得抗菌功能,臨床上可以用來治療急性胰腺炎、菌痢、流行性出血熱、膽囊炎、產(chǎn)后回乳等。也適用于藥品,保健品等領(lǐng)域。主要用于熱結(jié)積滯、便秘腹痛、水腫脹滿等的治療，是臨床上幾種最常用的瀉下藥物之一。番瀉甙在小腸里面可以有部分吸收，后來經(jīng)血流或膽汁進入大腸，但是主要則由小

17、腸直接進入大腸，在腸內(nèi)細(xì)菌作用下進行水解、還原等變化成為大黃酸蒽酮或大黃酸蒽酮-8-葡萄糖甙。由于直接注入，大黃酸蒽酮的瀉下作用不受影響，并且可發(fā)現(xiàn)腸內(nèi)大黃酸蒽酮的生成量明顯減少，因此認(rèn)為大黃酸蒽酮才是番瀉甙引起瀉下的真正成分。另一方面，翻轉(zhuǎn)小腸和結(jié)腸囊番瀉甙能夠阻止葡萄糖和na的跨腸壁轉(zhuǎn)運，表明抑制腸道對葡萄糖、鈉和水的吸收，增加腸腔內(nèi)容積繼而刺激腸壁反射性地使小腸和結(jié)腸蠕動增強，也可能是其致瀉的機制之一，并且小腸也是其瀉下成分的作用部位。5、測定方法測定番瀉葉中番瀉苷a(sennoside a)、番瀉苷b(sennoside b)的方法主要有分光光度法、薄層掃描法、高效毛細(xì)管電泳法、毛細(xì)管

18、區(qū)帶電泳法。2005年版中國藥典采用紫外分光光度法測定總番瀉苷，這種方法經(jīng)過提取、分離、水解等操作步驟，從而測得總番瀉苷的含量，這個方法整個過程需要避光操作，操作過程比較復(fù)雜繁瑣，而且操作條件要求苛刻。其他幾種測定方法操作流程也比較長，而且操作也比較繁瑣，條件較苛刻。因此本試驗采用hplc直接測定番瀉葉中番瀉苷a和番瀉苷b的含量，方法簡單快捷，精密度高、穩(wěn)定性好，加樣回收率高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以用作番瀉總苷提取物質(zhì)控制的方法4-5。實驗部分一. 實驗儀器與試劑1、 儀器：beckman 125型高效液相色譜儀。本系統(tǒng)由system gold 125溶劑輸送泵、system gold 166檢測

19、器（190360 nm）、rheodyne 7725i手動進樣閥、ht-330 柱溫箱、beckman色譜工作站、打印機等組成。re -52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀器廠)；電子分析天平bp121s（北京sartorius 天平有限公司）；uv1100型分光光度儀；2、 試劑番瀉葉于藥材市場采購，經(jīng)過鑒定為豆科植物狹葉番瀉cassiaangustifolia vahl的干燥葉。乙腈為色譜純（hplc級(fisher公司)磷酸為化學(xué)純（鄭州恒瑞化工有限公司）甲醇（天津四友公司）水為高純水二 實驗方法與結(jié)果1、對照品溶液和供試品溶液的制備1.1 對照品溶液的制備稱取經(jīng)過真空干燥12 h的番瀉

20、苷a與番瀉苷b對照品適量，進行精密的稱定，放置于10ml棕色量瓶中，加入50的甲醇進行溶解，并且定容至刻度，配制成含有番瀉苷a 1.50mg/ml和番瀉苷b 1.20mg/ml的混合溶液，搖勻，即可得到對照品溶液。1.2 供試品溶液的制備稱取干燥的藥材粉末大約1.0g，精密進行稱定，放置于具塞錐形瓶中，精密加入50的甲醇30 ml，稱取質(zhì)量，超聲處理35min(控制溫度在40以下)，放冷后稱取質(zhì)量，用50的甲醇補足減失的質(zhì)量，然后濾過，精密量取續(xù)濾液10ml放于25 ml量瓶中，用50的甲醇進行定容，用045m微孔濾膜濾過，即可得到供試品溶液。測定法：分別精密吸取上述溶液各4l，注入液相色譜儀

21、，測定，即得。2、 色譜條件【5】色譜柱：hypersil ods c18柱(250 mm4.6 mm，5m)；流動相：0.1%磷酸水溶液為流動相a，乙腈為流動相b；檢測波長：340nm；體積流量：1.0ml/min；柱溫:25；進樣量：4l；理論塔板數(shù)按番瀉苷b峰計算應(yīng)不低于4000，此條件下番瀉苷a、b與其它組分的分離度應(yīng)不低于2.0。見圖2.圖2.番瀉苷a、b對照品(a)和番瀉葉提取液(b)的hplc圖譜3、 線性關(guān)系考察 對照品儲備溶液的制備：精密稱取番瀉苷a的對照品10.85 mg，以40的乙醇制成每lml含有108.5g的對照品溶液；精密稱取番瀉苷b的對照品13.15mg，以30的

22、乙醇制成每lml含131.5g的對照品溶液。 分別精密移取番瀉苷a的對照品儲備溶液2、4、6、8、10ml，放置于l0ml的量瓶中，分別加40的乙醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的一系列番瀉苷a的對照品溶液，分別進樣5l，每個濃度進樣兩針。分別精密移取番瀉苷b的對照品儲備溶液2、4、6、8、10ml放置于10 ml的量瓶中，分別加30的乙醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的一系列番瀉苷b的對照品溶液，分別進樣5l，每個濃度進樣兩針。 經(jīng)回歸分析，得到番瀉苷a的回歸方程、相關(guān)系數(shù)為：a=802.85x-1.3862，=1.0000，線性范圍為：0.2165g1.0991g。經(jīng)回歸分析，得到番瀉苷b的回歸方

23、程、相關(guān)系數(shù)為：a=713.12x-15048，r=0.9999；線性范圍為：0.362g1.510g。4、 精密度試驗精密吸取對照品溶液5l，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果番瀉苷a和番瀉苷b的峰面積的rsd分別為125和116，結(jié)果表明所用儀器的精密度良好。見表2 表2 精密度實驗結(jié)果次數(shù)番瀉苷a峰面積值番瀉苷a峰面積均值rsd（%）番瀉苷b峰面積值番瀉苷b峰面積均值rsd（%）1408.6411.51.25228.3224.41.162411.6228.43417.0225.24410.4220.15402.9226.05、 穩(wěn)定性試驗按“1”中“1.2”項下制備供試品溶液，每隔2h精密吸

24、取5l注入高效液相色譜儀，測定樣品12h的穩(wěn)定性。番瀉苷a的峰面積rsd為040；番瀉苷b峰面積的rsd為040，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。6、 重現(xiàn)性試驗稱取同一批樣品，共5份，每份約1g，精密稱定，按“供試品溶液的制備”項下方法制備，然后進樣進行峰面積的測定。測定結(jié)果：番瀉苷a和番瀉苷b質(zhì)量分?jǐn)?shù)的rsd分別為1.22和1.56，結(jié)果表明該條件重現(xiàn)性好。見表3表3. 重現(xiàn)性試驗結(jié)果試驗次數(shù)番瀉苷a峰面積值番瀉苷a峰面積均值rsd（%）番瀉苷b峰面積值番瀉苷b峰面積均值rsd（%）1272.4274.61.22152.2149.61.562274.4152.23278.0150.04

25、273.6146.65268.6150.27、 加樣回收率試驗精密稱取已經(jīng)知道含量的樣品0.027g，平分為9份，精密稱定，放置于100 ml的量瓶中，分別按照樣品含量的80、100、120精密加入番瀉苷a、b對照品各3份，按照含量測定的方法下供試品溶液制備方法進行制備并進行檢測，計算番瀉苷a、b的回收率，結(jié)果見表4.5。表4. 番瀉苷a回收率試驗結(jié)果編號樣品含量（mg）番瀉苷a加入量（mg）測定量(mg)回收率（%）平均回收率（%）rsd （%）13.322.745.9897.1698.621.0623.362.786.1299.5933.382.746.0497.3243.363.486.

26、8499.9553.283.426.6698.8363.223.526.7299.9273.264.167.3698.4883.304.227.4497.9893.264.187.3698.32表5. 番瀉苷b回收率試驗結(jié)果編號樣品含量（mg）番瀉苷b加入量（mg）測定量(mg)回收率（%）平均回收率（%）rsd （%）110.348.7419.10100.27100.641.86210.428.9019.60103.10310.528.9419.3698.95410.4611.1221.68100.96510.2211.0821.40100.88610.0011.2421.66103.977

27、10.1613.1823.58100.25810.2613.7423.8498.85910.1613.6223.5898.57結(jié)果表明：該含量測定方法的加樣回收率較好。8、 樣品測定取10批藥材粉末各約1g，進行精密稱定，按照上述“二”項下“2”的色譜條件進行測定。測定結(jié)果見表6。表6. 10批藥材測定結(jié)果(n=2)藥材編號番瀉苷a(%)番瀉苷b(%)總量（%）10.9324.2825.21421.0042.8264.83030.7984.2245.02241.0063.8264.93251.1963.7524.94860.9103.8324.76270.9944.0225.01680.820

28、4.3785.19890.9343.9264.860100.7963.8824.678均值9.37038.95049.520三.結(jié)果與討論1. 提取溶劑的選擇 本次試驗采用了95ch3oh，70ch3oh，50ch3oh，50ch3ch2oh，1nahco。等作為提取溶劑進行超聲提取。結(jié)果表明：50ch3ch2oh和1nahco。提取效果最佳，但考慮到選擇的流動相為甲醇一磷酸系統(tǒng)，并且考慮到番瀉苷a、b在堿性條件下容易水解，所以最終選擇50ch3ch2oh作為提取溶劑。2. 檢測波長的選擇 精密稱番瀉苷a對照品9.98mg。用甲醇溶解制備成含番瀉苷a 0.998mg/ml的溶液，取番瀉苷b對照品儲備液0.73mg/ml。另