[H]--脫氧-D-葡萄糖攝取測定方法檢測心肌細胞對葡萄糖的攝取量

1、生理學報 Acta Physiologica Sinica, April 25, 2004, 56(2): 224-229 Received 2003-07-29 Accepted 2003-09-19 This work was supported by the National Basic Research Priorities Programme of Peoples Republic of China (No. G2000056906) and the National Natural Science Foundation of China (No.30070872). *Corres

2、ponding author. Tel: Fax: E-mail: zhangyy b-腎上腺素受體激動對新生大鼠心肌細胞代謝的影響 閆 潔, 陳 鍇, 徐 明, 呂志珍, 韓啟德, 張幼怡* 北京大學第三醫(yī)院血管醫(yī)學研究所, 分子心血管學教育部重點實驗室, 北京 100083 摘 要: 為了觀察b-腎上腺素受體 (b-AR) 持續(xù)激動對心肌細胞代謝的影響, 本工作以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞為研究對象, 采用3H-亮氨酸 (3H-leucine）摻入法和BCA蛋白分析法檢測心肌細胞的蛋白合成代謝與蛋白含量, 3H-2-脫氧-D-葡萄糖攝取測

3、定方法檢測心肌細胞對葡萄糖的攝取量, 并采用蛋白免疫印跡雜交方法檢測腺苷酸活化蛋白激酶 (adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK) 磷酸化程度。結果顯示, b-AR激動劑異丙腎上腺素 (isoproterenol, ISO) 持續(xù)刺激心肌細胞48 h, 心肌細胞3H-leucine摻入量和蛋白質含量與對照組相比均無顯著差異。用ISO或去甲腎上腺素(a1-AR特異性拮抗劑哌唑嗪存在下)持續(xù)激動b-AR 48 h, 心肌細胞的葡萄糖攝取量和AMPK磷酸化均顯著高于對照組。上述結果表明, b-AR持續(xù)激動對培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞蛋

4、白質合成及蛋白質含量沒有明顯的作用, 但可引起葡萄糖攝取量明顯增加和AMPK的激活, 提示b-AR可能與心肌肥厚過程中能量代謝狀態(tài)的變化有關。 關鍵詞: b-腎上腺素受體; 代謝; 心肌細胞; 腺苷酸活化蛋白激酶 中圖分類號: Q463 Effects of b-adrenoceptor activation on metabolism in neonatal rat cardiomyocytes YAN Jie, CHEN Kai, XU Ming, LU Zhi-Zhen, HAN Qi-De, ZHANG You-Yi* Institute of Vascular medicine, p

5、eking university third hospital and Key Laboratory of Molecular Cardiology, Education Ministry, beijing 100083, China Abstract: The aim of the present study was to investigate the effects of b-adrenergic receptor (b-AR) activation on metabolism in cultured neonatal rat cardiomyocytes. The protein sy

6、nthesis and total protein content of cardiomyocytes were determined by 3H-leucine incorporation and BCA protein content assay. Cardiomyocyte glucose uptake was measured by 3H-2-deoxy-D-glucose uptake analysis. Adenosine monophosphate activated protein kinase (AMPK) phosphorylation was detected by We

7、stern blot. The results showed that sustained stimulation with isoproterenol (ISO), a b-adrenoceptor agonist, had no effect on 3H-leucine incorporation and total protein content in cardiomyocytes. With b-AR activation by ISO or NE (pretreated with a selective blocker of the a1-adrenoceptor prazosin)

8、 for 48 h, both the glucose uptake and AMPK phosphorylation increased significantly compared with unstimulated cardiomyocytes. These results suggest that although sustained b-AR activation has no effect on cardiomyocyte protein metabolism, glucose uptake and AMPK activity are increased significantly

9、. The role of these b-AR activation-induced changes in cardiac hypertrophy remains to be further investigated. Key words: b-adrenergic receptor; metabolism; cardiomyocytes; AMPK 腎上腺素受體 (adrenergic receptor, AR) 介導的兒茶酚胺效應在心臟收縮功能、心肌細胞生長與凋亡 的調節(jié)中起著十分重要的作用1。分布在心臟中的AR主要為a1-AR和b-AR。b-AR在介導心臟功能中占主導地位，其激動后引起

10、正性變力、變時和增加舒張作用2。研究表明, b-AR亦參與了心肌肥厚的發(fā)生, 長期應用b-AR拮抗劑可以明顯減少心力衰竭病人的死亡率 3。Eichhorn等研究發(fā)現(xiàn), 給予充血性心力衰竭病人12周b1-AR拮抗劑美托洛爾治療后, 心肌組織的脂肪酸氧化明顯減少而乳酸的攝取和葡萄糖的氧 化明顯增強, 心臟功能明顯得到改善4。因此, b-AR持續(xù)激動所引起的代謝改變在心肌肥厚發(fā)展和轉歸過程中可能發(fā)揮著重要作用, 但其作用機制尚不清楚。 為此, 本實驗以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞為研究對象, 通過觀察心肌細胞3H-亮氨酸 (3H-leucine)摻入量及蛋白含量來反映心肌細胞蛋白代謝; 以心肌細胞對3H-

11、2-脫氧-D-葡萄糖(3H-2-deoxy-D-glucose, 3H-2DG) 攝取量反映其對葡萄糖的攝取情況; 并采用蛋白免疫印跡雜交方法觀察了對代謝有重要調控作用的腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK)活性的變化, 對b-AR持續(xù)激動引起的心肌細胞代謝改變進行了初步探討。 1 材料和方法 1.1 材料和試劑 去甲腎上腺素(norepinephrine，NE), 異丙腎上腺素(isoproterenol, ISO), 哌唑嗪 (prazosin,Praz), 普萘洛爾(propranolol, Pr

12、op), Hoechest33258,Anti-Sarcomeric a-actinin antibody均購自Sigma公司; 胰蛋白酶和DMEM購自Hyclone公司; 型膠原酶購自Worthington Biotechnology公司; 3H-leucine購自Amersham Biosciences公司；3H-2DG購自 Perkin Elmer Life Sciences公司；BCA protein assay reagent 購自Pierce Chemicals 公司；anti-phospho-AMPK-a抗體和anti-AMPK-a抗體購自Cell Signaling公司；辣根過

13、氧化物酶標記anti-rabbit及anti-mouse抗體購 自Santa Cruz Biotechnology公司；LumiGL(R)化學發(fā)光試劑盒購自New England Biolabs公司；PVDF膜購自Bio-Rad公司。 1.2 新生大鼠心肌細胞原代培養(yǎng) 取新生1-2 d SD大鼠 (北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部提供) 心室肌組織, 在含0.1%胰蛋白酶和80 U/ml型膠原酶的Hank抯液中進行消化, 8 min/次, 共8-10次。離心收集細胞, 加入含10% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液, 接種于100 mm2培養(yǎng)皿中, 在37、5% CO2培養(yǎng)1 h后, 用差速貼壁法除去非心

14、肌細胞, 將未貼壁的心肌細胞接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)液中加入100 mmol/L 5-溴脫氧尿嘧啶核苷以抑制非心肌細胞生長。心肌細胞培養(yǎng)48 h，更換為無血清DMEM培養(yǎng)液24 h后加藥處理。用免疫細胞化學方法對培養(yǎng)的心肌細胞進行純度鑒定。 1.3心肌細胞蛋白合成測定 采用Bogoyevitch等5報道的方法測定心肌細胞 3H-leucine摻入量來反映心肌細胞蛋白合成情況。無血清DMEM培養(yǎng)心肌細 胞24 h后, 分別加入100 nmol/L或1 mmol/L ISO、 10 mmol/L NE或先用AR拮抗劑孵育細胞30 min再加入NE, 培養(yǎng)心肌細胞48 h, 并提前6 h加入37

15、 kBq/ml 3H-leucine。以預冷的10%三氯乙酸于4固定 細胞30 min, 甲醇洗滌2次, 用1 ml裂解液(0.1 mol/L NaOH, 0.1% SDS)裂解細胞30 min, 將細胞裂解液加入到閃爍液中, 用液閃儀(美國Beckman公司)測定其dpm (disintegrations per minute) 值。 1.4 心肌細胞蛋白含量的測定 無血清條件下培養(yǎng)24 h后, 以100 nmol/L或1 mmol/L ISO分別刺激心肌細胞48 h, 1 ml 含0.25% (w/v) SDS的1SSC (standard sodium citrate)裂解細胞。BCA蛋

16、白分析方法測定心肌細胞總蛋白含量, 用Hoechest 33257染色法測定心肌細胞DNA含量6 。用總蛋白量/DNA表示心肌細胞蛋白含量, 以排除因細胞數(shù)量不同產生的差異。 1. 5 心肌細胞葡萄糖攝取的測定 根據(jù)Fischer等7的報道, 以心肌細胞對3H-2DG攝取量來反映其對葡萄糖的攝取情況。 無血清條件下培養(yǎng)24 h后換為低糖DMEM培養(yǎng)液, 以1 mmol/L ISO、 10 mmol/L NE分別刺激心肌細胞48 h, 或先用AR拮抗劑孵育細胞30 min, 然后加入NE, 在加入藥物同時加入37 kBq/ml 3H-2DG繼續(xù)培養(yǎng)48 h, 20 mmol/L細胞松弛素終止反應

17、。0.5 mol/L氫氧化鈉裂解細胞15 min后, 加入同體積0.5 mol/L鹽酸中和。用BCA法測定蛋白含量,用液閃儀測定加入閃爍液中細胞裂解液的dpm值。 不加任何激動劑只加入20 mmol/L細胞松弛素培養(yǎng)48 h測得的dpm值為心肌細胞非特異性結合的放射活性。 (心肌細胞總放射活性-非特異性結合的放射活性)蛋白含量即得出心肌細胞 3H-2DG攝取量。 1.6 蛋白質免疫印跡檢測 心肌細胞總蛋白提取: 無血清培養(yǎng)24 h后, 以1 mmol/L ISO、 10 mmol/L NE分別刺激心肌細胞48 h, 或先用AR拮抗劑孵育細胞30 min, 然后加入NE。每孔中加入200 ml細

18、胞裂解液裂解細胞10 min, 超聲處理后于4, 12000 g離心15 min, 取上清備用。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡雜交: 細胞裂解液(25 mg總蛋白量/泳道)經聚丙烯酰胺變性凝膠電泳（SDS-PAGE)分離蛋白后, 將蛋白轉移到PVDF膜上, 于TBST (5% BSA)室溫封閉1 h, 分別與一抗(anti-phospho-AMPK-a抗體, 抗體稀釋度為1:2000)和二抗(辣根過氧化物酶標記, 稀釋度1:4000) 室溫先后孵育2 h和1 h, 每次孵育完畢后用 TBST漂洗35 min。將膜與化學發(fā)光增強劑室溫孵育1 min后用X光膠片曝光顯影。此PVDF膜洗脫

19、后再用anti-AMPK- a抗體孵育, 重復上述二抗孵育、漂洗和顯影等步驟。對顯影條帶進行密度掃描定量。以AMPK- a亞基Thr172磷酸化(p-AMPK-a)的程度反映AMPK活性。將p-AMPK- a與AMPK-a的光密度比值表示AMPK-a磷酸化的程度。 1.7 統(tǒng)計學處理 以上實驗結果以meanSE表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用Prism 3.0軟件進行分析(Graphpad Software Inc.)。對照組與處理組之間的比較采用t檢驗或方差分析。 P0.05, n=4）;同樣條件下持續(xù)刺激心肌細胞48 h, 心肌細胞3H-leucine摻入量分別為253.215.1、273.117.5

20、dpm, 與對照組(257.114.9 dpm)相比無顯著差異(P0.05, n=4)(圖1A)。 用10 mmol/L AR非選擇性激動劑 NE持續(xù)刺激心肌細胞48 h, 心肌細胞3H-leucine摻入量較對照組明顯增加 (664.2106.4 dpm vs 235.916.5 dpm, P0.05, n=4) (圖1B)。 圖 1. b-AR激動對心肌細胞蛋白合成的影響 Fig. 1. Effect of b-AR on protein synthesis in neonatal rat cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium, c

21、ardiomyocytes were stimulated with 100 nmol/L or 1 mmol/L ISO for 24 h or 48 h (A), or pretreated with Praz for 30 min, then stimulated with NE (10 mmol/L) (B) for 48 h. 3H-leucine was added 6 h before harvest. The relative 3H-leucine incorporation of stimulated myocytes compared with that of unstim

22、ulated myocytes is shown as meanSE from four to five independent experiments. *P0.05, n=4)(圖2）。 圖 2. b-AR激動對心肌細胞蛋白含量的影響 Fig. 2. Effect of b-AR on protein content in neonatal rat cardiomyocytes . After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were exposed to 100 nmol/L or 1 mmol/L ISO for 48 h. Tota

23、l protein contents were measured by use of the BCA protein assay reagent and corrected by DNA contents. Data were normalized by mean of nonstimulated control. Each data represents meanSE from four independent experiments. 2. 3 b-AR激動對心肌細胞葡萄糖攝取的影響 1 mmol/L ISO持續(xù)刺激心肌細胞48 h可使心肌細胞對葡萄糖的攝取量明顯增加, 較對照組增加7.1

24、2.5倍(554. 6177.5 dpm/mg vs 79.94.9 dpm/mg, P0.001, n=3)(圖3A）。用Praz預處理心肌細胞30 min, 再給予10 mmol/L NE刺激48 h, 心肌細胞葡萄糖攝取量亦顯著高于對照組(530.522.2 dpm/mg vs 84.33.5 dpm/mg, P0.05, n=3)。 圖 3. b-AR激動對心肌細胞葡萄糖攝取的影響Fig. 3. Effect of b-AR on glucose uptake in neonatal rat cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium

25、, cardiomyocytes were stimulated with 1 mmol/L ISO (A); or pretreated with Praz or Praz plus Prop for 30 min, then stimulated with 10 mmol/L NE (B) in the presence of 37 kBq/ml 3H-2DG for 48 h. Data were normalized by mean of nonstimulated control. Each data represents meanSE from three independent

26、experiments. *P0.001 vs control. 2.4 b-AR激動對心肌細胞AMPK磷酸化的影響 1 mmol/L ISO刺激心肌細胞48 h使AMPK磷酸化程度較對照組增加6.21.7倍 (P0.05, n=3)(圖4A)。用Praz預處理心肌細胞30 min, 再給予NE刺激48 h, 心肌細胞AMPK磷酸化程度亦顯著高于對照組4.11.4倍(P0.05, n=3); 而同時用Praz及Prop預處理后, 再給予NE刺激, 心肌細胞AMPK磷酸化程度與對照組相比則無顯著差異(圖4B)。 圖 4. b-AR激動對心肌細胞AMPK磷酸化程度的影響Fig. 4. Effect

27、 of b-AR on AMPK phosphorylation in neonatal rat cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were stimulated with ISO 1 mmol/L (A) or pretreated with Praz or Praz plus Prop for 30 min, then stimulated with NE 10 mmol/L for 48 h (B). The upper in each panel shows the representativ

28、e Western blot. The lower shows the average data from three independent experiments. *P0.05, *P0.01 vs control. 3 討論 當機體處于應激狀態(tài)時, 交感-兒茶酚胺系統(tǒng)被激活, 血中腎上腺素和去甲腎上腺素濃度增高, 通過AR實現(xiàn)心血管系統(tǒng)功能和代謝狀態(tài)的調節(jié), 以適應機體應激的需要8。已知b-AR激動可介導心臟的正性變 力和正性變時效應2。但是了解b-AR長期激動對心 肌細胞能量代謝的影響, 對全面認識b-AR在調節(jié)心臟功能中的作用具有重要意義。為此, 本實驗以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞為模

29、型, 觀察了b-AR激動48 h后心肌細胞的蛋白質合成速率、葡萄糖攝取量和AMPK活性的變化, 初步分析了b-AR持續(xù)激動對新生大鼠心肌細胞代謝的影響及其機制。 實驗首先觀察了b-AR激動對心肌細胞蛋白質合 成速率及蛋白含量的影響。結果顯示, b-AR特異性激動劑ISO (100 nmol/L或1 mmol/L)或先用a1-AR特異性拮抗劑Praz預處理心肌細胞30 min后, 再給予10 mmol/L NE, 即在僅持續(xù)激動b-AR 24 h和 48 h的條件下, 心肌細胞3H-leucine摻入量均無顯著變化。此外, ISO持續(xù)刺激也不能引起心肌細胞蛋白含量增加?？梢奲-AR激動對新生大鼠

30、心肌細胞蛋白合成和蛋白 含量并無明顯作用, 說明單獨激動b-AR不影響培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞蛋白質的代謝。這一實驗結果與 Simpson等人9的報道相同, 他們的研究認為, 新生大鼠心肌細胞的蛋白合成主要是由a1-AR介導的, 而b-AR并不參與。從我們的結果也可以看出, 當用a1-和b-AR非選擇性激動劑 NE持續(xù)刺激心肌細胞時, 心肌細胞3H-leucine摻入量明顯增加。當先用a1-AR特異性拮抗劑Praz預處理心肌細胞以阻斷a1-AR, 再給予10 mmol/L NE刺激即僅激動b-AR的情況下, 心肌細胞3H-leucine摻入量并無明顯增加。說明在交感- 兒茶酚胺系統(tǒng)促進新生大鼠心

31、肌細胞蛋白合成過程中a 1-AR的激動是占主導地位的, 而b-AR的獨立作用不明顯。但這一結果并不能否定b-AR在心肌肥厚發(fā)生 過程中的作用。我們以前的研究也表明, 盡管b-AR單獨激動時, 對心肌細胞蛋白合成無直接的作用, 但當b-AR與a1-AR同時激動時, b-AR對a1-AR引起的心肌細胞蛋白合成有明顯的正協(xié)同作用(結果待發(fā) 表)。目前對a1-AR和b-AR在心肌肥厚發(fā)生過程中 的作用還存在爭議。Simpson及Knowlton等9,10 研究發(fā)現(xiàn), NE引起的新生大鼠心肌細胞肥大反應主要由a1-AR介導, Gq及MAPK途徑激活在其中起重要作用; Pinson等11認為a1-AR與b

32、-AR共同介導了成年大鼠 心肌細胞肥大反應; 在對整體動物心肌肥厚的研究表明, 長期輸注b-AR激動劑可導致明顯的心肌肥厚和心力衰竭12。我們的實驗對象是離體培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞, 與成年大鼠及在體心臟的情況可能有所不同, 這也是本研究的局限性所在。 用1 mmol/L ISO持續(xù)激動心肌細胞b-AR 48 h, 心肌細胞對葡萄糖的攝取量明顯增加, AMPK活性明顯增高。同樣, 用Praz預處理心肌細胞阻斷a1-AR后,再用10 mmol/L NE激動b-AR, 心肌細胞葡萄糖攝取量及AMPK活性亦顯著高于對照組。正常心肌組織 的代謝速率極其迅速, 60%-90%的ATP由脂肪酸在線粒體中的

33、b-氧化所產生, 10%-40%ATP由來自于葡萄糖及乳酸的丙酮酸氧化產生。與正常心肌相似, 肥厚心肌也是以脂肪酸尤其是長鏈脂肪酸如油酸和軟脂酸為主要能量來源。但心肌肥厚過程中, 存在心肌能量和代謝的改變, 表現(xiàn)為對長鏈脂肪酸的氧化明顯減少, 而對外源性葡萄糖的攝取和酵解加快。糖攝取和酵解的加快對脂肪酸氧化的降低有一定的代償意義13,14。臨床研究顯示, 通過增加葡萄糖的攝取或刺激葡萄糖的氧化, 或通過抑制脂肪酸的氧化改善心肌能量代謝對肥厚心肌功能的維持有重要意義15,16, 但其確切機制并不清楚。本研究結果發(fā)現(xiàn), b-AR持續(xù)激動使心肌細胞對葡萄糖的攝取明顯增加。已知葡萄糖攝取入 細胞的過程

34、是其被氧化利用的限速步驟, 并且我們采用的實驗方法是觀察在一定時間內心肌細胞對葡萄糖 攝取量的變化, 因此, b-AR持續(xù)激動對心肌細胞攝取葡萄糖的量、速度及其利用都可能存在促進作用。 提示b-AR與心肌肥厚發(fā)生發(fā)展過程中能量代謝狀態(tài)的改變有關。 AMPK是一種重要的代謝應激蛋白激酶。它是由 a、b、g三個亞基構成的異三聚體, 其中a為催化亞基, b和g為調節(jié)亞基。心臟中主要表達a1、a 2及b2、g1、g2 亞型。研究表明, 在細胞能量供求發(fā)生改變時, AMPK作為細胞內的能量感受器, 主要通過增加心肌細胞葡萄糖轉運體 (glucose transporters , GLUT)的轉位來促進葡

35、萄糖的攝取,并通過磷酸化乙酰CoA羧化酶而減少丙二酰CoA的生成, 進一步解除其對肉堿脂酰轉移酶的抑制, 使脂肪酸氧化加速17,18。本實驗中, b-AR持續(xù)激動引起心肌細胞對葡萄糖攝取的增加的同時AMPK的活性也明顯增強, 提示AMPK可能參與了對心肌細胞葡萄糖代謝的調控。 綜上所述, 本工作證實了在培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞b-AR激動對蛋白合成及蛋白含量等蛋白代謝的 作用不顯著, 首次觀察到b-AR持續(xù)激動時心肌細胞的葡萄糖攝取量及AMPK活性的增加, 提示b-AR參與了心肌肥厚發(fā)生發(fā)展過程中能量代謝狀態(tài)的改變。 然而b-AR激動時對心肌細胞脂肪酸代謝有無作用以及AMPK調節(jié)代謝的確切機制還

36、有待進一步研究。 參考文獻 1 Koch WJ, Lefkowitz RJ, Rockman HA. Functional consequences of altering myocardial adrenergic receptor signaling. Annu Rev Physiol 2000;62:237-260. 2 Dzimiri N. Regulation of b-adrenoceptor signaling in cardiac function and disease. Pharmacol Rev 1999;51(3):465-501. 3 Barry WH, Gilber

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49、測量，頸部部淋巴結檢查，肺底移動度，脾觸診，Brudzinski征。基本操作，腹穿。第三站：正常心電圖，右側氣胸。2號題病史采集：發(fā)熱，右頸部包塊病例分析：腹股溝斜疝，腸梗阻操作：皮膚彈性及水腫檢查，心臟叩診，腹部體表標志及四分法，吸痰 上機：肝癌，三度房室傳導阻滯等3號題第一站：病史采集：呼吸困難 病例分析：子宮肌瘤 節(jié)育環(huán)4號題病史采集：反復發(fā)作喘息，加重；病例分析是：乳腺囊性增生（鑒別診斷：乳腺癌、乳房纖維腺瘤，進一步檢查：B超、乳腺鉬靶、腫物穿刺活檢；治療原則：戴胸罩、服用逍遙散等中藥、脹痛嚴重時可考慮在月經前10天服用甲基睪丸酮）1、病史采集:患者女，歲，發(fā)熱，咳嗽，咳痰天入院。 、

50、病案分析：男性患者，車渦傷，右下肢活動完全受限，股骨中段腫大，有骨擦感，神清（大體是這樣，好多記不得了） 第二站：測呼吸（邊講邊做），聽肺部，視腹部（邊做邊講），肩甲角體位，胃手術的消毒范圍（邊做邊講，問這個手術是否要備皮） 后面問（生命體征？）5號題病史采集 咳嗽 咳痰 病例分析 前列腺肥大操作 穿手術衣 腋窩淋巴結的觸診。誰有第三站的 麻煩補充6號題 咯血 水痘7 號題第一站；病史采集是關于一個下肢水腫10天來就診的病人，既往有冠心病史。病案分析為一個59歲的女患者，大便后肛門有腫物脫出，伴有便血，腫物可手法幫助復位，血常規(guī)陰性8號題體檢：甲狀腺觸診單手肝臟觸診膝反射操作：左前臂外傷10小

51、時后清創(chuàng)縫合病史采集:胸骨疼痛3年，2小時再發(fā)。冠心病病例分析：內痣伴出血，脫垂9號題1、病史采集:患者女，歲，發(fā)熱，咳嗽，咳痰天入院。 、病案分析：男性患者，車渦傷，右下肢活動完全受限，股骨中段腫大，有骨擦感，神清（大體是這樣，好多記不得了） 2 u第二站：測呼吸（邊講邊做），聽肺部，視腹部（邊做邊講），肩甲角體位，胃手術的消毒范圍（邊做邊講，問這個手術是否要備皮）后面問（生命體征？）病史采集：反復發(fā)作喘息，加重 ；病例分析是：乳腺囊性增生（鑒別診斷：乳腺癌、乳房纖維腺瘤，進一步檢查：B超、乳腺鉬靶、腫物穿刺活檢；治療原則：戴胸罩、服用逍遙散等中藥、脹痛嚴重時可考慮在月經前10天服用甲基睪丸

52、酮10號題第一站病史詢問題號10號，題目是活動后氣短一個月，加重一周。高血壓病史10年。病例分析是35號，急性腸梗阻第二站體格檢查是68號，題目是肺下界移動度的叩診，肋脊角腎區(qū)扣痛，巴賓氏基征陽性的檢查操作時胸外心臟按壓第三站肺的呼吸音，心電圖有正常心電圖，x片一個股骨頸骨折，一個是腸梗阻，CT是腦出血11號題病史 是女性26歲 低熱盜汗 腹瀉2月病例分析是65歲病人，5年反復左胸前區(qū)疼痛，加重8小時,既往發(fā)作服用硝酸甘油可緩解今次不能緩解血壓高既往多在150-180、90 110之間操作是48和1 內容是頸部淺表淋巴結檢查和闌尾炎手術的消毒,體格還有個膀胱12號采集是腹痛，黑便，消瘦病歷分析

53、是結核性胸膜炎體格檢查胸部視診問題是胸骨角對的第2肋間腦膜刺激征問題是浮髕實驗的意義操作是背部脂肪瘤的切除問題是頭頸、四肢扯線時間14號題病史采集：上腹痛，嘔吐, ep! U( J# b2 Y& O病例分析：COPD15號題病史采集是腹痛，嘔血，黑便。病例分析是過敏性鼻炎和支氣管哮喘16號題：采集：上腹痛5年，加重伴嘔吐2天。病例分析：胸痛7天，加重4小時。診斷應該是心梗。感覺時間比較緊，后面的進一步檢查和治療都是瞬間寫的，肯定丟分不少，虧啊！第三站心肺聽診：奔馬律、右下方呼吸音減弱；X線：左肺炎（左胸悶、氣喘n天，忘記了）、股骨骨折；CT（飽食后惡心、嘔吐2年）：肝癌；心電圖：心梗、另一題好

54、像錯了，選了左束支傳導阻滯；醫(yī)德醫(yī)風：A。得了18分17號題號題采集：上腹痛5年，加重伴嘔吐2天。18號題病史采集。女17歲，腹痛，腹瀉，嘔吐。病例分析肺心病，心功能2級，心衰。慢性扁桃體炎（還有關節(jié)疼痛，懷疑風心?。w格檢查，乳房觸診，直腸指診，肋脊角扣診C、脊肋角叩擊痛操作（5分）被檢查者體位、肋脊點選擇正確（2分）?囑檢查者采取坐位或側臥位（1分），肋脊點選擇正確：第十二肋與脊柱夾角的頂點（1分）。?叩擊操作正確（3分）。檢查者用左手掌平放在被檢查者脊肋角處，右手握拳，用由輕到中等的力量叩擊左手背（1分），每叩1-2下，停一停，重復2-3次，同時問被檢查者感覺（1分），兩側均叩，進行對比

55、（1分）。D、檢查結束，愛傷意識。（1分）態(tài)度、語言（告知）、動作技能操作救護車，上臂開放性骨折，無進行性出血。三角巾固定考官提問 1胸骨角的臨床意義?胸骨角位于胸骨柄、體交界處，兩側與第二肋軟骨相連,是臨床胸部計算肋骨的標準之一2如果患者腹部發(fā)現(xiàn)條形物 考慮哪些疾病19號題，病史采集：肝硬化腹水病例分析：急性乳腺炎操作：穿脫手術服帶無菌手套體檢：心臟的聽診，膝關節(jié)和小腿的檢查，問了浮髕試驗？3站：考了腦梗！正常心電圖，三度房室傳導阻滯，20號題：1、筆試：病例分析：乳腺囊性增生2、操作：穿手術衣、乳腺觸診、腹部觸診：反跳痛、緊張度等上機拿了19分，最后一道是抗生素的，錯了21號題，體格檢查：脾觸診，問題：腫大分幾度：輕度腫大（肋下小于2cm），中度腫大（不過臍），重度腫大（過臍或腹中線）、技能操作前臂清創(chuàng)術，問題：為什么先清創(chuàng)后縫合22號題病史采集：腹瀉便血病例分析：