治療心血管疾病有效方劑組分配伍規(guī)律研究

1、項目名稱：治療心血管疾病有效方劑組分配伍規(guī)律研究首席科學(xué)家：起止年限：2012.1-2016.8依托部門：國家中醫(yī)藥管理局 天津市科委一、關(guān)鍵科學(xué)問題及研究內(nèi)容1. 關(guān)鍵科學(xué)問題本項目選擇臨床有效方劑，研究組分配伍與藥物間相互作用及應(yīng)用規(guī)律，闡述君臣佐使、七情和合等配伍規(guī)律的科學(xué)內(nèi)涵，構(gòu)建創(chuàng)新中藥研制的理論基礎(chǔ)和技術(shù)方法學(xué)，擬解決以下關(guān)鍵科學(xué)問題：1.1 建立和完善組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，明確技術(shù)特點利用文獻分析、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)等研究手段，建立和完善組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，明確組分配伍應(yīng)用規(guī)律及機制。1.2 方劑組分配伍體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)和藥代動力學(xué)過程特征及相互作用揭示方劑組分及體內(nèi)過程特征、

2、成分間相互作用及相關(guān)調(diào)控機制，探索方劑不同成分在作用靶點的動力學(xué)特征。1.3 方劑組分配伍作用規(guī)律及網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制從多靶點多途徑（藥效）和多環(huán)節(jié)（藥代和毒理）角度闡明方劑的有效性和安全性，發(fā)現(xiàn)針對復(fù)雜性疾病治療的方劑整合調(diào)節(jié)作用機制。圍繞上述關(guān)鍵科學(xué)問題，建立項目科研假說：方劑的核心是配伍。以藥效物質(zhì)、作用機理相對清楚的中藥組分為基礎(chǔ)，遵從突出主效應(yīng)，兼顧次效應(yīng)，降低副效應(yīng)的效應(yīng)配伍策略，采用配伍優(yōu)選設(shè)計方法，可以研制出針對具體病癥，具有接近綜合最優(yōu)效應(yīng)的現(xiàn)代中藥。從組分間相互作用入手，解讀多組分與多效應(yīng)的相關(guān)性，通過減毒增效作用、組分體內(nèi)過程、網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制各層次研究，可以揭示組分配伍整合效應(yīng)機

3、制，詮釋配伍七情和合理論的科學(xué)內(nèi)涵。2. 主要研究內(nèi)容本項目圍繞上述關(guān)鍵科學(xué)問題，以復(fù)方丹參方、芪參益氣方、參麥方、參附方、苦碟子注射液、血栓通注射液等臨床有效的方劑為研究對象，針對“藥性”、“君臣佐使”、“七情和合”、“效應(yīng)配伍”等方劑配伍理論的核心問題，從多靶點多途徑（藥效）和多環(huán)節(jié)（藥代毒理）的角度研究具有行氣活血、益氣活血、滋陰益氣、溫陽補氣、清熱活血功效的不同藥物組分配伍的科學(xué)性和有效性，揭示配伍對多靶點及多途徑作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系和特征模式，揭示中藥多組分復(fù)雜作用機制，構(gòu)建中藥組分配伍的理論基礎(chǔ)和技術(shù)方法學(xué)，詮釋方劑配伍規(guī)律及科學(xué)內(nèi)涵，為中藥新藥創(chuàng)制提供理論和技術(shù)支撐，為制訂組分中藥注冊標(biāo)

4、準提供科學(xué)依據(jù)。擬開展以下六方面研究：2.1 組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)及應(yīng)用規(guī)律研究以古今文獻案例方劑配伍挖掘為切入點，梳理、傳承、發(fā)揚方劑配伍理論。建立和完善基于效應(yīng)的組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，明確組分配伍的特點和應(yīng)用規(guī)律，開展組分配伍與飲片配伍相關(guān)性文獻研究。采用循證醫(yī)學(xué)方法，以治療心血管疾病療效確切的代表性方劑為對象，系統(tǒng)評價現(xiàn)代中藥配伍的發(fā)展特點和應(yīng)用規(guī)律，豐富方劑配伍理論，為組分中藥研發(fā)提供新思路和新方法，為制定組分中藥評審注冊辦法相關(guān)要求提供科學(xué)基礎(chǔ)。2.2 組分配伍減毒增效機制研究選擇參附方、參麥方等代表性方劑，通過計算毒理學(xué)與實驗結(jié)合的方式，比較研究組分配伍與飲片配伍方劑藥效物質(zhì)及毒

5、性成分對P450酶的作用（包括誘導(dǎo)、抑制及P450酶參與其代謝），研究建立基于P450酶系統(tǒng)的方劑組分配伍研究技術(shù)體系，闡明方劑多成分相互作用在P450酶系統(tǒng)的具體表現(xiàn)及減毒增效配伍規(guī)律，揭示參附方組分配伍的作用機制，為臨床合理用藥及新藥處方提供科學(xué)依據(jù)，探索建立含有毒中藥的組分中藥劑量安全窗及安全性評價的相關(guān)要求。2.3 組分配伍體內(nèi)藥代動力學(xué)研究重點圍繞復(fù)方丹參方、參麥方、參附方等有效方劑，揭示在全方復(fù)雜物質(zhì)背景下組分配伍與飲片配伍藥效活性成分的體內(nèi)暴露特征和調(diào)控機制，尋找方劑中能夠影響成分暴露調(diào)控環(huán)節(jié)的物質(zhì)，進而發(fā)現(xiàn)該方劑配伍的藥代動力學(xué)作用機制和條件，為進一步認識復(fù)方丹參方等的藥效物質(zhì)

6、基礎(chǔ)、配伍作用原理、促進臨床合理用藥和新產(chǎn)品研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。探索并建立中藥的“多組分”和“復(fù)雜物質(zhì)背景”藥代動力學(xué)研究方法，并使其與前期研究已經(jīng)建立的中藥“多成分體系”藥代動力學(xué)研究模式和方法相結(jié)合，構(gòu)成一套系統(tǒng)完整的中藥藥代動學(xué)研究方法，并制定組分中藥注冊藥代動力學(xué)相關(guān)技術(shù)要求的建議。2.4 多組分、多靶點相互作用研究在復(fù)雜性疾病治療的背景下，針對心血管疾病發(fā)生后所涉及的血小板、血管、脂代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌等重要病理環(huán)節(jié)，利用整合分子靶標(biāo)和細胞表型雙重篩選技術(shù)等現(xiàn)代生物技術(shù)手段研究藥物組分對離體、在體疾病模型的影響，系統(tǒng)研究補陰、補陽、益氣、溫陽、活血中藥組分的藥效，分析不同組分及配伍對主要靶

7、點的作用及機制，以及組分間相互作用特點，研究組分配伍協(xié)同增效、拮抗減毒的作用規(guī)律，詮釋 “七情和合”配伍理論科學(xué)內(nèi)涵，為創(chuàng)制多組分中藥提供依據(jù)，為制定組分中藥評審注冊中的藥效學(xué)、藥理學(xué)相關(guān)技術(shù)要求奠定基礎(chǔ)。2.5 組分配伍網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制研究選擇芪參益氣方、參麥方等臨床有效方劑，采用系統(tǒng)生物學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)等研究思路與技術(shù)手段，通過組學(xué)分析、DOCKING、網(wǎng)絡(luò)建模與實驗驗證等相結(jié)合的方法，研究發(fā)現(xiàn)方劑藥效成分，揭示方劑有效組分配伍后各組分間的復(fù)雜非線性交互作用，包括不同有效組分在多個靶點和通路上的協(xié)同作用機制（組-效關(guān)系），以及不同組分在疾病不同病理階段的協(xié)同作用機制（時-效關(guān)系），建立方劑多種藥

8、效物質(zhì)對疾病相關(guān)靶點和作用途徑的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控模型。進而研究基于網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的組分配伍優(yōu)化方法，為多組分藥物設(shè)計和現(xiàn)代中藥新藥創(chuàng)制提供新途徑，探索建立多組分中藥研發(fā)通用的配伍優(yōu)化方法，為多組分中藥評審注冊提供科學(xué)依據(jù)。2.6 組分配伍方藥臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究以腦梗死急性期為切入點，選擇清熱藥物苦碟子注射液、活血藥物血栓通注射液單用和共用為干預(yù)藥物，開展隨機對照臨床試驗、結(jié)合代謝組學(xué)、藥代動力學(xué)等開展對清熱活血藥物的前瞻性臨床療效評價研究，揭示清熱活血組分配伍的證效、量效、組效關(guān)系，深入探討組分配伍的臨床療效、內(nèi)在機制等科學(xué)內(nèi)涵，為多組分中藥的臨床評價新藥提供科學(xué)依據(jù)。二、預(yù)期目標(biāo)總體目標(biāo)：在傳統(tǒng)理論和臨床經(jīng)

9、驗指導(dǎo)下，以藥效物質(zhì)的體內(nèi)過程和多靶點多途徑調(diào)控機制為研究重點，結(jié)合臨床系統(tǒng)評價，開展代表性方劑的示范研究，從多個層次揭示方劑配伍規(guī)律及其科學(xué)內(nèi)涵，完善中藥組分配伍的理論基礎(chǔ)，為現(xiàn)代中藥創(chuàng)制提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)方法學(xué)。五年預(yù)期目標(biāo)：1理論創(chuàng)新及方法學(xué)研究：建立和完善基于效應(yīng)的組分配伍新方法；從藥物相互作用角度，建立現(xiàn)代中藥組分配伍理論和配伍網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，總結(jié)組分配伍應(yīng)用規(guī)律，揭示七情和合配伍理論的科學(xué)內(nèi)涵。2關(guān)鍵技術(shù)研究：建立中藥組分ADME/T屬性評價技術(shù)；建立基于多靶點生物效應(yīng)的組分配伍相互作用研究技術(shù)；建立基于代謝酶系統(tǒng)的方劑多成分相互作用評價技術(shù)；建立基于網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的多組分藥物配伍優(yōu)

10、化技術(shù)等，為多組分中藥研制及其注冊標(biāo)準制訂提供技術(shù)支撐和科學(xué)依據(jù)。3人才培養(yǎng)：培養(yǎng)一批高水平中藥學(xué)科帶頭人，培養(yǎng)博士后、博士研究生30名。4論文和專利：發(fā)表SCI收錄論文50篇以上，申報發(fā)明專利12項。出版專著1部。三、研究方案1總體思路方劑的核心是配伍，合理配伍可以使方劑產(chǎn)生“既能使藥各全其性，又能使藥各失其性”的變化，發(fā)揮最佳療效。因此，配伍規(guī)律研究是方劑現(xiàn)代研究的重要內(nèi)容之一，采用現(xiàn)代先進技術(shù)方法和研究手段，揭示方劑配伍規(guī)律的科學(xué)內(nèi)涵，是探索與發(fā)展傳統(tǒng)方劑配伍理論的重要途徑。本研究瞄準現(xiàn)代中藥創(chuàng)制的技術(shù)瓶頸，針對國家新藥創(chuàng)制的重大需求，依托已完成的973項目“方劑關(guān)鍵科學(xué)問題研究”及“方

11、劑配伍規(guī)律研究”工作基礎(chǔ)和優(yōu)勢，選擇復(fù)方丹參方、芪參益氣方、參麥方、參附方等作為模型藥物，圍繞建立和完善組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)，以藥物間相互作用為切入點，圍繞方劑配伍的體內(nèi)過程、藥效物質(zhì)間相互作用、多靶點多途徑藥理毒理機制等方面進行系統(tǒng)研究，結(jié)合臨床評價，闡明方劑配伍理論的科學(xué)內(nèi)涵，構(gòu)建組分配伍創(chuàng)制現(xiàn)代中藥理論基礎(chǔ)與技術(shù)體系。項目技術(shù)途徑如下圖所示： 圖1 項目總體思路2. 創(chuàng)新點本課題的研究特色是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，采用現(xiàn)代分析化學(xué)、藥物代謝學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等多學(xué)科手段，分別從不同層次、不同水平研究方劑配伍規(guī)律。創(chuàng)新點包括：（1）創(chuàng)建中藥“多組分”和“復(fù)雜物質(zhì)背景”

12、下的藥代動力學(xué)研究方法，從ADME/T途徑開展方劑藥效物質(zhì)間的轉(zhuǎn)運與代謝作用研究，揭示方劑藥效活性成分體內(nèi)暴露調(diào)控機制及配伍作用，為臨床用藥和組方設(shè)計提供藥代動力學(xué)信息。（2）建立和完善基于方劑綜合效應(yīng)接近最優(yōu)的組分配伍、優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)，為多組分創(chuàng)新中藥研發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。（3）開拓中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究，通過組學(xué)分析、DOCKING、網(wǎng)絡(luò)建模與實驗驗證等相結(jié)合的方法，揭示方劑組分配伍網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制，為發(fā)展基于網(wǎng)絡(luò)調(diào)控組分配伍優(yōu)化方法提供依據(jù)。（4）從不同病理環(huán)節(jié)研究行氣活血、益氣活血、滋陰益氣、溫陽補氣、清熱活血等不同配伍的藥物間相互作用特點，從復(fù)雜性疾病治療的角度詮釋“七情和合”配伍理論

13、科學(xué)內(nèi)涵。3. 課題設(shè)置（1）課題設(shè)置思路本項目以組分間相互作用為基礎(chǔ)，機體網(wǎng)絡(luò)調(diào)控為特點，圍繞組分配伍規(guī)律開展研究，探討方劑多組分多靶點相互作用配伍機制，研究歸結(jié)為三個層面（包括方劑配伍理論研究，方劑配伍規(guī)律的實驗研究以及方劑配伍的臨床系統(tǒng)評價），針對擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題，擬從組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)及應(yīng)用規(guī)律、組分配伍減毒增效機制、組分配伍體內(nèi)藥代動力學(xué)、組分配伍多靶點相互作用、組分配伍網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制、組分配伍方藥臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究等六個方面開展研究，六個課題相互聯(lián)系，相互依托，將方劑組分配伍規(guī)律作為各課題的技術(shù)紐帶貫穿整個研究工作，并通過上述研究詮釋“君臣佐使”、“七情和合”等方劑配伍規(guī)律的科

14、學(xué)內(nèi)涵。在課題部署上，課題1主要開展基于文獻的組分配伍與飲片配伍相關(guān)性研究和方劑配伍的系統(tǒng)評價研究，建立及發(fā)展基于效應(yīng)的組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用規(guī)律；課題2主要從P450酶系與肝轉(zhuǎn)運體的角度研究多組分配伍與飲片配伍減毒增效作用相關(guān)性，研究方劑藥效物質(zhì)與毒性成分的相互作用，解決方劑多成分轉(zhuǎn)運過程研究的關(guān)鍵共性問題，提供增效減毒配伍的科學(xué)內(nèi)涵；課題3著重研究比較復(fù)雜物質(zhì)背景下組分配伍、飲片配伍藥效物質(zhì)體內(nèi)暴露和調(diào)控機制，探索并建立中藥的“多藥體系”和“復(fù)雜物質(zhì)背景”藥代動力學(xué)研究模式和方法，從體內(nèi)吸收代謝過程的角度詮釋方劑配伍的科學(xué)內(nèi)涵；課題4主要研究代表性方劑多成分多途徑機制及作用靶標(biāo)，比

15、較研究方劑配伍與病證的相關(guān)性，揭示方劑藥效物質(zhì)對疾病不同病理環(huán)節(jié)的協(xié)同/拮抗、增效減毒的整合調(diào)節(jié)作用關(guān)系；課題5主要研究方劑多種藥效物質(zhì)對疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)的影響，從網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的角度詮釋方劑配伍規(guī)律，探索基于網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的方劑配伍優(yōu)化方法，為創(chuàng)制臨床有效方劑為源泉的多組分藥物提供新思路；課題6主要研究能夠反映中醫(yī)藥療效優(yōu)勢的臨床評價方法，從臨床的角度系統(tǒng)評價方劑配伍的科學(xué)性。六個課題有分工、有協(xié)作，也有多學(xué)科的交叉與融合，相互配合，形成一個有機整體。（2）各課題之間的關(guān)系各課題之間優(yōu)勢互補，相互聯(lián)系。課題組1主要側(cè)重于理論層面研究，通過對傳統(tǒng)方劑配伍知識以及現(xiàn)代方劑配伍研究新方法的集成、提煉及理論升華，

16、最終形成從文獻與臨床經(jīng)驗中發(fā)現(xiàn)方劑配伍規(guī)律的知識源，從而為其他課題研究提供理論基礎(chǔ)。課題2、3、4、5側(cè)重于實驗層面研究，分別從肝臟轉(zhuǎn)運、吸收代謝、功能機制等角度研究方劑配伍規(guī)律，并為基于臨床驗方的現(xiàn)代中藥配伍優(yōu)化與新藥研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。課題6則側(cè)重于臨床系統(tǒng)評價層面的研究，結(jié)合臨床研究探討如何從臨床的角度系統(tǒng)評價方劑配伍的科學(xué)性，并為揭示的方劑配伍規(guī)律提供可靠的科學(xué)依據(jù)。圖2課題設(shè)置關(guān)系圖課題一 組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)及應(yīng)用規(guī)律研究以古今文獻方劑配伍理論的挖掘為切入點，梳理、傳承、發(fā)揚方劑配伍理論發(fā)展的，建立和完善基于效應(yīng)的組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，明確組分配伍的特點和應(yīng)用規(guī)律，開展基于文獻的組

17、分配伍與飲片配伍相關(guān)性研究，以治療心血管疾病療效確切的代表性方劑為對象，系統(tǒng)評價現(xiàn)代中藥配伍的發(fā)展特點和應(yīng)用規(guī)律，豐富方劑配伍理論，為現(xiàn)代中藥開發(fā)提供新思路和新方法。主要研究內(nèi)容： （1）方劑配伍理論文獻研究全面搜集散落于歷代中醫(yī)文獻中的方劑配伍理論，梳理歷代方劑配伍理論發(fā)展歷程，對這些理論進行整理、總結(jié)與分析，探尋促進方劑配伍理論發(fā)展的內(nèi)在根源，為方劑配伍理論的研究與發(fā)展提供值得借鑒的歷史經(jīng)驗。通過對古代名優(yōu)經(jīng)典方劑的分析，總結(jié)提煉配伍方法，以豐富和發(fā)展方劑配伍理論。（2）現(xiàn)代中藥配伍新的思路和方法研究收集方劑配伍規(guī)律現(xiàn)代研究文獻，整理出方劑配伍規(guī)律現(xiàn)代研究整體框架，提煉出已開展的各種方劑配

18、伍新思路和新方法；以方劑配伍理論為指導(dǎo)，綜合考慮研究思路、技術(shù)方法、評價體系等內(nèi)容，闡述組分配伍是現(xiàn)代方劑配伍可行的方法。（3）基于效應(yīng)的組分配伍方法研究系統(tǒng)整理基于方劑功效的組分效應(yīng)，研究組分效應(yīng)和方劑功效的相關(guān)性，總結(jié)基于效應(yīng)的組分配伍方法，探尋組分配伍和飲片配伍的潛在規(guī)律，明確組分配伍特點及應(yīng)用規(guī)律，探討組分配伍的現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)，為組分配伍研究提供方法學(xué)支撐。（4）組分配伍與飲片配伍相關(guān)性研究采用循證醫(yī)學(xué)方法系統(tǒng)評價行氣活血、益氣活血、益氣養(yǎng)陰、益氣溫陽等中藥的有效性和安全性；結(jié)合項目組前期既有研究結(jié)果，探討組分配伍與飲片配伍的效應(yīng)相關(guān)性?？偨Y(jié)歸納基于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的方劑配伍研究的方法學(xué)特點

19、和規(guī)律，為組分配伍理論提供科學(xué)依據(jù)。預(yù)期目標(biāo)：（1）建立涵蓋歷代方劑配伍理論和現(xiàn)代方劑配伍研究的文獻庫；（2）建立基于效應(yīng)的組分配伍優(yōu)化設(shè)計方法，探討組分配伍與飲片配伍的相關(guān)性；（3）明確組分配伍的特點和應(yīng)用規(guī)律；（4）為組分中藥新藥的研制及注冊提供技術(shù)支撐；（5）發(fā)表論文15篇，其中SCI收錄3篇；（6）培養(yǎng)博士研究生4名、碩士研究生5名；承擔(dān)單位：中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所 天津中醫(yī)藥大學(xué)負責(zé)人：劉麗梅研究員學(xué)術(shù)骨干：年莉教授、劉振麗研究員、任明助理研究員經(jīng)費比例：10%課題二 組分配伍減毒增效機制研究本課題建立基于P450酶系統(tǒng)藥物相互作用研究中藥配伍規(guī)律的技術(shù)體系，通過研究參附注

20、射液各單藥、各配伍及有效單體和毒性成分對P450酶的作用（包括誘導(dǎo)、抑制及P450酶參與其代謝），闡明參附注射液相互作用的科學(xué)內(nèi)涵和增效減毒配伍規(guī)律；揭示參附注射液君臣佐使配伍的分子機理和毒性機制，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。通過對參附注射液等方劑中毒性成分的確定以及與它藥配伍的量-毒-效關(guān)系研究，為組分中藥新藥技術(shù)指導(dǎo)原則提供毒理學(xué)和安全性評價實驗依據(jù)和技術(shù)支撐。主要研究內(nèi)容：（1）基于UPLC-QTOF技術(shù)的參附注射液體外、體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)研究：利用UPLC-Q-TOF技術(shù)，分析各藥及配伍后相關(guān)有效成分、毒性成分的變化，建立參附注射液中各單藥與相互配伍后效、毒成分的指紋圖譜，對參附注射液中效、

21、毒性物質(zhì)體內(nèi)代謝過程實施動態(tài)觀測，同時與參麥注射液平行對照，找到配伍前后主要的差異成分和毒性成分的變化規(guī)律。（2）基于心臟、肝臟P450酶系統(tǒng)的參附注射液配伍調(diào)控研究： 從mRNA、蛋白及酶活性測定水平探討和確證參附注射液各單藥 、配伍組合（君臣）對P450酶系統(tǒng)的調(diào)控作用（誘導(dǎo)或抑制作用），重點測定與心衰過程密切相關(guān)的心臟P450酶系統(tǒng)CYP1A1、CYP1B、CYP2A1/2等亞型，并將其與心衰模型中內(nèi)源性物質(zhì)代謝相對應(yīng)，找到基于臨床和P450酶系統(tǒng)的參附注射液君臣佐使配伍規(guī)律。 采用確定的亞型特異性抑制劑或抗體等，分析并測定P450同工酶亞型是否參與參附注射液有效成分和毒性成分的代謝。

22、綜合分析上述兩部分研究結(jié)果分析并發(fā)現(xiàn)基于P450酶系統(tǒng)代謝酶的參附注射液增效減毒的配伍規(guī)律。（3）基于心臟、肝臟P450酶系統(tǒng)的參附注射液毒性機制研究：對參附注射液作用正常和疾病模型后血清樣品進行分離分析，考察不同狀態(tài)下肝臟P450酶系統(tǒng)與血中相關(guān)毒性機制發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)性。（4）計算毒理學(xué)在參附注射液中應(yīng)用：基于Super CYP、HIT等數(shù)據(jù)庫，通過對天然藥物代謝酶相互作用網(wǎng)絡(luò)聚集的數(shù)據(jù)分析，建立整合藥物代謝酶表達方劑配伍規(guī)律的計算毒理學(xué)方法。（5）通過對參附注射液等方劑中毒性成分的確定以及與它藥配伍的量-毒-效關(guān)系研究，為組分中藥新藥技術(shù)指導(dǎo)原則提供毒理學(xué)和安全性評價實驗依據(jù)和技術(shù)支撐。預(yù)

23、期目標(biāo)：（1）在酶活性水平、mRNA水平和蛋白水平建立基于藥物轉(zhuǎn)運蛋白和P450酶的中藥復(fù)方配伍增效減毒的技術(shù)平臺。（2）確證參附注射液各單味藥對P450酶誘導(dǎo)、抑制及其代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)特點和規(guī)律；并通過UPLC-Q-TOF技術(shù)研究參附注射液的物質(zhì)基礎(chǔ)和體內(nèi)過程。（3）闡明參附注射液以心臟、肝臟P450酶系統(tǒng)為靶點的君臣佐使及增效減毒配伍規(guī)律及毒性機制，賦予中藥復(fù)方配伍規(guī)律研究的新內(nèi)涵。（4）確定參附注射液等方劑中毒性成分以及與它藥配伍的量-毒-效關(guān)系，為組分中藥新藥技術(shù)指導(dǎo)原則提供毒理學(xué)和安全性評價實驗依據(jù)和技術(shù)支撐。（5）在國際、國內(nèi)重要學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表學(xué)術(shù)論文1520篇，其中SCI 收錄10

24、-13篇；申請國家發(fā)明專利12項。（6）培養(yǎng)博士研究生35名，碩士研究生810名。承擔(dān)單位：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所負責(zé)人：高月研究員學(xué)術(shù)骨干：王宇光副研究員、馬增春副研究員、梁乾德助理研究員、陸倍倍助理研究員經(jīng)費比例：16.7%課題三 組分配伍體內(nèi)藥代動力學(xué)研究本課題圍繞復(fù)方丹參方、參麥方、參附方等有效方劑，發(fā)展和應(yīng)用藥代動力學(xué)和生物樣品分析中的最新關(guān)鍵技術(shù)。系統(tǒng)考察復(fù)方丹參方全方復(fù)雜物質(zhì)背景下方劑藥效活性組分的體內(nèi)暴露特征、暴露調(diào)控機制及實驗動物與人的相關(guān)種屬差異；針對這些暴露調(diào)控機制，尋找方劑中能夠影響上述藥效活性成分體內(nèi)暴露的藥代活性組分；在此基礎(chǔ)上從藥代動力學(xué)

25、角度研究產(chǎn)生組分配伍作用的條件，以及組分配伍是否能產(chǎn)生具有臨床應(yīng)用價值的效果。參麥方與參附方研究重點比較人參及組分分別與麥冬和附子組分配伍后，人參皂苷藥效活性組分體內(nèi)暴露情況的變化特征。在前期建立了中藥“多成分”藥代動力學(xué)研究模式和方法的基礎(chǔ)上，探索并建立適合方劑“多藥體系”的中藥藥代動力學(xué)研究模式和方法及在“復(fù)雜物質(zhì)背景”下的研究模式和方法，探索建立組分中藥藥代研究的方法和標(biāo)準，從藥代動力學(xué)角度為多組分中藥研制及注冊標(biāo)準提供技術(shù)支撐。主要研究內(nèi)容： （1）在大鼠上考察給予上述方劑后藥效活性組分的體內(nèi)暴露水平，并與給藥相關(guān)單味藥材提取物或相關(guān)單個中藥組分后的體內(nèi)暴露水平進行比較，考察藥代基質(zhì)效

26、應(yīng)對方劑藥效活性成分體內(nèi)暴露和藥代動力學(xué)特征的影響。 （2）圍繞上期973項目研究中發(fā)現(xiàn)的調(diào)控上述方劑組分體內(nèi)暴露的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，開展不同組分的體外轉(zhuǎn)運和體外代謝轉(zhuǎn)化研究，鑒定起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)運體或代謝酶，開展相關(guān)轉(zhuǎn)運體或代謝酶的體外動力學(xué)實驗和正常動物與化學(xué)敲除動物模型的比較研究，并針對中藥組分的代謝轉(zhuǎn)化，比較代謝酶在肝、腸等不同臟器組織的代謝活性。 （3）開展方劑所含單味中藥組分提取物的人體藥代動力學(xué)研究，明確各藥效活性成分在人體上的系統(tǒng)暴露動態(tài)特征、體內(nèi)代謝和腎排泄情況。 （4）圍繞上述藥代靶點，對上述方劑所含的各類化學(xué)組分和代謝物進行高通量體外篩選，尋找能夠影響方劑“藥效活性”成分體內(nèi)暴露的

27、方劑“藥代活性”候選物。 （5）考察給予方劑“藥代活性”候選物的體內(nèi)藥動學(xué)特征。（6）開展復(fù)方丹參方組分配伍作用研究，考察給藥后體內(nèi)出現(xiàn)方劑組分配伍藥代作用陽性結(jié)果的條件和方法。比較人參皂苷組分分別與麥冬和附子組分配伍后，人參皂苷組分體內(nèi)藥代動力學(xué)特征的差異。 （7）在綜合分析上述全部研究工作結(jié)果的基礎(chǔ)上，設(shè)計人體實驗方案，開展復(fù)方丹參方方劑配伍作用的人體試驗。預(yù)期目標(biāo)：（1）闡明組分配伍對復(fù)方丹參方、參麥方、參附方藥效活性組分系統(tǒng)暴露和體內(nèi)變化過程的影響，揭示方劑配伍的作用機制，為臨床合理用藥提供依據(jù)，促進中藥新藥研發(fā)。 （2）在前期建立了中藥“多成分”藥代動力學(xué)研究模式和方法的基礎(chǔ)上，進一

28、步創(chuàng)立中藥“多藥體系”和“復(fù)雜物質(zhì)背景”藥代動力學(xué)研究模式和方法。從藥代動力學(xué)角度為組分中藥研制及注冊標(biāo)準提供技術(shù)支撐。（3）發(fā)表SCI論文10篇，申請專利1項，培養(yǎng)博士研究生5名、碩士研究生3名。承擔(dān)單位：中國科學(xué)院上海藥物研究所課題負責(zé)人：李川研究員學(xué)術(shù)骨干：孫艷副研究員、李利助理研究員、楊軍令助理研究員、杜飛飛助理研究員經(jīng)費比例：16.6%課題四 多組分、多靶點相互作用研究在復(fù)雜性疾病治療的背景下，以臨床常用方劑復(fù)方丹參方或丹紅方、芪參益氣方、參附方、參麥方等為研究載體，針對心血管疾病發(fā)生后所涉及的血小板、血管、脂代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌等重要病理環(huán)節(jié)，利用細胞、離體組織、在體疾病模型，整合中藥

29、分析、藥理、分子靶標(biāo)和細胞表型篩選等技術(shù)手段，系統(tǒng)研究益氣、溫陽、活血中藥組分的藥效，分析不同組分及配伍對主要靶點的作用及機制，以及組分間相互作用特點，研究組分配伍協(xié)同增效、拮抗減毒的作用規(guī)律，詮釋“七情和合”配伍理論科學(xué)內(nèi)涵，為多組分配伍研制創(chuàng)新中藥提供依據(jù)。主要研究內(nèi)容：（1）針對冠心病發(fā)病過程中涉及的心臟、血管、血小板、脂代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌等重要病理環(huán)節(jié)，以及心肌缺血后主要病理變化，系統(tǒng)研究補氣、溫陽、活血中藥組分和藥效的關(guān)系，以及行氣活血、益氣活血、滋陰益氣、溫陽補氣組分配伍協(xié)同增效的關(guān)系。（復(fù)方丹參和芪參益氣的部分工作已完成）（2）根據(jù)上述研究獲得的陽性結(jié)果，針對關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)中具體作用

30、靶點，研究其多組分配伍協(xié)同增效、拮抗減毒的作用及機制。 針對血小板功能，采用整合分子靶標(biāo)和細胞表型雙重篩選技術(shù)，以抑制血小板關(guān)鍵GPCR激活為指標(biāo)，系統(tǒng)研究抑制血栓形成的活性物質(zhì)基礎(chǔ)、信號傳導(dǎo)途徑和組分配伍作用規(guī)律，并通過GPCR基因敲除動物模型及體內(nèi)熒光示蹤法跟蹤藥物組分-靶蛋白在正常生理和病理環(huán)境下結(jié)合及相互作用，研究不同配伍抑制不同GPCR介導(dǎo)血栓形成的作用，為基于整體藥效活性的多組分復(fù)方中藥協(xié)同效應(yīng)研究開辟新途徑。 針對血管功能，采用血管條、血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞模型，應(yīng)用相關(guān)作用靶點激動劑、拮抗劑，研究不同組分配伍舒縮血管作用及機制，并利用相關(guān)靶點基因敲除動物模型，研究不同配伍發(fā)揮

31、作用的途徑。 針對中藥調(diào)動機體內(nèi)源性修復(fù)機制，采用內(nèi)皮祖細胞（EPCs）研究技術(shù)，研究組分配伍對EPCs從骨髓遷移、粘附、分化的作用及機制，分析作用的差異，探討組分間相互作用的規(guī)律與機制。 針對與冠心病糖脂代謝異常危險因素，利用DPPH自由基清除、蛋白質(zhì)非酶糖基化產(chǎn)物（AGEs）形成、-糖苷酶及脂肪酶活性，應(yīng)用KK-Ay小鼠和ApoE-/-小鼠等模型，研究方劑有效組分改善糖脂代謝異常的作用，探討方劑治療復(fù)雜性疾病的多靶點效應(yīng)及機制。 采用擬交感神經(jīng)的牛腎上腺髓質(zhì)和大鼠活體組織微透析模型，研究益氣、溫陽、活血組分及其配伍對神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的作用，闡述其不同配伍對冠心病發(fā)作時緩解應(yīng)激損傷的機制。（3

32、）方劑組分配伍臨床確證研究：根據(jù)基礎(chǔ)研究的結(jié)果，針對藥物相應(yīng)證型的冠心病患者，分別采用行氣活血、益氣活血、滋陰益氣、溫陽補氣方劑，研究對冠心病患病者血小板（粘附、聚集、釋放）、心功能等的影響，確證組分配伍臨床治療相關(guān)疾病的藥理作用。預(yù)期目標(biāo)：（1）從多靶點角度研究行氣活血、益氣活血、滋陰益氣、溫陽補氣不同組分配伍的協(xié)同增效規(guī)律。（2）建立多組分多靶點相互作用研究技術(shù)平臺，完善組分配伍作用規(guī)律和模式，闡述組分間相互作用的規(guī)律和機制。（3）為組分中藥的研制及注冊提供技術(shù)支撐。（4）發(fā)表SCI論文9篇，申請專利3項，培養(yǎng)博士后、博士研究生7名、碩士研究生10名。出版專著1部。承擔(dān)單位：天津中醫(yī)藥大學(xué)

33、課題負責(zé)人：張伯禮教授主要學(xué)術(shù)骨干：高秀梅教授、樊官偉副研究員、王小瑩講師、張晗助理研究員、康立源副研究員經(jīng)費比例：23.3%課題五 組分配伍網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制研究以芪參益氣方、參麥方等臨床有效方劑為模型藥物，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究理念，通過組學(xué)分析、DOCKING、網(wǎng)絡(luò)建模與實驗驗證等相結(jié)合的方法，研究揭示方劑有效組分配伍后各組分間的復(fù)雜非線性交互作用，包括不同有效組分在多個靶點和通路上的協(xié)同作用機制（組-效關(guān)系），以及不同組分在疾病不同病理階段的協(xié)同作用機制（時-效關(guān)系），構(gòu)建方劑中多種藥效成分對疾病相關(guān)靶點和作用途徑的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控模型。主要研究內(nèi)容：（1）研究構(gòu)建中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究平臺：收集方劑化合物

34、及代謝產(chǎn)物、蛋白質(zhì)、基因、通路、疾病信息等實驗性和知識性數(shù)據(jù)，研究方劑-化合物相關(guān)網(wǎng)絡(luò)、方劑-疾病靶點網(wǎng)絡(luò)等可視化方法，將方劑、飲片、化合物等化學(xué)信息和功能主治、疾病、基因、通路、蛋白質(zhì)等生物信息及其相互關(guān)系集于一體，采用Oracle數(shù)據(jù)庫和Web Server結(jié)構(gòu)建立開放式中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究平臺，進而創(chuàng)新研究針對多靶點的多成分藥效預(yù)測和ADME/T性質(zhì)預(yù)測等方法。 （2）基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的組分配伍研究：辨析芪參益氣方、參麥方等代表性方劑的主要化學(xué)組成，分析鑒定其主要入血成分與代謝產(chǎn)物。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺中的分子模擬技術(shù)，研究示范方劑主要成分與疾病相關(guān)靶點結(jié)合情況；根據(jù)結(jié)合能力強弱排序，虛擬篩選

35、方劑藥效成分并在細胞模型上驗證其對靶標(biāo)的活性。針對心血管疾病相關(guān)靶點，進行多分子多靶點的分子模擬計算，構(gòu)建方劑飲片組分靶點相關(guān)網(wǎng)絡(luò)，并通過網(wǎng)絡(luò)分析尋找靶標(biāo)群和作用途徑，探索揭示方劑組分配伍的科學(xué)內(nèi)涵。（3）基于系統(tǒng)生物學(xué)的組分配伍研究：根據(jù)“君臣佐使”、“七情和合”等配伍原則，針對代表性方劑的君藥、臣藥和佐使藥主要化學(xué)組分（包括其代謝產(chǎn)物），開展整體動物實驗研究。采用基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)與代謝組學(xué)等系統(tǒng)生物學(xué)手段，探索來源于不同藥材的方劑組分的作用靶點、通路及作用機制。（4）基于網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的組分配伍優(yōu)化方法研究：研究建立疾病不同病理階段的靶點網(wǎng)絡(luò)模型，比較分析多種有效組分在不同配伍情況下對多個靶

36、點和通路的調(diào)控作用及其與整體藥效的相關(guān)性；采用實驗研究與計算機仿真相結(jié)合方法，創(chuàng)新發(fā)展一種根據(jù)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控作用組分配伍進行優(yōu)化的設(shè)計策略，探索建立源于臨床有效方劑的多組分藥物設(shè)計方法，進一步完善組分中藥設(shè)計方法學(xué)，為多組分中藥研制及其注冊標(biāo)準制訂提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐。預(yù)期目標(biāo)：（1）建立中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究平臺，針對特定方劑的臨床適應(yīng)癥研究多組分多靶點整合調(diào)節(jié)機制，從網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的角度詮釋方劑組分配伍的科學(xué)性。 （2）建立基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的組分配伍優(yōu)化方法，進一步完善組分中藥配伍優(yōu)化設(shè)計方法學(xué)，為多組分藥物設(shè)計和現(xiàn)代中藥新藥創(chuàng)制提供新途徑。 （3）發(fā)表SCI收錄論文12篇以上，申請發(fā)明專利8項以上，培養(yǎng)

37、博士研究生4名、碩士研究生4名以上。承擔(dān)單位：浙江大學(xué)負責(zé)人：程翼宇教授學(xué)術(shù)骨干：瞿海斌教授、趙筱萍教授、范驍輝副研究員、王毅副教授經(jīng)費比例：16.7%課題六 組分配伍方藥臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究以苦碟子注射液、注射用血栓通治療腦梗死急性期的臨床有效藥物為研究對象，進行清熱、活血組分配伍的臨床隨機對照多中心研究，結(jié)合分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、藥代動力學(xué)等相關(guān)研究，深入探討組分配伍的臨床療效、內(nèi)在機制等科學(xué)內(nèi)涵，為“組分配伍”創(chuàng)制多組分多靶點的中藥新藥提供依據(jù)。主要研究內(nèi)容：（1）清熱活血組分配伍的文獻研究檢索相關(guān)數(shù)據(jù)庫，全面收集苦碟子注射液、注射用血栓通治療腦梗死急性期的相關(guān)文獻，采用循

38、證醫(yī)學(xué)的方法系統(tǒng)評價藥物療效、安全性，篩選療效評價指標(biāo)。（2）清熱活血組分配伍的前瞻性隨機對照多中心臨床研究選擇腦梗死急性期患者進行隨機對照多中心臨床試驗，分別采用清熱法、活血法、清熱活血法進行治療，選用神經(jīng)精神相關(guān)量表、中醫(yī)癥狀觀察表及相關(guān)理化指標(biāo)，探討清熱、活血組分配伍在臨床治療中的證效、時效關(guān)系。（3）清熱活血組分配伍的調(diào)控機制研究針對炎癥反應(yīng)通路及腦微血管內(nèi)皮細胞的一些具體靶點，進行兩方面研究：基于炎癥反應(yīng)的調(diào)控機制研究：通過建立大鼠急性腦梗死模型和體外培養(yǎng)細胞，尋找各組分及配伍組合的不同作用靶點，從而研究各組分之間有序協(xié)同的時效、組效關(guān)系，從炎癥反應(yīng)角度探討“組分配伍”中藥治療腦梗死

39、復(fù)雜病變多靶點、多環(huán)節(jié)的整合調(diào)節(jié)效應(yīng)及其機制。基于腦微血管內(nèi)皮細胞的調(diào)控機制研究：體外培養(yǎng)人腦微血管內(nèi)皮細胞，建立氧糖剝奪模型，從分子水平研究組分配伍對腦微血管內(nèi)皮細胞分泌功能失調(diào)的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制，探討“組分配伍”中藥治療腦梗死復(fù)雜病變的網(wǎng)絡(luò)整合調(diào)節(jié)效應(yīng)及其機制。（4）清熱活血組分配伍的藥代動力學(xué)研究采用UPLC-MS等分析方法，明確清熱活血組分所含主要中藥組分及含量，闡明中藥與藥效、作用靶器官之間的關(guān)系，完善藥代動力學(xué)用于中藥作用機理研究的方法學(xué)，揭示苦碟子注射液和注射用血栓通主要化學(xué)成分配伍是否“佐使”藥物透過血腦屏障并延緩其代謝。預(yù)期目標(biāo)：（1）文獻系統(tǒng)評價、臨床驗證清熱、活血不同組分配伍

40、的協(xié)同增效作用。（2）基于實驗研究，揭示中藥不同組分配伍的多靶點、多環(huán)節(jié)的整合調(diào)節(jié)機制，探討組分配伍協(xié)同增效作用的科學(xué)內(nèi)涵。（3）闡明清熱、活血中藥組分及其配伍的體內(nèi)過程及作用模式，完善藥代動力學(xué)用于中藥組分配伍作用機理研究的方法學(xué)，探討組分配伍的科學(xué)內(nèi)涵。（4）發(fā)表學(xué)術(shù)論文10-15篇，其中SCI收錄 3篇，培養(yǎng)博士研究生5名、碩士研究生10名。（5）從臨床角度為制定組分中藥研制及注冊標(biāo)準提供技術(shù)支撐。承擔(dān)單位：北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院 北京中醫(yī)藥大學(xué)課題負責(zé)人：張允嶺教授主要學(xué)術(shù)骨干：郭蓉娟教授、陳志剛教授、王新祥研究員、盧建秋研究員經(jīng)費比例：16.7%四、年度計劃年度研究內(nèi)容預(yù)期目標(biāo)第一年

41、初步設(shè)計文獻數(shù)據(jù)庫；收集治療心血管疾病相關(guān)飲片配伍與組分配伍研究的文獻；建立基于藥物轉(zhuǎn)運蛋白和P450酶的中藥復(fù)方配伍增效減毒的技術(shù)平臺；開展藥代動力學(xué)研究；開展組分配伍與藥效關(guān)系研究；研究網(wǎng)絡(luò)可視化與網(wǎng)絡(luò)分析方法，發(fā)展針對多靶點的中藥多成分藥效預(yù)測方法和ADME/T屬性預(yù)測評價方法；完善臨床信息采集方法。完成部分方劑配伍方法的一般規(guī)律總結(jié)；發(fā)現(xiàn)組分配伍前后主要的差異成分和毒性成分的變化規(guī)律；完成復(fù)方丹參方二萜類成分及冰片成分的大鼠藥代動力學(xué)研究及三七皂苷類成分人體藥代動力學(xué)研究；初步明確補氣、溫陽、活血中藥藥效的靶組織；完善并啟動臨床方案；完善質(zhì)控方案。發(fā)表論文12篇，其中三大檢索系統(tǒng)收錄6

42、篇；培養(yǎng)博士后、博士研究生3名；申報專利2項。第二年完善方劑文獻數(shù)據(jù)庫的設(shè)計；開展參附注射液中效、毒性物質(zhì)體內(nèi)代謝過程實施動態(tài)觀測研究和基于心臟、肝臟P450酶系統(tǒng)的參附注射液配伍調(diào)控研究；開展復(fù)方丹參方藥代Marker的腎排泄和代謝的作用機制研究和三七皂苷類成分的肝、腎排泄的作用機制研究；開展具有活性基礎(chǔ)的方劑配伍GPCR介導(dǎo)血栓形成的作用研究；開展組分配伍的基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)研究；完成臨床病例收集130例，留取待測樣本；進行苦碟子注射液和注射用血栓通血清藥物化學(xué)研究和藥代動力學(xué)研究。完成方劑配伍方法的一般規(guī)律總結(jié)；完成標(biāo)注和錄入的方劑配伍文獻庫；初步發(fā)現(xiàn)參附注射液配伍增效減毒規(guī)

43、律；確證參附注射液各單味藥對P450酶誘導(dǎo)、抑制及其代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)特點；確定丹參素腎排泄及代謝轉(zhuǎn)化參與的轉(zhuǎn)運體和代謝酶；體外確定三七皂苷類成分的膽汁排泄、尿排泄涉及的轉(zhuǎn)運體；明確方劑配伍對GPCR介導(dǎo)血栓形成的作用；完成臨床病例收集130例并錄入數(shù)據(jù)庫撰寫中期評估報告，完成中期評估；發(fā)表論文15篇，其中三大檢索系統(tǒng)收錄7篇；培養(yǎng)博士后、博士研究生5名；申報專利2項。第三年整理方劑配伍規(guī)律現(xiàn)代實驗研究的整體框架；對比分析飲片配伍與組分配伍研究的文獻并進行文獻分析和系統(tǒng)評價；探討和確證參附注射液各單藥 、配伍組合對P450酶系統(tǒng)的調(diào)控作用；考察藥代基質(zhì)效應(yīng)對丹參素及三七皂苷類成分的體內(nèi)暴露水平及藥動學(xué)特征的影響，研究復(fù)方丹參方組分配伍作用的藥代作用機制；完善方劑配伍對GP