疫苗之陽歷史演化與展望

1、疫苗之歷史演化與展望 疫苗之早期歷史 疫苗學(xué)(vaccinology)是一門複雜及跨學(xué)門的科學(xué)，其發(fā)展過程部份是理性而部份為經(jīng)驗(yàn)之談，科學(xué)家進(jìn)行基礎(chǔ)研究並獲得突破後才獲得實(shí)用及許可上市之產(chǎn)品，因此對疫苗學(xué)做一個完整的回顧有利於了解及領(lǐng)會其特點(diǎn)。 全細(xì)胞或次單元、活的、殺的或基因重組病毒或細(xì)菌疫苗其演化之進(jìn)展可以分成幾個時(shí)期，疫苗進(jìn)展係由科學(xué)時(shí)期開始，接著由理性經(jīng)驗(yàn)主義得來啟蒙，到轉(zhuǎn)變至近代時(shí)期，近代時(shí)期是所有時(shí)期中最具生產(chǎn)力者，發(fā)展出許多新疫苗與技術(shù)，導(dǎo)致現(xiàn)代時(shí)期以及未來可能得到的進(jìn)展。 在古人的信仰中（見表一），疾病是無法觸摸又反覆無常的神對犯了重大罪惡人類的懲罰，對於疾病帶來毀滅的恐懼是統(tǒng)

2、治者所利用的一種有效統(tǒng)治工具，政客與巫師灌輸恐怖思想，由早期部落至現(xiàn)代文明的漫長過程中，以這種方法來控制人類行為證明十分有效，許多已知有關(guān)傳染病、昆蟲傳播及公共衛(wèi)生之早期文明在歐洲已經(jīng)消失，公元400年後由西方希臘羅馬文明的隕落到黑暗時(shí)期的起始，直到十九世紀(jì)才完全復(fù)甦，然而，某些近代科學(xué)的先驅(qū)者確實(shí)發(fā)現(xiàn)微生物的生命形式、環(huán)境與疾病間之關(guān)係及某些臨床界定之疾病不會再次發(fā)生的事實(shí)，此種異端觀念顯現(xiàn)出：是人類自身（非魔鬼或邪神）才是瘟疫的源頭，而問題的解決在於向超自然籲求以外去尋求。 表一、疫苗學(xué)初始期 善變的天神與惡魔引發(fā)疾病對疾病恐懼統(tǒng)治者、僧侶及政客的有力工具初期觀察，疾病傳染性、衛(wèi)生、抵抗重

3、複感染、編撰之宗教禁忌增進(jìn)健康迷信流行羅馬帝國與黑暗時(shí)期衰亡導(dǎo)致早期知識損減1700年代後期再度覺醒金納觀察到感染牛痘的擠牛奶女工不會產(chǎn)生天花的現(xiàn)象金納之預(yù)防方法疫苗及免疫學(xué)科學(xué)的開展疫苗學(xué)之衰退（成熟期、天花疫苗改良）至1875年，等待巴斯德之新發(fā)現(xiàn)。並未發(fā)生生命自發(fā)形成的現(xiàn)象微生物引起發(fā)酵作用建立疾病之病原理論 古代中國人以接種天花病患的膿液來預(yù)防自然發(fā)生的嚴(yán)重天花疾病，這種方法於十八世紀(jì)初期引進(jìn)歐洲，此過程與金納(edward jenner)知道擠牛奶的女工因?yàn)樵雀腥九６欢粫玫教旎ǖ那闆r是相同的，早在金納時(shí)期以前，外行人如農(nóng)夫賈世提(benjamin justy)已經(jīng)將牛痘的膿液接

4、種在自家人身上來預(yù)防天花。 基於此種知識背景，英國醫(yī)生金納於1796年進(jìn)行第一個預(yù)防天花人體實(shí)驗(yàn)的科學(xué)研究，臨床研究證明預(yù)先接種牛痘病毒，再以具毒性之病毒攻擊確實(shí)可以預(yù)防天花，由此開始，疫苗學(xué)與免疫學(xué)於焉誕生。 十九世紀(jì)時(shí)，牛痘接種成為全球性的防疫工作，特別是在歐洲及北美洲，但是由金納初期發(fā)現(xiàn)所習(xí)得的原則被擱置超過一個半世紀(jì)，其間沒有新的疫苗出現(xiàn)，此領(lǐng)域極須要排除自然發(fā)生論的證明，方可建立疾病的病原理論，兩者由巨觀言之都因法國化學(xué)家巴斯德(louis pasteur)的研究而大功告成。 十九世紀(jì)的最後二十五年（見表二）是奮發(fā)圖強(qiáng)的時(shí)期，此時(shí)具有意義之疫苗學(xué)科學(xué)出現(xiàn)，延續(xù)超過四十年，然後進(jìn)入第一

5、次世界大戰(zhàn)期，早期的科學(xué)巨人有巴斯德、柯霍、馮貝霖及愛立克，在這段時(shí)期目標(biāo)集中於細(xì)菌、醫(yī)學(xué)應(yīng)用及主要有關(guān)抗體之實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)之發(fā)現(xiàn)。 表二、疫苗學(xué)1875年經(jīng)歷第一次世界大戰(zhàn)並到1930年 1875年的大覺醒發(fā)現(xiàn)及合理之經(jīng)驗(yàn)主義，焦點(diǎn)集中於細(xì)菌及抗體（狂犬病毒除外） 研究巨人： 巴斯德(louis pasteur)免疫預(yù)防、減毒作用柯霍克(robert koch)方法學(xué)、病因?qū)W、過敏反應(yīng)、假說馮貝靈(emil von behring)抗體及免疫治療法愛力克(paul ehrlich)受體配體專一性結(jié)合、特殊化學(xué)治療法、抗體量化1929年代： 描述體液免疫現(xiàn)象免疫治療法主導(dǎo)研究領(lǐng)域可信賴及有效之疫苗

6、天花及狂犬病死的及或減毒傷寒、志賀桿菌病、霍亂鼠疫、白喉、破傷風(fēng)、百日咳及結(jié)核病 巴斯德注意到藉實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)可以減弱禽類瘟疫細(xì)菌的毒性，他也觀察到這種減毒的細(xì)菌可以引發(fā)抵抗往後有害細(xì)菌的攻擊，進(jìn)一步研究使得他發(fā)展出可靠的疫苗來抗拒炭疽、霍亂及病毒引起之狂犬病，有人認(rèn)為巴斯德對於疫苗迅速且巨大爆發(fā)的洞察力，可能得自他所不承認(rèn)的學(xué)者奧濟(jì)亞土倫(auzias-turenne)其先驅(qū)性觀念之大力協(xié)助，早在幾年前這些觀念已經(jīng)發(fā)表。 德國柏林的柯霍(robert koch)是發(fā)展純培養(yǎng)技術(shù)的大師，而在發(fā)現(xiàn)霍亂及結(jié)核細(xì)菌上是一位先驅(qū)者，柯霍假說提出嚴(yán)格的定義以建立疾病之特殊病原學(xué)，他對於臨床過敏性的發(fā)現(xiàn)強(qiáng)過麥

7、奇里約夫(metchniyoff)對於吞噬細(xì)胞與先天免疫性有關(guān)的發(fā)現(xiàn)。 馮貝霖(emil von behring)是第一位諾貝爾獎得主，他利用羅克斯(roux) 及葉爾辛(yersin)發(fā)現(xiàn)白喉及破傷風(fēng)的可溶性毒素，將其去毒後來進(jìn)行免疫接種，建立被動免疫治療法的領(lǐng)域，此成就主導(dǎo)了未來幾十年對抗傳染性疾病治療性醫(yī)學(xué)的發(fā)展。 然而該時(shí)期影響最深遠(yuǎn)的為愛立克(paul ehrlich)的發(fā)現(xiàn)，他找出染料與其他化學(xué)試劑對細(xì)胞組成的特殊親和性，依據(jù)選擇性原則，發(fā)展出世界第一種合成的治療藥物，是為化合物606或稱salvarsan，用以治療梅毒，愛力克發(fā)展出特殊量化抗體的方法，使得馮貝林的被動免疫性真正可

8、以實(shí)用，他認(rèn)為細(xì)胞側(cè)鏈與化學(xué)物質(zhì)及與其他蛋白質(zhì)特殊互補(bǔ)性的觀念，之後稱之為特殊受體配體結(jié)合作用(receptor-ligand binding)，此觀念主導(dǎo)了我們今日對於免疫專一性、細(xì)胞化學(xué)及藥物特殊治療方法的了解。 其他許多研究人員接著進(jìn)行各種初期研究，在1919年第一次世界大戰(zhàn)終了時(shí)，大部分體液免疫現(xiàn)象皆得已被描述，並發(fā)展出具可使用品質(zhì)之活疫苗及死疫苗，除此之外，還包括抗傷寒、志賀桿菌病、結(jié)核病、鼠疫、白喉及破傷風(fēng)等疫苗，百日咳疫苗直到1926年才開始發(fā)展，直到目前所有這些疫苗都繼續(xù)被加以研究並改良。 1930年至1950年過渡時(shí)期之疫苗（包括1950-1957年） 在1930年到1950

9、年的二十年間（見表三），涵蓋第二次世界大戰(zhàn)，成為疫苗新時(shí)代的過渡期，此時(shí)期的一個大突破為古得派斯德(goodpasture)於1931年證明病毒可在受精雞胚胎裡生長，由此泰勒(theiler)製造出安全且有效抗黃熱病的切碎雞組織疫苗17d，此發(fā)現(xiàn)在熱帶國家應(yīng)用極廣。 表三、疫苗學(xué)轉(zhuǎn)型期(1930-1948)，包括華特瑞陸軍研究院(1948-1957)有關(guān)流行性感冒及腺病毒製劑及疫苗之早期研究 1931年古德巴斯德(goodpasture)病毒在雞胚膜上繁殖。1935年泰勒(theiler)安全及有效之黃熱病疫苗，以碎雞胚組織繼代培養(yǎng)減毒。史愧伯病毒實(shí)驗(yàn)室(squibb virus labora

10、tories)，1940年代早期考克斯(coxs)福馬林不活化雞胚（卵黃囊）斑疹傷寒疫苗（傳入歐洲）。1944年福馬林不活化小鼠腦之b型日本腦炎疫苗（傳入遠(yuǎn)東），依據(jù)早期日本及蘇俄之研究及沙賓(sabin)之報(bào)告。1945年(e. r. squibb & sons labs) 史丹利(wendell stanley)發(fā)展非精緻純化之雞胚尿囊液得來之流行性感冒病毒疫苗，純化病毒疫苗之典範(fàn)。 史愧伯父子實(shí)驗(yàn)室(e. r. squibb & sons labs)之處理及製造研發(fā)，包括軍方與平民。華特瑞陸軍研究院(walter reed army institute of research, wrai

11、r) 1948-1958 經(jīng)由展望及回顧病毒與血清流行病學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)流行性感冒病毒之抗原逐漸改變（飄變，drift）及重大改變（變異，shift）。 偵測出1957年之大流行；疫苗研發(fā)，1957年。 1953-1957 發(fā)現(xiàn)腺病毒（流行性wrair；潛伏性nih）1953年。 死病毒疫苗之研發(fā)及證明有效(98%)1956年，上市販?zhǔn)?958年。 史奎伯父子研究實(shí)驗(yàn)室(e. r. squibb & sons research laboratories)的早期研究 在史奎伯病毒實(shí)驗(yàn)室裡，斑疹傷寒立克次體在受精雞胚卵黃裡的生長（依據(jù)寇克斯法，cox method），會快速導(dǎo)致製造出大量斑疹傷寒疫苗並

12、領(lǐng)有許可證，在二次大戰(zhàn)時(shí)有助於軍事人員的健康。 希爾曼(m. r. hilleman)等研究人員在史奎伯實(shí)驗(yàn)室工作的發(fā)展出wendell stanley流行性感冒疫苗，經(jīng)由持續(xù)流動離心作用來純化，此方法變成純化病毒疫苗的典範(fàn)，此外，希爾曼(maurice r. hillman)等人根據(jù)沙賓(sabin)的報(bào)告迅速發(fā)展出一種以福馬林殺死由小鼠大腦衍生之非精緻日本b型腦炎疫苗，並可供商業(yè)製造，這種疫苗於1944年及1945年使用於保護(hù)第二次世界大戰(zhàn)進(jìn)行太平洋作戰(zhàn)的軍人。 華特瑞陸軍研究院之研究 希爾曼於1948年加入華特瑞陸軍研究院(walter reed army research labora

13、tories)，第一個任務(wù)是發(fā)展偵測及預(yù)防流行性感冒下一次的全國性大流行，在經(jīng)過展望及回顧病毒學(xué)與血清流行病學(xué)研究後，他發(fā)現(xiàn)流行性感冒病毒之抗原專一性會因時(shí)間而有逐漸或突發(fā)之改變，如今稱為飄變(drift)或變異(shift)。 1957年4月17日紐約時(shí)報(bào)發(fā)表一篇報(bào)導(dǎo)，對香港流行性感冒提出第一個警告，希爾曼與其同事預(yù)測1957年的亞洲流性感冒會在秋天美國學(xué)校開學(xué)時(shí)開始流行，結(jié)果的確如期發(fā)生，於是他們與民間製藥廠合作在感恩節(jié)流行尖峰時(shí)生產(chǎn)了4千萬劑疫苗，給民眾施打後病例數(shù)就急速下降。 在這次呼吸性疾病流行中其病原偶然發(fā)生變異，希爾曼於1951年在leonard wood地區(qū)進(jìn)行流行性感冒的田野

14、研究時(shí)，由非流行性感冒急性呼吸病患體內(nèi)採集到大量血液及咽喉塗抹檢體，由於這個大型團(tuán)隊(duì)研究（加上策略支援）花費(fèi)非常高昂，使得希爾曼必須先完成某些有價(jià)值的研究以找到新成果，他與同事魏諾(j. werner)將新發(fā)病軍人的氣管內(nèi)生長有纖毛的上皮細(xì)胞加以培養(yǎng)，然後接種由該地區(qū)病人採集之咽喉塗抹檢體而得到一種新病毒的三種分離物（3、4 及7型），病毒會持續(xù)增殖，這就是腺病毒的發(fā)現(xiàn)。 發(fā)現(xiàn)腺病毒會引起流行性疾病是希爾曼實(shí)驗(yàn)室的成果，而引起兒童扁桃腺及腺樣組織持續(xù)潛伏性感染的是休諾(robert huebner)實(shí)驗(yàn)室的成就，兩者於1952年同時(shí)完成，恩德斯(enders)於1946年突破性地發(fā)現(xiàn)脊髓灰質(zhì)炎

15、病毒可在胚胎組織細(xì)胞中繁殖，開啟了在細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)病毒的大道，在猴腎臟細(xì)胞生長之死的流行性腺病毒疫苗是由希爾曼實(shí)驗(yàn)室中發(fā)展出，而且於1956年的一個大型控制臨床試驗(yàn)中證明該疫苗有效性達(dá)98%，這正好是發(fā)現(xiàn)病毒四年後的事，死的腺病毒疫苗於1958年取得上市許可證，製造供小兒接種使用。 1930年至1950年間由軍方單位主動發(fā)起及基金會興起而獲得許多對研究的支持，這些單位給予大方的捐贈及資助實(shí)驗(yàn)室如洛克斐勒研究所等實(shí)驗(yàn)室。 在1950年至1985年間，有許多新疫苗開發(fā)、發(fā)展並進(jìn)入臨床試驗(yàn)，少數(shù)疫苗遲至1980年代後期及1990年代才得到許可證，但是在1985年後，新疫苗開發(fā)與許可證取得的案例都急速

16、減少。 現(xiàn)代時(shí)期的疫苗分為全細(xì)胞及次單元細(xì)菌、病毒基因重組次單元、實(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)繁殖病毒之活的及死的全病毒製劑，這整個時(shí)期中大部分疫苗皆由希爾曼實(shí)驗(yàn)室開發(fā)並首度取得許可證，該實(shí)驗(yàn)室中央權(quán)責(zé)之資源具適當(dāng)管理均有利於研究的成功。 細(xì)菌性疫苗 現(xiàn)代時(shí)期的主要細(xì)菌疫苗集中於次單元莢膜多醣製劑（subunit capsular polysaccharide preparations，見表四），然而減毒全細(xì)菌疫苗也有極大進(jìn)展。 肺炎球菌疫苗雖只含有幾種血清型，於1946年首次取得許可證，但是因?yàn)榛前奉愃幬锛翱股氐陌l(fā)明而短期內(nèi)就停止生產(chǎn)該疫苗，雖然此等藥物在根除細(xì)菌性感染上非常有效，但卻未能防止某些原先可有

17、效治療病人的死亡，由於奧斯催恩博士(dr. robert austrain) 的持續(xù)努力而使得肺炎球菌疫苗研究之領(lǐng)域保持活躍，希爾曼等人於1970年代早期開始進(jìn)行肺炎球菌疫苗的研究，結(jié)果發(fā)展出14及23價(jià)之疫苗，分別於1977年及1984年獲得許可證。 表四、現(xiàn)代時(shí)期細(xì)菌莢膜多醣疫苗1950年起持續(xù)研發(fā) 主要疫苗研究為多醣次單元製劑肺炎球菌1945年以前抗體反應(yīng)為類型專一免疫生成性及保護(hù)效價(jià)之標(biāo)記。1946年六價(jià)疫苗取得許可證，但是被抗細(xì)菌製劑取代。1964-1968年有效化學(xué)治療法無法防止死亡，重新進(jìn)行疫苗研究。1977年14價(jià)疫苗獲得許可證。1984年23價(jià)疫苗獲得許可證。腦膜炎球菌196

18、3年磺胺劑抗藥性在軍方產(chǎn)生問題。1969-1972年華特瑞疫苗可行且具保護(hù)作用。1974-1982年疫苗之研發(fā)及獲得許可證：a 1974、c & a-c 1975、a-c-w135-y 1982 病例稀少使得藥廠不感興趣。嗜血桿菌(haemophilus influenzae) 1985年較大兒童使用之多醣疫苗獲得許可證。真實(shí)情況多醣疫苗在較小兒童免疫性不足。1970年代中期發(fā)現(xiàn)、結(jié)合及蛋白質(zhì)激發(fā)新生動物之保護(hù)反應(yīng)。1987-1990年不同之嗜血桿菌結(jié)合疫苗獲得許可證。1992年對所有多醣疫苗進(jìn)行廣泛研究。1998年史克美占公司獲得新型次單元萊姆疫苗之許可證。 繼華特瑞陸軍研究院進(jìn)行以原型疫苗

19、之先驅(qū)性研究之後，希爾曼實(shí)驗(yàn)室應(yīng)軍方的要求對於腦膜炎疫苗的研發(fā)展，遏阻磺胺劑抗藥性的問題及新兵入伍腦膜炎再度發(fā)生之狀況，他們研發(fā)出單價(jià)、雙價(jià)及四價(jià)a、c、w135與y之疫苗並加以評估，且於1974年至1982年間取得許可證。 多醣疫苗特別是嗜血性b型桿菌(haemophilus influenzae b)疫苗在小兒體內(nèi)不會產(chǎn)生免疫性，1960年代晚期或1970年代早期有一位不知名的英雄人物提出一篇早期論文，發(fā)現(xiàn)多醣及蛋白質(zhì)的結(jié)合會激發(fā)t細(xì)胞來幫助剛出生的小動物產(chǎn)生免疫性，於是打開了希爾曼等人及許多生物製劑公司發(fā)展出對小兒高度有效結(jié)合疫苗的大門，此情況一直持續(xù)至今。 目前有幾種非常有效的結(jié)合性嗜

20、血桿菌疫苗已經(jīng)獲得許可證並可在市面上購得，與此相同之結(jié)合技術(shù)現(xiàn)正應(yīng)用於改進(jìn)腦膜炎球菌及肺炎球菌疫苗的免疫力。 重組次單元多生太萊姆病疫苗是一種新疫苗，由史克美占實(shí)驗(yàn)室(smithkline beecham laboratories) 於1998年取得許可證。 病毒性疫苗 抗脊髓灰質(zhì)炎疫苗（見表五）是由國家小兒麻痺基金會贊助支援並給與經(jīng)費(fèi)下進(jìn)行之計(jì)畫所開發(fā)製造出。 表五、現(xiàn)代時(shí)期病毒性疫苗脊髓灰質(zhì)炎1950年 國家基金會支持建立基礎(chǔ)研究，抗體為保護(hù)之標(biāo)記。死疫苗，獼猴腎臟細(xì)胞培養(yǎng)生長及以第一級動力學(xué)進(jìn)行福馬林不活化作用。1955年獲得許可證。問題脊髓灰質(zhì)炎病毒不活化作用不完全引起麻痹，製程改變及

21、放行。效價(jià)易變且低於接受標(biāo)準(zhǔn)。腎臟中存有天生之野生病毒不活化作用之確保。1960年：此時(shí)發(fā)現(xiàn)從前未偵測到之猴脊髓灰質(zhì)炎病毒，sv40?？咕芡耆换罨饔谩?962年：去除sv40病毒。1960年：默克purivax疫苗獲得許可證，純化及標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)之疫苗，因商業(yè)理由而停產(chǎn)?；钜呙纾ǚ怯H神經(jīng)性減毒）。1960年獲得許可證。問題神經(jīng)毒性的纏殘留與回毒。sv40污染去除?；钜呙绯蔀轭A(yù)防脊髓灰質(zhì)炎及由全世界根除之典範(fàn)。 不活化流行性脊髓灰質(zhì)炎疫苗 疫苗效用之得以突破來自恩德斯之脊髓灰質(zhì)炎病毒可在非神經(jīng)組織細(xì)胞培養(yǎng)中繁殖的研究，三價(jià)死的之沙克脊髓灰質(zhì)炎疫苗是使用生長於獼猴腎臟細(xì)胞培養(yǎng)中之病毒製備，於1955

22、年取得許可證，此疫苗立即面臨三個問題：即病毒不活化作用不完全、免疫效價(jià)具高度變異性及希爾曼等人發(fā)現(xiàn)一種新的先天性獼猴多瘤病毒(polyoma virus, sv40)污染，在此之前科學(xué)家無法偵測到該病毒，同時(shí)發(fā)現(xiàn)sv40病毒能對抗脊髓灰質(zhì)炎疫苗中福馬林的完全不活化作用。 sv40病毒是由於希爾曼等人使用取自獼猴的腎臟進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，這些獼猴並未被當(dāng)時(shí)隨處皆有的先天性病毒感染，於是他們選擇並引介非洲cercopithecus猴來避開此問題，發(fā)現(xiàn)由此種猴子得來之腎臟細(xì)胞十分容易讓病毒複製並產(chǎn)生細(xì)胞病理改變，使得研究人員可以偵測到目前尚未能發(fā)現(xiàn)到的病原，特別的是，使用此種細(xì)胞可以讓工作人員偵測到

23、sv40，後來發(fā)現(xiàn)此種病毒會使剛出生的倉鼠產(chǎn)生癌癥。 當(dāng)最終產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)有少量存活的sv40病毒時(shí)，大大中斷這種死的脊髓灰質(zhì)炎疫苗的製造，然而，如以無先天性病毒的cercopithecus猴腎臟細(xì)胞來取代，此問題就很快地獲得解決，努力克服高度變異之效價(jià)使希爾曼等人發(fā)展出一種純化具有精確標(biāo)準(zhǔn)化效價(jià)之脊髓灰質(zhì)炎疫苗(purivax)，此產(chǎn)品於1960年獲得許可證，但是最終因?yàn)樯虡I(yè)上的理由而停產(chǎn)。 口服沙賓脊髓灰質(zhì)炎活疫苗是基於使用非神經(jīng)性脊髓灰質(zhì)炎病毒株製成，在1960年得到許可證，此種疫苗仍然碰到sv40病毒污染的麻煩，但是就死疫苗而言，使用cercopithecus猴腎臟培養(yǎng)則輕易解決了這個問題

24、，至今活疫苗仍然保留微量的神經(jīng)毒性，但極少引起疫苗接種者或與之接觸者之脊髓灰質(zhì)炎，儘管如此，活性脊髓灰質(zhì)炎疫苗是預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎及根除全球性脊髓灰質(zhì)炎病毒的典範(fàn)。 預(yù)防小兒疾病的活疫苗 1957年時(shí)希爾曼等人體認(rèn)到小兒用減毒活疫苗如麻疹、腮腺炎、德國麻疹、水痘及其混合疫苗具有未來發(fā)展的可能性，即使那時(shí)仍然只是個理論上的夢想，然而此觀念的重要性卻對許多小兒病毒性疾病提出簡單的解決方法。 個別小兒活病毒疫苗之研究與發(fā)展（見表六）面臨許多障礙，通常面臨相同問題，其中的障礙為如何發(fā)展製造出大量不同代數(shù)且具商業(yè)品質(zhì)之合格疫苗，以這些疫苗進(jìn)行臨床試驗(yàn)找出可接受之毒性且具適當(dāng)效價(jià)的代數(shù)，通常由最高代數(shù)、最小毒

25、性開始往回追溯，由於沒有動物模式而且沒有減毒標(biāo)記，因此所有試驗(yàn)必須在自願之兒童身上進(jìn)行，詳細(xì)臨床觀察及運(yùn)用判斷力是主要的指引方針，每一種候選疫苗的有效性是以兩次安慰劑控制之效價(jià)試驗(yàn)來證實(shí)，每一種疫苗的安全性確認(rèn)通常以10至20,000位受試兒童及與他們接觸者進(jìn)行測試，適當(dāng)?shù)囊呙绫仨毺峁╅L期保護(hù)作用，混合疫苗裡的個別疫苗須要調(diào)整劑量以維持與單獨(dú)給予時(shí)所產(chǎn)生之最佳免疫反應(yīng)相同，最後，所有疫苗必須在儲藏及供銷時(shí)保持安定，每一種活性病毒疫苗都有個別的問題及解決方法（見表七），以下將會討論到。 表六、現(xiàn)代時(shí)期小兒活病毒疫苗阻礙 目標(biāo)：減毒活疫苗：麻疹、腮腺炎、德國麻疹、水痘、混合疫苗。共同障礙發(fā)現(xiàn)病毒在

26、可接受之細(xì)胞培養(yǎng)中生長。沒有動物模式、沒有減毒標(biāo)記。所有疫苗在兒童身上進(jìn)行試驗(yàn)藉判斷來作決定。製備大量繼代具商業(yè)品質(zhì)之疫苗藉判斷來測試，以減毒最大之疫苗開始，並回溯找出反應(yīng)性及免疫生成性間之平衡點(diǎn)?？茖W(xué)及管理委員會接受研究計(jì)畫結(jié)果（克服反對意見，如水痘）。去除作用避免病毒污染。疫苗之製備及試驗(yàn)規(guī)模龐大且耗時(shí)長久?？刂菩匝芯恐Ｗo(hù)效果。10-20,000位接種者安全性確效。與接種者接觸之安全性。維持保護(hù)性長期。疫苗在儲存及供銷時(shí)之安定性。混合疫苗反應(yīng)性不增加，及配方調(diào)整防止干擾。 表七、現(xiàn)代時(shí)期小兒活性病毒疫苗明顯問題及解決方案 麻疹雞胚細(xì)胞培養(yǎng)。 減少反應(yīng)。與免疫球蛋白同時(shí)使用。進(jìn)一步減毒（無

27、球蛋白）。由培養(yǎng)液中去除雞白血病病毒研發(fā)實(shí)驗(yàn)性無白血病雞群。高度有效性及安全性。腮腺炎雞胚細(xì)胞培養(yǎng)。無神經(jīng)毒性之jerry lynn病毒株。高效價(jià)無反應(yīng)生成性。德國麻疹發(fā)現(xiàn)在鴨細(xì)胞中繁殖。 快速及可靠之減毒作用。不會對容易感染之成年接觸者傳播。兩價(jià)及三價(jià)配方可接受之效價(jià)及反應(yīng)生成性。臨床試驗(yàn)極為成功。主要之小兒免疫原。水痘所有層面1981年以kmcc病毒株製出。應(yīng)用減毒程序時(shí)病毒無法達(dá)到可接受之反應(yīng)性與免疫生成性間的平衡點(diǎn)。由oka病毒株取代。 麻疹疫苗 製備麻疹疫苗重要的是去除在雞蛋裡（提供細(xì)胞培養(yǎng)所需之組織）遍佈的鳥類白血病病毒污染，由於有科學(xué)家培育出無白血病的雞隻而解決了此問題，而原始恩

28、德斯的edmonston b麻疹病毒對於兒童的毒性太大，但如果於開始時(shí)同時(shí)給與麻疹免疫球蛋白就可以減少其毒性，更好的解決方法是希爾曼等人研發(fā)出進(jìn)一步減毒之moraten株的麻疹病毒，無須使用免疫球蛋白，但必須證明改良之moraten病毒亞株其高度有效性及安全性與原始病毒相同。 腮腺炎疫苗 希爾曼實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)jeryl lynn腮腺炎病毒株分離物並加以減毒，得到一種非常適用之無神經(jīng)毒性且具高度免疫生成性的疫苗。 德國麻疹疫苗 希爾曼等人的突破性發(fā)現(xiàn)：德國麻疹可以在細(xì)胞培養(yǎng)鴨胚細(xì)胞中繁殖並且快速而有效地減毒，因而有助於德國麻疹疫苗的發(fā)展，其中一個重要的原因是疫苗病毒對與疫苗接種者接觸的敏感人士無傳染

29、性。 混合麻疹、腮腺炎、德國麻疹疫苗 有關(guān)麻疹、腮腺炎、德國麻疹疫苗(mmr vaccine)混合之兩價(jià)及三價(jià)的配方已經(jīng)發(fā)展出，此種疫苗在各方面皆安全並有效，三價(jià)(mmr) 疫苗成為小兒免疫接種最重要的一部份，並延續(xù)到今日，可節(jié)省許多金錢。 水痘疫苗 希爾曼研發(fā)出kmcc水痘疫苗(varicella vaccine) 的研究時(shí)間超過15年，用來發(fā)展水痘疫苗(chickenpox vaccine)製劑及對所有層面之保護(hù)作用，但是有一點(diǎn)卻辦不到，即減毒之kmcc病毒株程度無法表現(xiàn)可接受之效價(jià)，且反應(yīng)性也不能接受，日本的oka病毒株已成功取代kmcc病毒株並獲得許可證，目前準(zhǔn)備加入三價(jià)之mmr疫苗中

30、。 抗馬瑞克氏雞癌癥活疫苗 馬瑞克氏?。╩areks disease，見表八）是一種發(fā)生於雞的神經(jīng)及內(nèi)臟淋巴瘤，由於生產(chǎn)力降低及屠宰業(yè)者受到責(zé)難而引起養(yǎng)雞業(yè)巨大損失。 伯麥斯特(burmester)與其同事培育的火雞皰疹病毒顯示可對抗與抗原有關(guān)之馬瑞克皰疹病毒，而不會引起雞隻生病，希爾曼實(shí)驗(yàn)室於1971年發(fā)展出受感染之冷凍細(xì)胞馬瑞克疫苗並獲得許可證，而於1975年發(fā)展出純化乾燥之病毒疫苗，經(jīng)過長時(shí)間及複雜的研究證明對於雞隻能產(chǎn)生保護(hù)性效價(jià)且十分安全，同時(shí)對於人類攝食亦無妨礙，此等疫苗之許可證已經(jīng)獲得美國農(nóng)業(yè)部頒發(fā)，這是世界上第一張領(lǐng)有許可證之抗癌癥疫苗，對於養(yǎng)雞業(yè)的經(jīng)濟(jì)造成革命性改變。 表八、

31、現(xiàn)代時(shí)期默瑞克氏雞癌癥疫苗 默瑞克氏病，由一種皰疹病毒引起雞之神經(jīng)淋巴瘤或內(nèi)臟淋巴瘤（連續(xù)麻痹），由於生產(chǎn)力降低（蛋與肉）及屠宰者受到責(zé)難使得養(yǎng)雞業(yè)經(jīng)濟(jì)損失龐大。 1970年柏邁斯特(burmester)發(fā)現(xiàn)火雞皰疹病毒之抗原與雞默瑞克氏病有關(guān)。柏邁斯特病毒不會引起雞之疾病反而可保護(hù)雞隻對抗默瑞克氏疾病。經(jīng)過長久及繁複的研究建立對雞之安全性與有效性，及對人攝取食物之安全性，希爾曼實(shí)驗(yàn)室研發(fā)出兩種高度有效之疫苗。1971年冷凍之受感染細(xì)胞疫苗。1975年純化無病毒疫苗，乾燥。此為世界上第一張取得許可證可對抗癌癥之疫苗。使得養(yǎng)雞業(yè)之經(jīng)濟(jì)產(chǎn)生革命性改變。 抗肝炎疫苗的發(fā)現(xiàn)及發(fā)展 希爾曼實(shí)驗(yàn)室於196

32、0年代早期展開大型實(shí)驗(yàn)室及田野研究想要找出引起a型及b型肝炎之病毒。 a型肝炎病毒及疫苗（見表九） 1973年希爾曼等人發(fā)表早期在狨(marmosets)這種動物體內(nèi)分離出a型肝炎病毒之cr326病毒株，最近發(fā)現(xiàn)鄧哈特(freidrich deinhardt)從前在狨身上分離出的gb病毒是黃病毒屬(flavivirus)，而非a型肝炎病毒，gb病毒的發(fā)現(xiàn)具有特殊意義，因?yàn)楸萩型肝炎黃病毒屬的發(fā)現(xiàn)要早，由於希爾曼實(shí)驗(yàn)室對a型肝炎病毒及a型肝炎特性完整的研究，使得科學(xué)家可能寫下傳染性肝炎新的一章，1978年希爾曼等人發(fā)展及報(bào)告一種具高度保護(hù)性福馬林處理之病毒株疫苗，使用由受感染的狨肝臟純化出的病毒

33、製造，1979年希爾曼實(shí)驗(yàn)室的一個突破性發(fā)現(xiàn)：a型肝炎病毒可在細(xì)胞培養(yǎng)中繁殖，打開了製造人用疫苗之大門，此種殺死病毒疫苗（依據(jù)1978年狨肝臟原型製造程序製造）在控制之田野研究中證明極為安全並具保護(hù)性，該疫苗於1994年取得許可證，如今已在世界許多地區(qū)進(jìn)行例行接種，該實(shí)驗(yàn)室也繼續(xù)追求肝臟病毒疫苗的長期發(fā)展。 表九、現(xiàn)代時(shí)期a型肝炎病毒疫苗 1960年代早期開始進(jìn)行尋找肝炎病毒之計(jì)畫。1973年在狨身上發(fā)現(xiàn)cr326 a型肝炎病毒（deinhardts gb病毒，原先認(rèn)為引起a型肝炎，最近顯示是黃病毒、肝炎、非a非b型肝炎（早於c型肝炎）的最早例子）。1978年高度有效福馬林殺死感染肝細(xì)胞得來之

34、a型肝炎原型疫苗，在狨及黑猩猩研究中顯示其安全且有效。1979年在細(xì)胞培養(yǎng)中獲得突破性發(fā)展，開啟人用疫苗之大門。1991年細(xì)胞培養(yǎng)生長之福馬林殺死疫苗，使用狨肝臟疫苗程序製備。1992年安全性及有效性。1994年獲得許可證。 b型肝炎病毒疫苗（見表十） 由血漿製成之b型肝炎疫苗 1965年布倫柏格及普林斯(blumberg and prince)發(fā)現(xiàn)人類b型肝炎病毒帶原者血液內(nèi)存有該病毒的表面抗原，於是開啟發(fā)展b型肝炎疫苗之大門，由資料幾乎是零開始，希爾曼實(shí)驗(yàn)室於1968年使用由人類帶原者血漿純化得來之表面抗原，作為b型肝炎候選疫苗，並探討其純化、生產(chǎn)、不活化、安全性及有效性，結(jié)果所有過程皆成

35、功。b型肝炎病毒不會在體外繁殖，因此在每一個多重不活化步驟以替代病毒之不活化作用的檢驗(yàn)，來作為疫苗安全性的保證，免除遭受存在於人類血液中b型肝炎病毒及其他所有可能微生物種類的感染。此疫苗的高度有效保護(hù)性已經(jīng)得到證明，首先在黑猩猩之病毒攻擊研究，接著在1980年進(jìn)行人體控制臨床試驗(yàn)，此疫苗證明不但安全而且具有高度保護(hù)性，最後於1981年獲得許可證供一般人接種使用，此時(shí)已經(jīng)是希爾曼等人首先展開大規(guī)模研究後的13年了。 表十、現(xiàn)代時(shí)期b型病毒疫苗 1960年代早期尋找b型肝炎病毒。血漿製造之疫苗1965 blumberg and prince在帶原者血中發(fā)現(xiàn)b型肝炎病毒之表面抗原1968年開始對疫苗

36、之純化、不活化、安全性及有效性進(jìn)行測試。1980年有效性獲得證實(shí)。1981年獲得許可證（經(jīng)過13年的研究）。重組酵母菌疫苗1975年與rutter and hall開始合作研究發(fā)展載體表現(xiàn)之b型肝炎表面抗原。1982年重組酵母菌中之表現(xiàn)系統(tǒng)，進(jìn)行抗原萃取、純化並取代血漿得來之抗原。1986年重組疫苗獲得許可證。肝炎疫苗代表世界上第一種次單元疫苗。世界上第一張得到許可證之抗人類癌癥疫苗。世界上第一種重組表現(xiàn)之疫苗。 重組表現(xiàn)疫苗 此時(shí)合格之人體帶原者血漿的供應(yīng)開始無法符合市場的需求，1975年希爾曼與加州大學(xué)及華盛頓大學(xué)的盧特博士(dr. rutter)與霍爾博士(dr. holl)合作發(fā)展出一種基因重組表現(xiàn)系統(tǒng)來生產(chǎn)b型肝炎抗原，於酵母菌中進(jìn)行之基因重組表現(xiàn)達(dá)到，而希爾曼實(shí)驗(yàn)室卻得到最佳之收穫及表現(xiàn)作用，純化之重組抗原取代了血漿製造疫苗之抗原，且所製造出的產(chǎn)品與血漿製劑同樣效果，基因重組