選修1第五講DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)教材專題5

1、選修1高考成功方案 第1步高考成功方案 第2步高考成功方案 第3步第五講返回返回一、一、dna的粗提取和鑒定的粗提取和鑒定1dna的粗提取原理的粗提取原理(1)根據(jù)根據(jù)dna的溶解性，的溶解性，dna和蛋白質(zhì)等其他成分在不同和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的濃度的nacl溶液中溶解度不同。如圖表示溶液中溶解度不同。如圖表示dna在在nacl溶液中的溶解度隨著溶液中的溶解度隨著nacl溶液濃度變化而變化的曲線。溶液濃度變化而變化的曲線。(2)根據(jù)根據(jù)dna ，可用，可用95%的冷酒精析出的冷酒精析出dna。(3)根據(jù)根據(jù)dna對對 的耐受性。的耐受性。不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液酶、高溫和洗滌劑酶、

2、高溫和洗滌劑返回2dna的提純的提純(1)方案一：利用方案一：利用dna在在 不不同的原理，通過控制同的原理，通過控制nacl溶液的濃度除去雜質(zhì)。溶液的濃度除去雜質(zhì)。(2)方案二：直接在方案二：直接在dna濾液中加入濾液中加入 ，其中的，其中的 能夠分解蛋白質(zhì)。能夠分解蛋白質(zhì)。(3)方案三：將方案三：將dna濾液放在濾液放在 的恒溫水浴箱中的恒溫水浴箱中保溫保溫1015 min。木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶嫩肉粉嫩肉粉不同濃度的不同濃度的nacl溶液中溶解度溶液中溶解度6075返回3dna的鑒定的鑒定(1)所用試劑：所用試劑： 。(2)處理方法：將試劑與處理方法：將試劑與dna溶液混合后溶液混合后 5

3、 min。(3)現(xiàn)象：溶液顏色變現(xiàn)象：溶液顏色變 。二苯胺試劑二苯胺試劑沸水加熱沸水加熱藍(lán)藍(lán)返回二、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增二、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段片段(1)pcr原理：原理： 。dna的熱變性的熱變性dna緩慢緩慢 ，分離的，分離的dna鏈又重新結(jié)合成雙鏈又重新結(jié)合成雙鏈鏈dna冷卻冷卻返回(2)pcr的反應(yīng)過程：的反應(yīng)過程：變性：當(dāng)溫度上升到變性：當(dāng)溫度上升到 以上時，雙鏈以上時，雙鏈dna解聚解聚為為 。復(fù)性：溫度下降到復(fù)性：溫度下降到50左右時，兩種左右時，兩種 通過堿基通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈互補(bǔ)配對與兩條單鏈dna結(jié)合。結(jié)合。延伸：溫度上升到延伸：溫度上升到 左右時，溶液中的左

4、右時，溶液中的4種脫氧種脫氧核苷酸核苷酸(a，t，c，g)在在 的作用下，根據(jù)的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的堿基互補(bǔ)配對原則合成新的dna鏈。鏈。90單鏈單鏈引物引物72dna聚合酶聚合酶返回pcr反應(yīng)的結(jié)果：反應(yīng)的結(jié)果：dna聚合酶只能特異地復(fù)制聚合酶只能特異地復(fù)制 的的dna序列，使這段固定長度的序列呈序列，使這段固定長度的序列呈 擴(kuò)增。擴(kuò)增。處于兩個引物之間處于兩個引物之間指數(shù)指數(shù)返回三、血紅蛋白的提取和分離實驗三、血紅蛋白的提取和分離實驗1凝膠色譜法的原理凝膠色譜法的原理凝膠色譜法凝膠色譜法(也稱分配色譜法也稱分配色譜法)是根據(jù)是根據(jù)將不同分子分離開來，即：將不同分子分離開來，

5、即： 的蛋白的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長，移動速度質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長，移動速度 ；而而 蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部，則移動速蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部，則移動速度度 ，從而使相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。，從而使相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。相對分子質(zhì)量大小相對分子質(zhì)量大小大分子大分子較慢較慢相對分子質(zhì)量較小相對分子質(zhì)量較小較快較快返回2血紅蛋白分離實驗操作血紅蛋白分離實驗操作返回返回考點一考點一dna的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定考情考情解讀解讀 本部分在高考中所占的分值不大，近三年來的本部分在高考中所占的分值不大，近三年來的考查有下降的趨勢。命題以簡答題的形式為主，考

6、考查有下降的趨勢。命題以簡答題的形式為主，考查點著重于查點著重于dna粗提取的原理及操作步驟，關(guān)于粗提取的原理及操作步驟，關(guān)于dna在不同濃度在不同濃度nacl溶液中的溶解與析出，溶液中的溶解與析出，dna的的鑒定，還將是今后高考的熱點之一。鑒定，還將是今后高考的熱點之一。返回做一題做一題例例1回答下列有關(guān)回答下列有關(guān)“dna的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定”實驗的問題。實驗的問題。(1)下列有關(guān)下列有關(guān)“dna的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定”實驗原理的敘述正確實驗原理的敘述正確的的是是()adna在在nacl溶液中的溶解度，隨溶液中的溶解度，隨nacl溶液濃度的降溶液濃度的降低而減小低而減小b利用

7、利用dna不溶于酒精的性質(zhì)，可除去細(xì)胞中溶于酒不溶于酒精的性質(zhì)，可除去細(xì)胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的精的物質(zhì)而得到較純的dnacdna是大分子有機(jī)物，不溶于水而易溶于有機(jī)溶劑是大分子有機(jī)物，不溶于水而易溶于有機(jī)溶劑d在沸水中，在沸水中，dna遇二苯胺會出現(xiàn)紫色反應(yīng)遇二苯胺會出現(xiàn)紫色反應(yīng)返回(2)由于雞血較難找到，某學(xué)生試圖用人血代替，結(jié)果沒由于雞血較難找到，某學(xué)生試圖用人血代替，結(jié)果沒有成功，其原因最可能是有成功，其原因最可能是()a操作方法不對操作方法不對 b人血含人血含dna太少太少cnacl溶液濃度太高溶液濃度太高 d加二苯胺太少加二苯胺太少返回(3)下圖為該實驗過程中的一些重要操作示

8、意圖：下圖為該實驗過程中的一些重要操作示意圖：返回正確的操作順序是正確的操作順序是_。上圖上圖c、e步驟都加入蒸餾水，但其目的不同，分別步驟都加入蒸餾水，但其目的不同，分別是是_和和_。上圖上圖a步驟中所用酒精必須是經(jīng)過步驟中所用酒精必須是經(jīng)過_才能使用，才能使用，該步驟的目的是該步驟的目的是_。為鑒定為鑒定a中所得到的絲狀物的主要成分為中所得到的絲狀物的主要成分為dna，可滴，可滴加加_試劑，沸水浴，如果出現(xiàn)試劑，沸水浴，如果出現(xiàn)_則該絲狀則該絲狀物的主要成分為物的主要成分為dna。返回解析解析 (1)dna在在nacl溶液中的溶溶液中的溶解規(guī)律如右圖所示。解規(guī)律如右圖所示。dna不溶于酒不

9、溶于酒精等有機(jī)溶劑，在沸水浴條件下，精等有機(jī)溶劑，在沸水浴條件下，dna遇二苯胺后呈現(xiàn)藍(lán)色。遇二苯胺后呈現(xiàn)藍(lán)色。(2)由于人屬于哺乳動物，成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核、線由于人屬于哺乳動物，成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核、線粒體，所以幾乎不含粒體，所以幾乎不含dna，很難提取到，很難提取到dna。返回(3)dna粗提取的過程為：紅細(xì)胞加蒸餾水，漲破后過濾粗提取的過程為：紅細(xì)胞加蒸餾水，漲破后過濾用用2 mol/l nacl溶解溶解過濾除去不溶雜質(zhì)過濾除去不溶雜質(zhì)加蒸餾水，析出加蒸餾水，析出含含dna的黏稠物的黏稠物過濾過濾黏稠物溶解在黏稠物溶解在2 mol/l nacl中中過濾過濾溶于溶于95%酒精進(jìn)一

10、步提純，所以根據(jù)圖示及以上分酒精進(jìn)一步提純，所以根據(jù)圖示及以上分析，正確操作順序為析，正確操作順序為cbeda。返回答案答案 (1)b(2)b(3)cbeda加速血細(xì)胞的破裂降低加速血細(xì)胞的破裂降低nacl溶液的濃度，使溶液的濃度，使dna析出析出充分預(yù)冷提取含雜質(zhì)較少充分預(yù)冷提取含雜質(zhì)較少(或較純凈或較純凈)的的dna(4)二苯胺二苯胺(或甲基綠或甲基綠)藍(lán)色藍(lán)色(綠色綠色)返回鏈一串鏈一串1dna粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較試劑試劑濃度濃度用途用途原理原理nacl溶液溶液2 mol/l溶解溶解dnadna在在nacl溶液中的溶液中的溶解度隨溶

11、液濃度的變?nèi)芙舛入S溶液濃度的變化而改變，溶解度在化而改變，溶解度在2 mol/l時最大、在時最大、在0.14 mol/l時最小時最小0.14mol/l析出析出dna2 mol/l鑒定時的溶劑鑒定時的溶劑返回試劑試劑濃度濃度用途用途原理原理酒精酒精95%(體積體積分?jǐn)?shù)分?jǐn)?shù))除去雜除去雜質(zhì)以提質(zhì)以提純純dnadna不溶于酒精，但是不溶于酒精，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精以溶于酒精二苯二苯胺胺/鑒定劑鑒定劑dna遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)會變藍(lán)色會變藍(lán)色檸檬檸檬酸鈉酸鈉0.03g/ml抗凝劑抗凝劑除去血液中的鈣離子，除去血液中的鈣離子，防止血液凝固防止血液凝固返回2實

12、驗步驟中實驗步驟中2次加入蒸餾水的目的次加入蒸餾水的目的第一次加入是使雞血細(xì)胞吸水漲破，第二次是稀釋第一次加入是使雞血細(xì)胞吸水漲破，第二次是稀釋nacl溶液至溶液至0.14 mol/l，從而析出，從而析出dna。返回3實驗中實驗中4次過濾的比較次過濾的比較第一次過第一次過濾濾第二次過濾第二次過濾第三次過濾第三次過濾 第四次過濾第四次過濾濾液濾液中中含含dna的的核物質(zhì)核物質(zhì)dna溶于溶于0.14 mol/l nacl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)dna 紗布紗布上上細(xì)胞膜、細(xì)胞膜、核膜等殘核膜等殘片片不溶于不溶于2 mol/l nacl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)dna不溶于不溶于2 mol/lnacl溶液的雜

13、質(zhì)溶液的雜質(zhì)返回第一次第一次過濾過濾第二次過濾第二次過濾第三次過濾第三次過濾第四次過濾第四次過濾過濾前過濾前加入的加入的物質(zhì)物質(zhì)蒸餾水蒸餾水nacl溶液溶液蒸餾水蒸餾水nacl溶液溶液過濾的過濾的目的目的去除細(xì)去除細(xì)胞膜、胞膜、核膜等核膜等雜質(zhì)雜質(zhì)去除不溶于去除不溶于2mol/l nacl的雜質(zhì)的雜質(zhì)去除溶于去除溶于0.14 mol/l nacl溶液溶液的雜質(zhì)的雜質(zhì)去除不溶于去除不溶于2 mol/l nacl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)返回關(guān)鍵一點關(guān)鍵一點(1)雞血經(jīng)濟(jì)且易制得，雞血中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞都具有雞血經(jīng)濟(jì)且易制得，雞血中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞都具有細(xì)胞核，含大量細(xì)胞核，含大量dna。(2)甲基綠可

14、將甲基綠可將dna染成綠色且不需水浴加熱，二苯胺鑒染成綠色且不需水浴加熱，二苯胺鑒定定dna屬于顏色反應(yīng)，需要沸水浴加熱屬于顏色反應(yīng)，需要沸水浴加熱5 min，可使，可使dna呈藍(lán)色。呈藍(lán)色。(3)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變成淺藍(lán)色，二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變成淺藍(lán)色，影響鑒定效果。影響鑒定效果。返回通一類通一類1dna粗提取的實驗材料中有三次過濾：粗提取的實驗材料中有三次過濾：(1)過濾用蒸過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液；餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液；(2)過濾含黏稠物的過濾含黏稠物的0.14 mol/l nacl溶液；溶液；(3)過濾溶解有過濾溶解有dna的的2 mol/l

15、nacl溶液。以上三次過濾分別為了獲得溶液。以上三次過濾分別為了獲得()a含核物質(zhì)的濾液、紗布上的黏稠物、含含核物質(zhì)的濾液、紗布上的黏稠物、含dna的濾的濾 液液b含核物質(zhì)的濾液、濾液中含核物質(zhì)的濾液、濾液中dna黏稠物、含黏稠物、含dna的的 濾液濾液返回c含核物質(zhì)的濾液、濾液中含核物質(zhì)的濾液、濾液中dna黏稠物、紗布上的黏稠物、紗布上的 dnad含較純的含較純的dna濾液、紗布上的黏稠物、含濾液、紗布上的黏稠物、含dna的的 濾液濾液返回解析：解析：用蒸餾水稀釋雞血細(xì)胞液，使血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核用蒸餾水稀釋雞血細(xì)胞液，使血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核膜破裂，釋放出核物質(zhì)，此時過濾只能得到含膜破裂，釋放出

16、核物質(zhì)，此時過濾只能得到含dna和其他和其他物質(zhì)如蛋白質(zhì)的濾液，這種濾液必須經(jīng)過實驗中其他步驟物質(zhì)如蛋白質(zhì)的濾液，這種濾液必須經(jīng)過實驗中其他步驟相繼處理，方能得到較純的相繼處理，方能得到較純的dna。dna在在0.14 mol/l nacl溶液中溶解度最低，成絲狀黏稠物，可經(jīng)過濾留在紗布上。溶液中溶解度最低，成絲狀黏稠物，可經(jīng)過濾留在紗布上。答案：答案： a返回考點二考點二用用pcr技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增dna片段片段考情考情解讀解讀 本部分內(nèi)容在近幾年高中命題中極少出現(xiàn)，本部分內(nèi)容在近幾年高中命題中極少出現(xiàn)，但是但是pcr技術(shù)作為前沿科技可能為今后高考提技術(shù)作為前沿科技可能為今后高考提供命題的材料

17、和情景出現(xiàn)，預(yù)計供命題的材料和情景出現(xiàn)，預(yù)計2013年高考可年高考可能與基因工程聯(lián)系考查其原理及主要的操作要能與基因工程聯(lián)系考查其原理及主要的操作要領(lǐng)。領(lǐng)。返回做一題做一題例例2pcr(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)是一項在生物體外復(fù)制技術(shù)是一項在生物體外復(fù)制特定的特定的dna片段的核酸合成技術(shù)，下圖表示合成過程，請片段的核酸合成技術(shù)，下圖表示合成過程，請據(jù)圖分析回答：據(jù)圖分析回答：返回(1)a過程高溫使過程高溫使dna變性解旋，對該過程的原理敘述正確變性解旋，對該過程的原理敘述正確的是的是_。a該過程用到耐高溫的解旋酶破壞氫鍵該過程用到耐高溫的解旋酶破壞氫鍵b該過程用到限制酶破壞磷酸二酯

18、鍵該過程用到限制酶破壞磷酸二酯鍵c該過程不需要解旋酶的作用該過程不需要解旋酶的作用d該過程與人體細(xì)胞的過程完全相同該過程與人體細(xì)胞的過程完全相同返回(2)c過程要用到的酶是耐高溫的過程要用到的酶是耐高溫的_。這種酶在高溫。這種酶在高溫下仍保持活性，因此在下仍保持活性，因此在pcr擴(kuò)增時可以擴(kuò)增時可以_加入，加入，_(需要需要/不需要不需要)再添加。再添加。pcr反應(yīng)除反應(yīng)除提供酶外，還需要滿足的基本條件有：提供酶外，還需要滿足的基本條件有：_。(3)如果把模板如果把模板dna的兩條鏈用的兩條鏈用15n標(biāo)記，游離的脫氧核苷標(biāo)記，游離的脫氧核苷酸不做標(biāo)記，控制酸不做標(biāo)記，控制“945572”溫度循

19、環(huán)溫度循環(huán)3次，次，則在形成的子代則在形成的子代dna中含有中含有15n標(biāo)記的標(biāo)記的dna占占_。返回解析解析 (1)高溫所起的作用類似于解旋酶，使雙鏈高溫所起的作用類似于解旋酶，使雙鏈dna變變?yōu)閱捂?。為單鏈?2)c過程是過程是pcr技術(shù)的延伸階段，當(dāng)系統(tǒng)溫度上技術(shù)的延伸階段，當(dāng)系統(tǒng)溫度上升到升到72左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在耐高溫的左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在耐高溫的dna聚合酶的作用下合成新的聚合酶的作用下合成新的dna鏈。這種鏈。這種dna聚合酶在高溫聚合酶在高溫下不變性，所以一次性加入即可。下不變性，所以一次性加入即可。(3)pcr技術(shù)遵循半保留技術(shù)遵循半保留復(fù)制的特點。經(jīng)過

20、三次循環(huán)，共產(chǎn)生復(fù)制的特點。經(jīng)過三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個個dna分子，其中分子，其中有有2個個dna分子含有分子含有15n標(biāo)記。標(biāo)記。返回答案答案 (1)c(2)dna聚合酶一次不需要聚合酶一次不需要dna模板、模板、兩種引物、四種脫氧核苷酸，通過控制溫度使兩種引物、四種脫氧核苷酸，通過控制溫度使dna復(fù)制在復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行體外反復(fù)進(jìn)行(3)25%返回鏈一串鏈一串1pcr過程過程(1)變性：變性：當(dāng)溫度上升到當(dāng)溫度上升到90以上時，雙鏈以上時，雙鏈dna解聚為單鏈。解聚為單鏈。返回(2)復(fù)性：復(fù)性：溫度下降到溫度下降到50左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單

21、鏈條單鏈dna結(jié)合。結(jié)合。返回(3)延伸：延伸：溫度上升到溫度上升到72左右，溶液中的四種脫氧核苷酸左右，溶液中的四種脫氧核苷酸(a、t、c、g)在在dna聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的對原則合成新的dna鏈。鏈。返回2pcr擴(kuò)增技術(shù)和擴(kuò)增技術(shù)和dna復(fù)制的比較復(fù)制的比較細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)dna復(fù)制復(fù)制pcr不不同同點點解旋解旋解旋酶，邊解旋邊解旋酶，邊解旋邊復(fù)制復(fù)制80100高溫解旋，高溫解旋，雙鏈完全分開雙鏈完全分開酶酶解旋酶，解旋酶，dna聚合聚合酶，酶，dna連接酶連接酶taq dna聚合酶聚合酶引物引物rnadna或或rna返回細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)dna

22、復(fù)制復(fù)制pcr不不同同點點子鏈子鏈合成合成一條鏈連續(xù)一條鏈連續(xù)(先導(dǎo)鏈先導(dǎo)鏈)，另一條鏈，另一條鏈不連續(xù)，先合成片段，再由不連續(xù)，先合成片段，再由dna連接酶連接連接酶連接(滯后鏈滯后鏈)兩條子兩條子鏈均連鏈均連續(xù)合成續(xù)合成相同點相同點提供提供dna模板；模板；四種脫氧核苷酸做原料；四種脫氧核苷酸做原料；子鏈延伸的方向都是從子鏈延伸的方向都是從5端到端到3端端返回關(guān)鍵一點關(guān)鍵一點若沒有若沒有pcr儀，可進(jìn)行水浴擴(kuò)增儀，可進(jìn)行水浴擴(kuò)增dna，設(shè)置，設(shè)置3個恒溫水浴鍋，溫度分別為個恒溫水浴鍋，溫度分別為94、55和和72，在，在3個水浴個水浴鍋中依據(jù)鍋中依據(jù)pcr儀的處理時間來回轉(zhuǎn)移儀的處理時間來

23、回轉(zhuǎn)移pcr反應(yīng)的微量離心反應(yīng)的微量離心管即可。管即可。返回通一類通一類2標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)的pcr過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次是這三大步需要的溫度依次是 ()a92、50、72b72、50、92c50、92、72 d80、50、72返回解析：解析：當(dāng)溫度上升到當(dāng)溫度上升到90(9096)以上時，雙鏈以上時，雙鏈dna解解聚為單鏈，稱之為變性；當(dāng)溫度下降到聚為單鏈，稱之為變性；當(dāng)溫度下降到50(4060)左左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈dna結(jié)合；結(jié)合；當(dāng)溫度上升到當(dāng)溫度上升到72(7

24、075)左右時，溶液中的四種脫氧左右時，溶液中的四種脫氧核苷酸核苷酸(a、t、c、g)在在taqdna聚合酶的作用下，根據(jù)聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的堿基互補(bǔ)配對原則合成新的dna鏈，稱為延伸。鏈，稱為延伸。答案：答案： a返回3下圖是哪次循環(huán)的產(chǎn)物下圖是哪次循環(huán)的產(chǎn)物 ()a第一次循環(huán)第一次循環(huán) b第三次循環(huán)第三次循環(huán)c第二次循環(huán)第二次循環(huán) d第四次循環(huán)第四次循環(huán)返回解析：解析：在在pcr反應(yīng)中，以引物為標(biāo)記，第一次循環(huán)時，反應(yīng)中，以引物為標(biāo)記，第一次循環(huán)時，以加入的以加入的dna為模板，兩條為模板，兩條dna鏈可分別由引物鏈可分別由引物和引和引物物與其結(jié)合并在與其結(jié)合并在d

25、na聚合酶的作用下延伸，所以形成聚合酶的作用下延伸，所以形成的每個子的每個子dna中只有一種引物；從第二次循環(huán)開始，上中只有一種引物；從第二次循環(huán)開始，上次產(chǎn)生的次產(chǎn)生的dna分子又可作為模板參與反應(yīng)，所以會形成分子又可作為模板參與反應(yīng)，所以會形成dna分子兩端均含引物的情況。分子兩端均含引物的情況。答案：答案：a返回考點三考點三血紅蛋白的提取和分離血紅蛋白的提取和分離考情考情解讀解讀 本考點內(nèi)容屬本考點內(nèi)容屬生物技術(shù)實踐生物技術(shù)實踐中難點之一，中難點之一，近年高考多有涉及，考查點多圍繞血紅蛋白提取過近年高考多有涉及，考查點多圍繞血紅蛋白提取過程及分離原理、凝膠色譜法、透析原理及電泳法純程及分

26、離原理、凝膠色譜法、透析原理及電泳法純化蛋白質(zhì)等，題目難度相對較大，但一般不涉及凝化蛋白質(zhì)等，題目難度相對較大，但一般不涉及凝膠柱制作及裝填過程操作，膠柱制作及裝填過程操作，2013年備考應(yīng)格外關(guān)注。年備考應(yīng)格外關(guān)注。返回做一題做一題 例例3紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的，血紅蛋白的主要功能是攜帶由血紅蛋白完成的，血紅蛋白的主要功能是攜帶o2或或co2。我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進(jìn)行實驗，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進(jìn)行實驗，來提取和分離血紅蛋白。根據(jù)材料回答下列問題：來提取和分離血紅蛋白。根據(jù)

27、材料回答下列問題：(1)實驗前取新鮮血液，要在采血器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，實驗前取新鮮血液，要在采血器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。加入取血回來，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。加入檸檬酸鈉的目的是檸檬酸鈉的目的是_。返回(2)在對樣品進(jìn)行處理時，主要包括在對樣品進(jìn)行處理時，主要包括_、血紅蛋白的、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中透析技術(shù)釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中透析技術(shù)的原理是的原理是_。(3)同學(xué)甲利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分同學(xué)甲利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，在電泳過程中，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素

28、包括蛋離，在電泳過程中，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素包括蛋白質(zhì)分子的白質(zhì)分子的_、_以及分子的形狀等。以及分子的形狀等。(4)同學(xué)乙利用凝膠色譜法進(jìn)行血紅蛋白的分離同學(xué)乙利用凝膠色譜法進(jìn)行血紅蛋白的分離(如圖一如圖一)，他在操作中加樣的正確順序是他在操作中加樣的正確順序是_，在執(zhí)行圖一中，在執(zhí)行圖一中所示操作時，色譜柱下端連接的尼龍管應(yīng)該所示操作時，色譜柱下端連接的尼龍管應(yīng)該_(打開或關(guān)閉打開或關(guān)閉)。返回(5)圖二、圖三分別是同學(xué)甲、乙利用同一種樣品分離得到圖二、圖三分別是同學(xué)甲、乙利用同一種樣品分離得到的結(jié)果，則圖三中與圖二中蛋白質(zhì)的結(jié)果，則圖三中與圖二中蛋白質(zhì)p對應(yīng)的是對應(yīng)的是_。返回解析解

29、析 (1)加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固。加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固。(2)對樣對樣品的處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅品的處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中透析的原理是小分子可以自蛋白溶液、透析等步驟。其中透析的原理是小分子可以自由進(jìn)出透析袋由進(jìn)出透析袋(半透膜半透膜)，而大分子不能通過。，而大分子不能通過。(3)電泳時，電泳時，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素有蛋白質(zhì)分子大小、帶電性質(zhì)影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素有蛋白質(zhì)分子大小、帶電性質(zhì)及分子的形狀等。及分子的形狀等。(4)正確的加樣順序可依據(jù)樣品在色譜柱正確的加樣順序可依據(jù)樣品在色譜柱及凝

30、膠層中的滲入量進(jìn)行分析，可以得出是及凝膠層中的滲入量進(jìn)行分析，可以得出是；同；同時進(jìn)行時進(jìn)行所示環(huán)繞加樣時，應(yīng)打開下出口。所示環(huán)繞加樣時，應(yīng)打開下出口。(5)sds凝膠電凝膠電返回泳裝置是垂直的裝置，此種電泳方法主要取決于蛋白質(zhì)分泳裝置是垂直的裝置，此種電泳方法主要取決于蛋白質(zhì)分子量的大小，與電荷無關(guān)，同時加樣在子量的大小，與電荷無關(guān)，同時加樣在“”極，通電后，極，通電后，樣品蛋白質(zhì)向樣品蛋白質(zhì)向“”極移動，分子量相對小的，移動距離極移動，分子量相對小的，移動距離大，因此從圖二的電泳結(jié)果分析，大，因此從圖二的電泳結(jié)果分析，p比比n、m移向移向“”距距離大，說明離大，說明p的分子量相對比較小，因

31、此洗脫出來的時間的分子量相對比較小，因此洗脫出來的時間比較長，符合圖三中的丙。比較長，符合圖三中的丙。返回答案答案 (1)防止血液凝固防止血液凝固(2)紅細(xì)胞的洗滌小分子紅細(xì)胞的洗滌小分子可以自由進(jìn)出透析袋可以自由進(jìn)出透析袋(半透膜半透膜)，而大分子不能通過，而大分子不能通過(3)大小帶電性質(zhì)大小帶電性質(zhì)(4)打開打開(5)丙丙返回鏈一串鏈一串1dna與蛋白質(zhì)提取的比較與蛋白質(zhì)提取的比較提取提取物質(zhì)物質(zhì)提取提取方法方法提取原理提取原理步驟步驟dna鹽析鹽析法法在不同濃度的在不同濃度的nacl溶液中溶解溶液中溶解度不同；度不同；不溶于酒精，不溶于酒精，但某些化合物溶但某些化合物溶于酒精于酒精溶解

32、在溶解在2 mol/l的的nacl的溶液中；的溶液中；nacl溶液加水稀釋溶液加水稀釋0.14 mol/l，使，使dna 析出、過析出、過濾；濾；加入冷酒精析出加入冷酒精析出返回提取提取物質(zhì)物質(zhì)提取方法提取方法提取原理提取原理步驟步驟血紅血紅蛋白蛋白凝膠色譜凝膠色譜法、電泳法、電泳法法根據(jù)相對分子量的大??；根據(jù)相對分子量的大小；各種分子帶電性質(zhì)的差各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小、性異以及分子本身大小、性狀的不同狀的不同樣品處理；樣品處理；粗提?。淮痔崛。患兓?；純化；純度鑒定純度鑒定返回2實驗結(jié)果的分析與評價實驗結(jié)果的分析與評價返回項目項目分析分析凝膠色譜凝膠色譜柱的裝填柱的裝填放一支與

33、凝膠柱垂直的日光燈放一支與凝膠柱垂直的日光燈直接檢查直接檢查加入大分子有色物質(zhì)如藍(lán)色葡聚糖加入大分子有色物質(zhì)如藍(lán)色葡聚糖2 000或紅色葡聚糖，若色帶均勻、狹窄、或紅色葡聚糖，若色帶均勻、狹窄、平整平整裝填成功裝填成功血紅蛋血紅蛋白的分離白的分離血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨洗脫液緩慢流出隨洗脫液緩慢流出分離成功分離成功返回關(guān)鍵一點關(guān)鍵一點 (1)調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例可以制得不同調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例可以制得不同ph范圍的緩沖液。范圍的緩沖液。 它是模擬生物體內(nèi)各種生化反應(yīng)的一個基本保障。它是模擬生物體內(nèi)各種生化反應(yīng)的一個基本保障。(2)與與dna提取

34、不同，哺乳動物的紅細(xì)胞無核，為提取血紅提取不同，哺乳動物的紅細(xì)胞無核，為提取血紅 蛋白提供了方便。蛋白提供了方便。(3)血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過 觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋 白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。返回通一類通一類4(雙選）下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離實驗中雙選）下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離實驗中樣品處理步驟的描述，正確的是樣品處理步驟的描述，正確的是()a紅細(xì)胞的洗滌：加入蒸餾水，緩慢攪拌，低速短紅細(xì)胞的洗滌：加入蒸餾水，緩慢攪拌，低速短時間離心時間離心b血紅蛋白的釋放：加入生理鹽水和甲苯，置于磁血紅蛋白的釋放：加入生理鹽水和甲苯，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢枇嚢杵魃铣浞謹(jǐn)嚢璺祷豤分離血紅蛋白：將攪拌好的混合液離心、過濾后，分離血紅蛋白：將攪拌好的混合液離心、過濾后，用分液漏斗分離用分液漏斗分離d透析：將血紅