腫瘤部位光敏劑濃度檢測(cè)

1、腫瘤部位光敏劑濃度檢測(cè)新技術(shù)講座一一 課題背景及研究目的和意義課題背景及研究目的和意義二二 國(guó)內(nèi)外研究狀況及分析國(guó)內(nèi)外研究狀況及分析三三 研究思路及方法研究思路及方法四四實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題 光動(dòng)力學(xué)療法（PDT）具有組織選擇性好、對(duì)微血管組織的損傷作用強(qiáng)、全身副反應(yīng)少等特點(diǎn)1,2。 PDT治療：將某種外源性光敏物質(zhì)注射入生物組織中，在激勵(lì)光源照射下，光敏物質(zhì)吸收光子能量后，由基態(tài)變成激發(fā)態(tài)，之后又退激發(fā)并返回基態(tài)的過(guò)程中生成大量活性氧物質(zhì) (ROS)，其中最主要的是單線(xiàn)態(tài)氧(1O2)，1O2是一種光毒性物質(zhì)，能與多種生物大分子相互作用，損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)或影響細(xì)胞功能，從而對(duì)病變組織產(chǎn)

2、生治療作用。 光動(dòng)力學(xué)療法有望克服傳統(tǒng)診療方法的缺點(diǎn)和不足，為癌癥的治療提供了新的途徑和可能，由此可見(jiàn)，對(duì)其診療癌癥的研究是非常必要的3。 在臨床上有一定的治療效果，但治療劑量受到光敏劑濃度的影響，所以在治療前需要對(duì)光敏劑濃度給予定量檢測(cè)。課題背景4研究目的和意義 經(jīng)過(guò)歸納分析提出：激光、氧和光敏劑是影響光動(dòng)力學(xué)療法的生物學(xué)效應(yīng)的三要素4,5，它們之間的量效關(guān)系相當(dāng)復(fù)雜6，治療過(guò)程中靶組織內(nèi)光敏劑的含量是影響光動(dòng)力反應(yīng)效果的重要因素7。 不同的患者藥代動(dòng)力學(xué)同，所以在PDT治療前需要實(shí)際測(cè)量每一位患者腫瘤部位光敏劑含量8-11?？紤]到，非接觸式熒光光譜測(cè)量載體光敏劑濃度12區(qū)別傳統(tǒng)的接觸式的、

3、耗時(shí)長(zhǎng)的、破壞性的測(cè)量方式13，對(duì)載體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以至于臨床診斷及治療有著非常重要的作用。載體測(cè)量光敏熒光光譜信號(hào)會(huì)受到測(cè)量的腫瘤的形狀、生物組織的吸收和散射等影響14,15，導(dǎo)致測(cè)得的熒光強(qiáng)度不能精確地反應(yīng)光敏劑濃度。 目前在光動(dòng)力臨床治療中，光敏劑熒光診斷還處于離體測(cè)量的階段，不能準(zhǔn)確的獲得臨床載體光敏劑定量測(cè)量，無(wú)法確定每一患者在注入光敏劑后某些時(shí)間段的光敏劑濃度是否達(dá)到光動(dòng)力治療標(biāo)準(zhǔn)，從而限制了光動(dòng)力治療疾病的使用。熒光光譜方法測(cè)量腫瘤細(xì)胞光敏劑含量國(guó)外研究狀況u1996年以前，光敏劑熒光診斷光敏劑濃度的方法被廣泛的研究16-19，但所有載體輻射熒光檢測(cè)不僅受到光敏劑濃度的影響還受到測(cè)量腫

4、瘤部位的幾何形狀、生物組織對(duì)激勵(lì)波長(zhǎng)與輻射波長(zhǎng)吸收與散射的影響16-19。當(dāng)獲得生物組織的吸收、散射等光學(xué)特性參量時(shí)，被改變的熒光光譜輪廓可能被修正，由熒光團(tuán)所確定的光敏劑濃度的準(zhǔn)確度可以達(dá)到15%20。實(shí)驗(yàn)與蒙特卡洛仿真同時(shí)證明了通過(guò)減少測(cè)量樣品的直徑約100um或更少來(lái)降低生物組織的散射和吸收的影響，使得熒光強(qiáng)度與英光團(tuán)濃度呈線(xiàn)性關(guān)系21，22。u1997年，R. A. Weersink研究小組提出了另一種方法23，即反射光譜的漫反射近似可以用于確定光敏劑的濃度，生物組織反射光可以通過(guò)帶有多個(gè)激勵(lì)源與探測(cè)分離的面探頭來(lái)測(cè)量，這里散射與吸收系數(shù)都可以通過(guò)漫反射來(lái)推算。在皮膚表面及新西蘭白鼠身

5、上，這種方法被用來(lái)研究光敏劑濃度。對(duì)于內(nèi)臟器官的實(shí)際與測(cè)量的光敏劑濃度都一致，但在皮膚組織上實(shí)際值與測(cè)量值相比低了3倍，并且光纖頭太大以至于不適用于內(nèi)窺鏡通道的適用。圖1 后向散射光測(cè)量方法光纖結(jié)構(gòu)示意圖，其中一根為激勵(lì)光纖其他為探測(cè)光纖圖2 在442nm激勵(lì)下探測(cè)的熒光強(qiáng)度與后向散射強(qiáng)度的比值隨光敏劑吸收吸收的變化情況u 1997年，Judith R. Mourant研究小組發(fā)現(xiàn)采用分離式激勵(lì)與接收方式（間距約為1.7mm）反射光譜與吸收系數(shù)之間的線(xiàn)性關(guān)系，通過(guò)測(cè)量生物組織的彈性散射譜來(lái)計(jì)算組織內(nèi)相關(guān)復(fù)合物的濃度23。在1999年該方法被用于組織內(nèi)光敏劑藥物濃度的檢測(cè)24。u 2000年，該

6、研究小組采用分光手段提出一個(gè)無(wú)創(chuàng)的實(shí)時(shí)光敏劑治療藥物濃度檢測(cè)方法，如圖1所示。該方法通過(guò)穩(wěn)態(tài)的熒光光譜儀對(duì)熒光的后向散射進(jìn)行測(cè)量，發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度與激勵(lì)光后向散射光強(qiáng)度的比值與光敏劑吸收系數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，如圖2所示。u2000年，Brian W. Pogue26研究小組采用了一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案如圖3所示，證明了微小采樣方法（選用間隔700um多路直徑為100um的光纖）可以增加探測(cè)返回?zé)晒庑盘?hào)的強(qiáng)度，減小生物組織對(duì)光敏劑熒光的影響。圖3 左圖為光纖測(cè)試系統(tǒng)示意圖，右圖為微小采樣的多路光纖束浸入生物組織的示意圖，注本圖沒(méi)有顯示出所有的光纖個(gè)數(shù)，實(shí)驗(yàn)中采用37路光纖束。圖4 在注入AIS2Pc光敏劑后測(cè)得的

7、熒光強(qiáng)度隨化學(xué)萃取法測(cè)量的浸入濃度變化情況，左圖為動(dòng)物內(nèi)臟右圖為肌肉組織在同一個(gè)人的測(cè)量結(jié)果，兩圖給出的斜率相似表明生物住在的類(lèi)型對(duì)本探測(cè)響應(yīng)幾乎無(wú)關(guān)。該研究小組進(jìn)行了小鼠肝臟與肌肉組織下注射光敏劑的活體實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了不同組織的光敏熒光信號(hào)強(qiáng)度隨光敏劑（ALS2Pc）浸入濃度（通過(guò)對(duì)組織提取測(cè)量的結(jié)果）的響應(yīng)斜率較為相近11%，如圖4所示。表明探測(cè)器響應(yīng)幾乎不受到生物組織的影響，所以該實(shí)驗(yàn)方法可以減少生物組織熒光噪聲對(duì)光敏劑熒光的影響。u2007年， Wilson BC研究小組探索了新的光動(dòng)力計(jì)量方法，提出通過(guò)特定的單線(xiàn)態(tài)氧熒光探測(cè)與基于光敏劑漂白計(jì)量方式相結(jié)合的全光的計(jì)量方法27，如圖5所示。

8、圖 5 單線(xiàn)態(tài)氧光譜強(qiáng)度與光敏劑熒光探測(cè)系統(tǒng)的示意圖。熒光光譜方法測(cè)量腫瘤細(xì)胞光敏劑含量國(guó)內(nèi)研究狀況1. 目前國(guó)內(nèi)在光敏劑濃度方面的研究主要有解放軍總醫(yī)院顧英教授與北京理工大學(xué)于常青副教授進(jìn)行研究，在2008年該研究小組對(duì)皮膚表面鮮紅斑痣光動(dòng)力治療中皮膚光敏劑含量的光譜信息提取方面的研究28。該實(shí)驗(yàn)方案主要有半導(dǎo)體激光器作為光源、單路激勵(lì)光纖與多路接收光纖探頭、光纖光譜儀以及手提電腦的實(shí)驗(yàn)設(shè)備來(lái)完成如圖6所示。在440nm的激發(fā)下對(duì)皮膚組織的熒光光譜及注射光敏劑（PSD007）后的熒光光譜給予測(cè)量，并觀(guān)察了注射光敏劑幾分鐘后光譜的紅移譜峰，如圖7，8所示。圖圖 6 熒光光譜儀的各個(gè)組成部分熒光

9、光譜儀的各個(gè)組成部分圖 7 注射光敏劑后 PDT 治療中 PWS 皮膚和正常皮膚的熒光光譜對(duì)照?qǐng)D 8 照光前后 PSD007 白蛋白緩沖溶液的熒光光譜圖圖8顯示出顯示出670nm 處又出現(xiàn)了一個(gè)熒光峰，這是光敏劑受光照射后產(chǎn)生光產(chǎn)物的特征峰處又出現(xiàn)了一個(gè)熒光峰，這是光敏劑受光照射后產(chǎn)生光產(chǎn)物的特征峰皮膚熒光主要來(lái)自于皮膚自體熒光、光敏劑熒光和光產(chǎn)物熒光皮膚熒光主要來(lái)自于皮膚自體熒光、光敏劑熒光和光產(chǎn)物熒光認(rèn)為 PWS 皮膚實(shí)測(cè)光譜在排除血紅蛋白和黑色素的吸收后主要為三種基本熒光物質(zhì)的熒光光譜的疊加：皮膚自體熒光（主要熒光物質(zhì)來(lái)源是黃素腺嘌呤二核苷酸，簡(jiǎn)稱(chēng)FAD）、光敏劑熒光以及光產(chǎn)物熒光?；?/p>

10、光譜在腫瘤組織部位的疊加原理 需要從各自的水溶液中提取FAD、光敏劑、光產(chǎn)物的特征光譜，并通過(guò)實(shí)際測(cè)量取得人體皮膚血紅蛋白和黑色素的吸收譜。 由于PSD007 熒光特征峰、光產(chǎn)物熒光特征峰以及血紅蛋白吸收峰較為對(duì)稱(chēng)且接近高斯形態(tài)，因而對(duì)其采用高斯擬合；而FAD的熒光峰以及黑色素吸收譜都不對(duì)稱(chēng)，采取多項(xiàng)式擬合方式。由于熒光光譜采集數(shù)據(jù)間隔很小，數(shù)據(jù)量很大，數(shù)據(jù)分布均勻，且互不相關(guān)，方程組求解采用一般的最小二乘回歸即可兩個(gè)患者的臨床測(cè)量結(jié)果與擬合結(jié)果的對(duì)比圖兩個(gè)患者的臨床測(cè)量結(jié)果與擬合結(jié)果的對(duì)比圖圖9 臨床實(shí)測(cè)光譜與擬合光譜對(duì)比結(jié)果2. 在2008年，哈爾濱工業(yè)大學(xué)張治國(guó)教授課題組建立了用于牙結(jié)石

11、的熒光比例方法29，并取得較高的靈敏度。離體的腫瘤細(xì)胞的光敏劑熒光與自體熒光密度譜線(xiàn)一定波長(zhǎng)范圍積分的比值與光敏劑濃度存在線(xiàn)性關(guān)系，熒光比例的公式為：OP=(SB-SC)/SAOP = SB/SA， =SC/SA上式中 定義為自體熒光系數(shù)，對(duì)于同一物質(zhì) 為一常數(shù)，通過(guò)計(jì)算得出不加光敏劑的Eca-109 細(xì)胞所對(duì)應(yīng)的 為 0.145。該公式的圖像表示形式如圖10所示，其值與光敏劑濃度獲得的線(xiàn)性關(guān)系如圖11所示。圖 10 光敏劑濃度參量的原理圖SA是以 490 nm 的熒光峰為中心，兩端為熒光強(qiáng)度衰減到初始的 1/e 處的熒光曲線(xiàn)下的面積，表征了細(xì)胞自體熒光的強(qiáng)度。SB是以 630 nm 的熒光峰

12、為中心，兩端為熒光強(qiáng)度衰減到初始的 1/e 處的熒光曲線(xiàn)下的面積。SC是不加光敏劑的 Eca-109 細(xì)胞在以 630 nm 的熒光峰為中心，兩端為熒光強(qiáng)度衰減到初始的1/e 處的熒光曲線(xiàn)下的面積，(SBSC)表征了HMME 光敏劑的熒光強(qiáng)度。圖11 不同濃度 HMME 溶液 OP 值擬合曲線(xiàn)三、研究思路及方法三、研究思路及方法1.理想定標(biāo)：確定純光敏劑不同濃度與激發(fā)光敏劑特征峰值熒光光譜相對(duì)強(qiáng)度線(xiàn)性關(guān)系。2.離體定標(biāo)：a，確定浸入腫瘤細(xì)胞內(nèi)光敏劑不同濃度與激發(fā)光敏劑特征峰值熒光光譜相對(duì)強(qiáng)度線(xiàn)性關(guān)系；b，確定浸入腫瘤細(xì)胞內(nèi)光敏劑不同濃度與激發(fā)光敏劑熒光和自體熒光特征峰比值的線(xiàn)性關(guān)系。3.載體測(cè)

13、量載體測(cè)量：對(duì)小鼠體表腫瘤在注入一定劑量光敏劑后，每間隔一定時(shí)間進(jìn)行激發(fā)腫瘤獲得其熒光光譜相對(duì)強(qiáng)度，并根據(jù)其強(qiáng)度值及已知的線(xiàn)性關(guān)系，推算此時(shí)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的光敏劑濃度值。4. 閾值濃度：可進(jìn)行有意義的光動(dòng)力治療時(shí)最小的光敏劑濃度值。實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)載體測(cè)量實(shí)驗(yàn)載體測(cè)量實(shí)驗(yàn)光敏劑濃度，腫瘤與非腫瘤熒光相對(duì)強(qiáng)度比值，閾值光敏劑濃度光敏劑濃度，腫瘤與非腫瘤熒光相對(duì)強(qiáng)度比值，閾值光敏劑濃度對(duì)比分析理想定標(biāo)實(shí)驗(yàn)理想定標(biāo)實(shí)驗(yàn)離體定標(biāo)實(shí)驗(yàn)離體定標(biāo)實(shí)驗(yàn)線(xiàn)性關(guān)系理論模型一 （這里給出理想檢測(cè)時(shí)吸收激勵(lì)光與激發(fā)熒光之間的關(guān)系，未考慮腫瘤細(xì)胞對(duì)激勵(lì)光的散射、吸收、收集效率及腫瘤形狀等因素）（1）（2） LIkemexex0

14、,303. 2LemexemFLAAemexemFexexeIIeIIII1,1,00cLIIexexexemexemF303. 2,0cLIIexemexemF303. 2,0線(xiàn)性關(guān)系物理模型二：?jiǎn)我徊ㄩL(zhǎng)激勵(lì)下光敏劑熒光相對(duì)與自體熒光的相對(duì)強(qiáng)度與光敏劑濃度線(xiàn)性關(guān)系。ex在 波長(zhǎng)激發(fā)下的公式關(guān)系（4）（5）（6-1）xexxexgemexemexck1, （6-2） xgexxexgemexxemexgemFemFxexxemexxexemFgexgemexgexemFccIILcIILcII ,303. 2,303. 200考慮實(shí)際測(cè)量光譜值并非理論真實(shí)值，則定義如下關(guān)系式：()()()()

15、()()cFemBemFemcFemBemFemIIIIII(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,ccFemexBemexFemexFemexRccFemexBemexFemexFemexccBemexFemexFemexRccFemexFemexIIIINIIIIIIINII )(,)BemexI（7）則（7）式可改寫(xiě)為：（8）上式中，N/R被認(rèn)為待測(cè)熒光組織及返回激發(fā)光產(chǎn)生的背景噪聲。物理模型三物理模型三：雙波長(zhǎng)激勵(lì)下可消去噪聲對(duì)線(xiàn)性關(guān)系的影響。同理另一個(gè)波長(zhǎng) 激勵(lì)下ex(,)(,)(,)(,)cFemexFemexRcFemexFemIINII（9）

16、(8)式與(9)式相減：(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)(,)1(,)(,)ccFemexFemexFemexFemexccFemexFemexFemexFemexgexemgexgexemgexxexemxexxxexemIIIIIIIIc1gxexxcc（10）xexxexgemexxemexgexxexgemexxemexgck1, 令 gexemFexemFexemFexemFckIIII ,則有（11）當(dāng)待測(cè)腫瘤細(xì)胞濃度確定時(shí)， 為常量。k 光譜分析實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)方案： 采用熒光質(zhì)量分析儀對(duì)正常細(xì)胞、PSD007孵化腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞熒光光譜進(jìn)行檢測(cè)。 正常細(xì)胞：

17、大鼠的脾臟白細(xì)胞；腫瘤細(xì)胞:LG12實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 確定細(xì)胞自體熒光、PSD007光敏劑熒光、ALA光敏劑熒光特征峰的位置，對(duì)激發(fā)光源波長(zhǎng)進(jìn)行指導(dǎo)。PSD007吸收光譜測(cè)量結(jié)果nm.200.00400.00600.00800.00吸收值5.0004.0002.0000.000-0.50012345678No. 波長(zhǎng)(nm) 吸收值1619.500.2752568.000.5603540.000.6294505.500.8525405.003.4566360.004.0397352.004.0398338.003.914405nm激發(fā)下正常組織細(xì)胞熒光譜400nm激發(fā)下腫瘤+PSD007光敏劑熒光譜

18、635nm激勵(lì)下未發(fā)現(xiàn)熒光信號(hào)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究-理想定標(biāo)離體細(xì)胞定標(biāo)u實(shí)驗(yàn)方案：激發(fā)光源：405nm連續(xù)激光器、熒光質(zhì)量分析儀待測(cè)樣品：純不同濃度PSD007、孵化白血病腫瘤細(xì)胞光線(xiàn)探頭：平頭多纖芯NA=0.22醫(yī)用光纖光譜儀：USB400、tristan光纖光譜儀（300-1000nm）u 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：找到合適的光纖光譜儀積分時(shí)間。調(diào)節(jié)光纖探頭位置，找到距離待測(cè)樣品的合適位置。測(cè)量不同濃度下光敏劑熒光相對(duì)強(qiáng)度。激光激勵(lì)與熒光質(zhì)量分析儀兩種方法下測(cè)量結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。熒光質(zhì)量分析儀獲得不同濃度PSD007光敏劑測(cè)量結(jié)果5506006507007500500000100000015000002000000

19、250000030000003500000 IntensityWavelength(nm) non 0.019625ug/ml 0.038125ug/ml 0.07625ug/ml 0.15625ug/ml 0.3125ug/ml 0.625ug/ml 1.25ug/ml 2.5ug/ml 5ug/ml0.00.10.20.30.40.50.60.70100000200000300000400000500000600000 IntenstiyWavelength(nm)Equationy = a + bAdj. R-Squar1ValueStandard ErPolynomial Fit of

20、 BIntercept1733.337461.07953E-11Polynomial Fit of BSlope813347.324462.89101E-110123450100000020000003000000 IntensityWavelength(nm)Equationy = a + b*xAdj. R-Square0.992590.97107ValueStandard ErrorC1Intercept65870.3401539641.97061C1Slope674488.2486220598.61145BIntercept1733.3374622560.00022BSlope8133

21、47.3244669933.7598熒光特征峰614nm處相對(duì)強(qiáng)度與光敏劑濃度之間線(xiàn)性關(guān)系濃度范圍0.019ug/ml-5ug/ml濃度范圍0.019ug/ml-0.625ug/ml理想定標(biāo)線(xiàn)性關(guān)系曲線(xiàn)熒光質(zhì)量分析儀PSD007孵化白血病腫瘤細(xì)胞測(cè)量結(jié)果低濃度45050055060065070075005000100001500020000 Intensitywavelength(nm) 0.3906ug 0.7812ug 1.5625ug 3.125ug405nm光源激發(fā)下不同孵化濃度腫瘤細(xì)胞光敏劑熒光強(qiáng)度4505005506006507007500500010000150002000025

22、00030000 IntensityWavelength(nm) 0.39065ug 0.78125ug 1.5625ug 3.125ug405nm光源激發(fā)下腫瘤細(xì)胞裂解后光敏劑熒光強(qiáng)度560 580 600 620 640 660 680 700 720 740050000100000150000200000 IntensityWavelength(nm) 6.25ug 12.5ug 25ug 50ug 100ug560580600620640660680700720740050000100000150000200000250000300000350000400000450000500000

23、 IntensityWavelength(nm) 0ug 6.25ug 12.5ug 25ug 50ug 100ug裂解前激發(fā)腫瘤細(xì)胞獲得光敏劑熒光強(qiáng)度（高濃度孵化）裂解后激發(fā)純光敏劑熒光強(qiáng)度（高濃度孵化）PSD007孵化白血病腫瘤細(xì)胞測(cè)量結(jié)果高濃度孵化濃度為（6.25ug/ml-100ug/ml）PSD007，浸入細(xì)胞內(nèi)濃度與光敏劑熒光特征峰（616nm）強(qiáng)度的線(xiàn)性關(guān)系孵化細(xì)胞后離體定標(biāo)線(xiàn)性關(guān)系曲線(xiàn)熒光質(zhì)量分析儀0.00.10.20.30.40.50.6020000400006000080000100000120000140000160000180000 IntensityConcentra

24、tion(ug/ml)Equationy = a + b*xAdj. R-Square0.9765ValueStandard ErrorBIntercept23812.97056191.75581BSlope243708.2685418846.8168光譜儀405nm激光器待測(cè)樣品光纖探頭高精度三維手動(dòng)位移臺(tái)激光器連接頭光譜儀連接頭405nm激勵(lì)下PSD007的熒光光譜信號(hào)45050055060065070075080002500500075001000012500150001750020000 wavelength(nm)Intenstiy(a.u.) 100ug/ml 50ug/ml 25

25、ug/ml 12.5ug/ml 6.25ug/ml 3.125ug/ml 1.56ug/ml 0.78ug/ml 0.39ug/ml 0ug/ml低濃度光敏劑與激發(fā)熒光特征峰值(614.9nm)的線(xiàn)性關(guān)系0.00.51.01.52.02.53.03.50100020003000400050006000 Intensity(a.u.)concentration(ug/ml) B Linear Fit of BEquationy = a + b*xAdj. R-Square0.96433ValueStandard ErrorBIntercept358.82385212.08039BSlope137

26、6.24188131.73089405nm激發(fā)下的線(xiàn)性標(biāo)定曲線(xiàn)LD光源405nm激光激發(fā)下白血病腫瘤細(xì)胞熒光信號(hào)460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 7400200400600800100012001400160018002000 IntenstiyWavelength(nm) 50ug/ml 25ug/ml 12.5ug/ml 6.25ug/mlNon460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 7400100200300400500 Intensity

27、Wavelength(nm)100ug/ml 50ug/ml 25ug/ml 12.5ug/ml 6.25ug/ml 3.125ug/ml裂解前細(xì)胞內(nèi)光敏劑的熒光光譜信號(hào)裂解后的熒光光譜信號(hào)405nm激光激發(fā)裂解后提取PSD007熒光光譜500600700050010001500200025003000 IntenstiyWavelength(nm) Y:0.39ug/ml Y:0.79ug/ml Y:1.56ug/ml Y:3.125ug/ml注：裂解前注：裂解前405nm激光激發(fā)腫瘤細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)熒光信號(hào)激光激發(fā)腫瘤細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)熒光信號(hào)0.050.100.150.200.250.30250300

28、350400450500550600650 Intensityconcentration(ug/ml)Equationy = a + b*Adj. R-Square0.99302ValueStandard ErrorBIntercept158.1282915.10855BSlope1636.4506279.12096孵化濃度（ug/ml）100502512.56.25浸入濃度（ug/ml）熒光質(zhì)量分析儀0.5902910.3605720.204140.1177780.07524激光激發(fā)0.430620.2693620.2195620.1389330.07609孵化濃度為（6.25ug/ml-50ug/ml）PSD007，浸入細(xì)胞內(nèi)濃度與光敏劑熒光特征峰（613nm）強(qiáng)度的線(xiàn)性關(guān)系兩種實(shí)驗(yàn)條件下同樣待測(cè)樣品獲得光敏劑孵化濃度推算結(jié)果如下表兩種實(shí)驗(yàn)條件下同樣待測(cè)樣品獲得光敏劑孵化濃度推算結(jié)果如下表生物組及其腫瘤實(shí)驗(yàn)研究u實(shí)驗(yàn)方案：激發(fā)光源：405nm連續(xù)激光器、熒光質(zhì)量分析儀待測(cè)樣品：PSD007浸入小鼠直腸及小鼠皮下植入腫瘤組織光線(xiàn)探頭：平頭多纖芯NA=0.22醫(yī)用光纖光譜儀：USB400、tristan光纖光譜儀（300-1000nm）u 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：小鼠分別采用涂抹與靜脈注射兩種方式給藥。405nm激光激發(fā)不同給藥時(shí)間的光敏劑熒