實驗五血紅蛋白含量的測定、血型鑒定

1、實驗五 血紅蛋白含量的測定、血型鑒定實驗目的l掌握血紅蛋白的測定方法；l學習鑒定血型的基本方法，觀察紅細胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型鑒定的原理。測定血紅蛋白的意義n人血紅蛋白參考值 成年男性：13-15克/dl ；成年女性：11-14克/dl ；兒童：（依年齡而異）12-14克/dl。n臨床意義：大致與紅細胞增減相似。高原地區(qū)居民的血紅蛋白濃度一般比平原居民為高，這是機體對低氣壓環(huán)境的一種適應現(xiàn)象。一般來說，在疾病狀況下，血紅蛋白的增減是與紅細胞的改變相平行的，即引起紅細胞增多的疾病，也會使血紅蛋白含量增加。使紅細胞減少的疾病，也使血紅蛋白含量減少。在貧血時，血液中的紅細胞數(shù)量和血紅蛋白濃度都有

2、不同程度的下降，但不一定按相同的比例變化。有時紅細胞數(shù)量可以減少很多，而血紅蛋白的濃度的降低卻相對地不那么顯著，見于大細胞性貧血，由于單個紅細胞所含的血紅蛋白量較正常者為多。相反，也有的紅細胞減少得不很多，而血紅蛋白濃度卻顯著降低，例如缺鐵性貧血，這是由于每個紅細胞的血紅蛋白含量比正常明顯減少，故血紅蛋白減低的程度較紅細胞減少更為顯著。 依據(jù)檢驗結(jié)果，分析病因，做到準確的診斷和治療都是很必要的。 基本原理基本原理 n血紅蛋白是紅細胞的主要成分，在正常情況下，每個紅細胞均含有一定量的血紅蛋白。血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成的結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白除能與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白外，尚能與某些物質(zhì)作

3、用形成多種血紅蛋白衍生物。它們具有特定的色澤和吸光譜，在臨床上，可用以診斷某些變性血紅蛋白血癥和血紅蛋白的定量測定。n測定血紅蛋白含量的方法很多，實驗常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血紅蛋白經(jīng)少量鹽酸的作用，使亞鐵血紅素變成高鐵血紅素，呈現(xiàn)較穩(wěn)定的棕色。用水稀釋后與標準色比較，求出每100ml血液中所含的血紅蛋白克數(shù)。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子為13.1g。 實驗原理-血型鑒定n血型一般指紅細胞的血型，是根據(jù)紅細胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的。n抗體或凝集素存在于血清中，與紅細胞的不同抗原起反應

4、，產(chǎn)生凝集，最后溶解，由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須注意鑒定血型，以確保安全輸血。ABO血型鑒定實驗原理n抗原抗體反應在ABO血型系統(tǒng)中，紅細胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測知受試者紅細胞膜上有無A或/和B抗原判斷血型n抗體在相鄰的紅細胞表面抗原決定簇之間搭橋抗體在相鄰的紅細胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團塊形成肉眼可見的顆粒狀凝集團塊.見圖見圖IgM抗體凝集紅細胞示意圖IgM抗體凝集紅細胞示意圖 IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集實驗材料n血紅蛋白計、血紅蛋白計、0.1mol/L0.1mol/L

5、鹽酸溶液；鹽酸溶液；n載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、A A型和型和B B型標準血清、生理鹽水、酒精棉型標準血清、生理鹽水、酒精棉球等。球等。方法與步驟-血紅蛋白測定n于測定管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至百分刻度20處。n取20l被檢血液, 迅速將吸血管插入測定管底部鹽酸液中，緩慢擠出血液，再吸取上部清液，反復沖洗吸血管23次，并混勻，靜置10min。n沿著管壁加入蒸餾水，逐步稀釋至與標準色柱色調(diào)一致后，讀取重量（或百分）刻度值報告結(jié)果。v 標準制換算：血紅蛋白標準制換算：血紅蛋白(g/L)=血紅蛋白血紅蛋白(g/dl)10方法與步驟方法與步驟- -

6、血紅蛋白測定血紅蛋白測定 n血紅蛋白計包括 標準比色架，架的兩側(cè)鑲有兩個棕色標準玻璃色柱。 血紅蛋白稀釋管，有方形也有圓形的。兩側(cè)有刻度，一側(cè)以g為計數(shù)單位，對側(cè)以百分率計，按我國情況，是以每100ml血液內(nèi)含血紅蛋白14.5g為100%。20mm3血紅蛋白吸管，還有玻璃棒、滴管。n用滴管加0.1mol/LHCl于血紅蛋白稀釋管內(nèi)，到刻度10處。n用刺血針刺破指尖采血，血滴宜大些。用血紅蛋白吸管的尖端接觸血滴，吸血至刻度20ul處（0.02ml）。方法與步驟方法與步驟- -血紅蛋白測定血紅蛋白測定 n用濾紙片或棉球擦凈吸管口周圍的血液，將吸管插入血紅蛋白稀釋管的鹽酸內(nèi)，輕輕吹出血液至管底部，反

7、復吸入并吹出稀釋管內(nèi)上層的鹽酸，洗滌吸管多次，使吸管內(nèi)的血液完全洗入稀釋管內(nèi)。搖勻或用小玻璃棒攪勻后，放置10min，使鹽酸與血紅蛋白充分作用。n把稀釋管插入標準比色架兩色柱中央的空格中，使無刻度的兩側(cè)面位于空格的前后方，便于透光和比色。n用滴管向稀釋管內(nèi)逐滴加入蒸餾水（每加一滴要攪拌），邊滴邊觀察顏色，直至顏色與標準玻璃色柱相同為止。稀釋管上液面的刻度讀數(shù)即為每100ml血液血紅蛋白的克數(shù)。n從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細胞懸液。采血時應注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細胞（約0.20.5 ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理

8、鹽水調(diào)配成5%濃度。方法與步驟-血型鑒定方法與步驟-血型鑒定n（1） 取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號筆標明A及B，并分別各滴入A及B標準血清一滴。n（2） 用滴管吸取紅細胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。n（3） 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分別用來混合A型和B型標準 （4）觀察結(jié)果。如有凝集反應可見到呈紅色點狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應，可見紅細胞聚集成團。n（5） 判斷血型 根據(jù)被試者紅細胞是否被A，B型標準血清所凝集，判斷其血型。 血型判定正定型正定型反定型反

9、定型 結(jié)果結(jié)果抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC RBC O O型型RBCRBC- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB注意事項注意事項 n吹血液入稀釋管及洗凈吸管時，不宜用力過猛。n蒸餾水需逐滴加入，多做幾次比色，以免稀釋過量。每次比色時，應將攪拌用的玻璃棒取出，以免影響比色。n由于操作過程過長而造成吸管內(nèi)血液凝固，堵塞管孔時，則要按下列溶液的順序重復沖洗吸管，即用水95%酒精乙醚或丙酮。五 注意事項n玻片、試管都要標記！玻片、試管都要標記！， A及B標準血清絕對不能相混,不要依靠用染料顏色標記血清。工作中要形成自己的習慣！n所用玻片、試管實驗前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。n紅細胞懸液滴管頭不能接觸標準血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)