e申請的策略和技巧中山大學黎明濤PPT課件

1、撰寫前的準備 好心情、好身體 邊想邊寫 3h /天 讀指南、讀通知 注意截止期 讀標書、讀高手、讀同行 讀自己 賣點??？選題 創(chuàng)新性 工作基礎 想法變文字 一氣呵成 “立項依據(jù)” 溝通 科研科87330567、醫(yī)科處 87333055 第1頁/共59頁摘 要 研究內容和意義（限400字）1. 1. 基礎：繼續(xù)和深入 發(fā)表和未發(fā)表 創(chuàng)新2. 2. 問題 中肯 3. 3. 預實驗 針對“問題”的預實驗結果4. 4. 假設 思想性、創(chuàng)新性5. 5. 方法 可靠性第一 先進性第二6. 6. 目標 明確、具體7. 7. 意義 理論性和應用性第2頁/共59頁第3頁/共59頁 神經(jīng)元凋亡時SP1對BH3-o

2、nly蛋白Bim的轉錄調控細胞凋亡 時SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調控神經(jīng)元凋亡時 BH3-only蛋白Bim的轉錄調控神經(jīng)元凋亡時SP1對BH3-only蛋白Bim的 調控 SP1對BH3-only蛋白Bim的轉錄調控 SP1對神經(jīng)元凋亡的調控作用 關鍵詞：SP1/Bim /基因調控/信號轉導/神經(jīng)元凋亡 第4頁/共59頁研究內容、研究目標與擬解決的關鍵問題第5頁/共59頁第6頁/共59頁 （緊緊圍繞研究目標） 1. 證明bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列是否介導了bim基因的上調 為了證實bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列是否介導了bim基因的上調，將其中的SP1結合序列進行點

3、突變，使其不能結合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動子的撤鉀反應。 2. 分析SP1 是否能夠與bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列結合 應用EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)技術，證實b i m 啟 動 子 核 心 區(qū) 的 S P 1 結 合 序 列 是 否 能 夠 與 S P 1 結 合 ； 進 一 步 采 用CHIP(Chromatin immunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動子核心區(qū)在細胞內結合的證據(jù)。 3. 從 bim 的mRNA 和蛋白質水平，觀察負顯性SP1是否能夠抑制撤鉀誘導的bim基因的上調

4、 質粒轉染CGNs的轉染率只能達到0.1-1.0 %，腺病毒的感染率可達7080% 1 。 因此，構建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnSP1，感染CGNs才能達到可靠分析bim的mRNA和蛋白質表達水平改變的目的。 4. 4. 分析SP1誘導Bim這一機制對神經(jīng)元凋亡的調控作用 確立SP1轉錄激活bim這一機制后，進一步分析這一機制對神經(jīng)元凋亡的調控作用。 第7頁/共59頁 獲得SP1SP1直接調控bimbim基因表達的可靠依據(jù)。 研究過程中對達到預期目標有重要影響的某些研究內容或因素。 為達到預期目標所必須掌握的關鍵技術或研究手段。找出關鍵問題，問題清晰，分析透徹， 合理的解決方法。第8頁/

5、共59頁 項目需求為前提；可靠性第一，先進性第二；參考文獻；突出關鍵技術的描述；不主張使用流程圖，建議開頭：“有關方法、技術路線、試 驗手段、關鍵技術綜述如下”。 第9頁/共59頁第10頁/共59頁 對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新： 填補空白或修改傳統(tǒng)的理論； 新技術、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。 跟蹤創(chuàng)新： 在前人工作基礎上補充、完善現(xiàn)有理論； 對原有技術、方法進行修改后產(chǎn)生1 11 12 2的效果。第11頁/共59頁申請人首次報道了神經(jīng)元凋亡時促凋亡蛋白Bim上調是不依賴于JNK/c-Jun通路(Leyu Shi,et al, Neurosci Lett. 2005)一觀察之

6、后，又以可靠的實驗結果證明PI3K/Akt/FKHRL1信號通路也不參與bim的上調（見立項依據(jù)）。 bim上調的轉錄機制是什么？我們率先對bim啟動子進行了5末端序列續(xù)減分析，確立了誘導bim表達的啟動子核心區(qū)， 進而發(fā)現(xiàn)一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經(jīng)元凋亡時SP1被激活；負顯性SP1突變體和SP1-DNA結合抑制劑mithramycin A可抑制bim的上調。根據(jù)以上生物信息學分析和實驗觀察，我們首次提出了SP1介導bim上調這一新的bim轉錄機制：神經(jīng)元凋亡時轉錄因子SP1被激活，激活的SP1與bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列結合，從而轉錄激活bim的表

7、達。 本項目擬進一步采用負顯性SP1突變體的腺病毒表達技術以及啟動子點突變、EMSA和CHIP方法，旨在獲得SP1直接調控bim基因的可靠證據(jù)，為闡明SP1對促凋亡蛋白Bim的調控作用和機制并進一步確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據(jù)。 第12頁/共59頁 研究基礎與工作條件 突出與項目相關的工作積累 ( (對于自由申請項目，著重填寫申請人近期的主要工作業(yè)績；對于重點項目，請著重填寫本課題組與本項目相關的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績) ) ( (包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況) )第13頁/共59頁研究 基 礎 在國家自然科學基金(已結題三

8、項、正進行一項)的資助下，近五年有如下工作積累和成績： 1. SCI論文 近五年發(fā)表了14篇SCI論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號轉導和基因調控有關的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的有4篇(見后)，作為共同作者的有8篇。 2. Bim轉錄機制的前期工作 我們首次報道了神經(jīng)元凋亡時JNK/c-Jun不參與bim的上調1，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導bim的上調(未發(fā)表資料)。這些研究工作改變了以往的觀點,也是本項目重要的立項依據(jù)之一。 第14頁/共59頁 3. Bim啟動子核心區(qū)確立 啟動子5末端序列續(xù)減分析確立了誘導Bim表達的啟動子核 心區(qū)，并

9、發(fā)現(xiàn)一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經(jīng)元凋亡時SP1被激活；負顯性SP1突變體和SP1-DNA結合抑制劑均可抑制Bim的上調。這些實驗資料揭示了SP1介導 bim轉錄調控的新機制，也為本項目申請?zhí)峁┝俗罡镜膶嶒炓罁?jù)。 4. 轉錄因子調控神經(jīng)元凋亡的工作基礎 另一項轉錄因子MEF2抗神經(jīng)元凋亡的工作也顯示了申請人與本項目相關的較扎實的研究工作積累。本人首次報道(Mingtao Li, et al, J of Neurosci. 2001, 21:6544-6552 )、隨后被他人證實(Shu-ichi Okamoto, et al, PNAS 2002, 99:39

10、74-3979)，神經(jīng)元凋亡時轉錄因子MEF2A和MEF2D不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺手caspase 剪切，其N-末端產(chǎn)物反而具有促凋亡活性。這一MEF2調控凋亡機制的發(fā)現(xiàn)，不僅對于我們理解神經(jīng)元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和分化的研究開拓了一條嶄新的思路，具有創(chuàng)新性。第15頁/共59頁 5. 信號轉導的工作基礎 較早的一項對cAMP / PKA 抗神經(jīng)元凋亡機制的研究也反映了本人在神經(jīng)元凋亡信號轉導的研究方面有較厚實的工作積累。申請者首次發(fā)現(xiàn)促凋亡激酶 GSK-3 和GSK- 3是PKA的天然底物；闡明cAMP/PKA 通過磷酸化并抑制GSK-3發(fā)揮其促

11、神經(jīng)元存活的作用，此內容發(fā)表在分子細胞生物學( Mingtao Li, et al, Mol Cell Biol. 2000, 20: 9356-9363)。 6. JNK/c-Jun通路的工作基礎 我們首次以JNK/c-Jun為直接靶點、用小分子JNK抑制劑(SP600125)治療帕金森病動物，證實JNK是有效的治療靶點。此工作發(fā)表后 (Neuroscience Research, 2004; 48:195-202)，得到了國際同行的認可。SCI期刊Drug News Perspectives邀請本人撰寫了有關“以JNK為靶點治療帕金森病”的專題綜述“JNK Inhibition as a

12、Potential Strategy in Treating Parkinsons Disease”(Drug News Perspect. 2004; 17:646-54)。 第16頁/共59頁SCI 文 章1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊作者). Activity depriva

13、tion-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：712. 2. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsons

14、s disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54. 3. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. (通訊作者). SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinsons d

15、isease. Neurosci Res 2004；48:195-202 4. Yuanbin Xie, Yanling Liu, Chi Ma, Zhongmin Yuan, Wenya Wang, Zhenyu Zhu, , Guoquan Gao, Xianguo Liu, Hengxin Yuan, Ruzhu Chen, Shoujian Huang, Xuelan Wang, Xiaonan Zhu, Xuemin Wang, Zixu Mao and Mingtao Li (通訊作者). Indirubin-3-oxime inhibits c-Jun NH2-terminal

16、kinase: anti-apoptotic effect in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2004, 367:355-359. 第17頁/共59頁5. Rongbiao Pi, Wenming Li Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J.Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis

17、of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsonss disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54. 6. Wenming Li, Rong

18、biao Pi, Hugh H. N. Chan, Hongjun Fu, Nelson T. K. Lee, Hing Wai Tsang, Yongmei Pu, Donald C. Chang, Chaoying Li, Jialie Luo, Keming Xiong, Zhiwang Li, Hong Xue, Paul R. Carlier, Yuanping Pang, Karl W. K. Tsim, Mingtao Li and Yifan Han. Novel dimeric AChE inhibitor Bis(7)-tacrine, but not Donepezil,

19、 prevents glutamate-induced neuronal apoptosis by blocking NMDA receptors. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88. 7. Xuemin Wang, Xiaoli Tang, Mingtao Li, John Marshall, Zixu Mao. Regulation of neuroprotective activity of myocyte enhancer factor 2 by cAMP-PKA signaling pathway in neuronal survival. J

20、Biol Chem. 2005, 280(17):16705-13. 8. Marcus Wiedmann, Xuemin Wang, X.iaoli Tang, Mingtao Li, Zixu Mao. PI3K/Akt-dependent regulation of the transcription factor myocyte enhancer factor-2 in insulin-like growth factor-1- and membrane depolarization-mediated survival of cerebellar granule neurons. J

21、Neurosci Res. 2005 2005 81(2):226-234. 第18頁/共59頁9. Mingtao Li，Xiaomin Wang，Mary Kay Meintzer，Tracey Laessig，Morris J. Birnbaum and Kim A. Heidenreich. Cyclic AMP promotes neuronal survival by phosphorylation of glycogen synthase kinase 3. Mol Cell Biol. 2000, 20（24）：9356-9363. 10. Mingtao Li，Daniel

22、A. Linsenman，Melissa P.Allen，Mary Kay Meintzer， Xiaomin Wang，Tracey Laessig，Margaret E. Wierman & Kim A. Heidenreich. MEF2A and MEF2D undergo phosphorylation and caspase-mediated degradation during apoptosis of rat cerebellar granule neurons. J. Neurosci. 2001; 21(17):6544-6552. 11. Daniel A. Linsem

23、an, Christopher M. Bartley, Shoshona S. Le, Tracey A. Laessig, Ron J. Bouchard, Mary Kay Meintzer, Mingtao Li and Kim A. Heidenreich . Inactivation of the Myocyte Enhancer Factor-2 Repressor Histone Deacetylase-5 by Endogenous Ca2/Calmodulin-dependent Kinase II Promotes Depolarization-mediated Cereb

24、ellar Granule Neuron Survival. J Biol Chem 2003, 278:4147241481. 12. Jing-Ping Yun, Choong-Tsek Liew, Eng Ching Chew, Xiao-Yu Yin, Paul Bo San Lai, Yam Hin Fai, H.K. Richard Li, Mei-Lin Jin, Ming-Xiao Ding, Mingtao Li, Han-Liang Lin, and Wan Yee Lau. Nuclear Matrix Protein Expressions in Hepatocytes

25、 of Normal and Cirrhotic Rat Livers Under Normal and Regenerating Conditions. J Cell Biochem. 2004, 91:12691279. 第19頁/共59頁13. Hongwei Yang, Xiaodong Hu, Hongmei Zhang, Wenjun Xin, Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Roles of CaMKII, PKA , and PKC in the induction and mainternance of

26、LTP of C-fiber-evoked field potentials in rat spinal dorsal horn. J Neurophysiol. 2004, 91: 1122-1133.14 . Nengwei Hu, Hongmei Zhang, Xiaodong Hu , Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Protein Synthesis Inhibition Blocks the Late-Phase LTP of C-Fiber Evoked Field Potentials in Rat Spi

27、nal Dorsal Horn. J Neurophysiol, 2003;89:2354- 235915 . Juan Sun, Mingtao Li, Jiahuai Han and Jun Gu. Sensitization of differentiated PC12 cells to apoptosis by presenilin-2 is mediated by p38. Biochem. Biophy. Res. Commun., 2001, 287: 536-541. 16. Weibin Cai, Jianfang Ma , Chaoyang Li, Zhonghan Yan

28、g, Xia Yang, Wei Liu , Zuguo Liu , Mingtao Li, Guoquan Gao. Enhanced anti-angiogenic effect of a deletion mutant of plasminogen kringle 5 on neovascularization. J Cell Biochem. 2005 Sep 15;(in press).17. Ming YANG, Cun-you WAGN, Feng ZHOU, Jing TAO, Tao LIU, Hai-yan WEI, Wei LIU, Ming-tao Li, Xian-s

29、ong FENG. Proteomic Analysis in the Early Process of Pancreatic Regen era t i o n i n t h e Pa n c re a te c to m i z e d R a t . A c t a Pharmacologica Sinica 2005 (in press) 第20頁/共59頁工 作 條 件 2001年回國，獲得211基金180萬元，組建了一流的分子、細胞生物學實驗室。2002年，作為負責人獲得一期985學科建設經(jīng)費700萬元，籌建了一流的蛋白質組學實驗室并正在主持開展蛋白質科學的前沿性工作。近三年，培

30、養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學和蛋白質組學研究的科研隊伍。 這些建設性工作為解決細胞信號轉導、基因調控以及本項目的核心問題奠定了扎實的基礎。 項目負責人黎明濤所在單位中山大學基礎醫(yī)學院藥理教研室是211項目資助學科和國家重點學科。人才濟濟，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學科建設資金3000萬元，已購置大型儀器如質譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機、流式細胞儀、高效液相和蛋白質分離純化系統(tǒng)等。這是申請者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。 第21頁/共59頁申請者簡歷申請者和項目組主要成員 學歷 研究工作簡歷 近期已發(fā)表與本項目有關的文章目錄 獲得學術獎勵情況 在本項目中承擔的任務。 第22頁/

31、共59頁 黎明濤 (Li Mingtao) 項目負責人，中山大學基礎醫(yī)學院藥理教研室教授，博士生導師，中山醫(yī)學院蛋白質組學實驗室主任。于1984年、1989年和1996年分別獲得醫(yī)學學士、碩士和博士學位。 主要研究領域是神經(jīng)元凋亡的信號轉導、基因調控和蛋白質組學。在美國Department of Pharmacology, University of Colorado Health Sciences Center從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號轉導、基因調控和蛋白質組學。 近五年發(fā)表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國際核心雜志Molecular and Cel

32、lular Biology(Impact Factor, 10.03)和 Journal of Neuroscience(IF, 8.4)發(fā)表了具有創(chuàng)新性的文章；作為通訊作者，最近在Neurosci Res(IF, 2.4) 和Neurosci Lett（IF，2.2）等期刊上發(fā)表了開拓性的文章。近五年（19982004）作為第一主持人獲得13項基金，包括：4項國家自然科學基金；5項省自然科學基金；3項市基金；1項教育部基金。 發(fā)表的相關論文 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wa

33、ng , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375:712

34、. 2. 3. 第23頁/共59頁 皮榮標(Pi Rongbiao) 33歲，博士學位，講師。2002年畢業(yè)于中山大學，獲神經(jīng)藥理學博士。同年赴香港科技大學生物化學系從事博士后研究，現(xiàn)在中山大學藥學院任講師。主要研究興趣涉及神經(jīng)保護藥物的作用及其機制的研究。曾負責或參加包括國家自然科學基金等多項研究。已發(fā)表或待發(fā)表論著近20篇，其中SCI論文5篇。 皮博士與本人合作達11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發(fā)表多篇SCI論文。他掌握了本項目涉及的大部分實驗方法和技術，尤其在腺病毒載體構建方面積累了經(jīng)驗（見文章）。主要負責腺病毒載體構建等工作。 發(fā)表的相關論文 1. Rongbiao Pi, We

35、nming Li, Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J. Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. 2. 3.

36、 第24頁/共59頁第25頁/共59頁第26頁/共59頁申請項目同行評議意見反饋信 黎明濤先生： 您好！您申請的項目經(jīng)專家投票表決，同意資助。關于你的項目的同行評議意見如下： 1. 本項目在小腦顆粒細胞撤鉀的離體凋亡模型中，發(fā)現(xiàn)了一種直接調節(jié)Bim的新轉錄因子SP1，申請人試圖采用腺病毒轉染技術、基因突變以及分子生物學方法進一步論證SP1是直接調控bim基因的這一假說。立項具有前言性，申請人工作基礎好，并與美國Emory大學、香港大學有長期的合作條件，完全能夠完成本項課題。建議優(yōu)先資助。 2. 本項課題的立項依據(jù)較為充分，具有一定的學術創(chuàng)新及科學意義。研究內容明確、技術路線清晰、研究方法和方案

37、可行。申請者有較高的學術水平，以及多次主持國家自然科學基金課題的經(jīng)驗。同時，申請者所在單位又有比較好的實驗室及條件。建議給予資助。 3. 課題研究具有較好的工作基礎，研究具有較高的學術價值，建議資助。 4. 同意資助。理由：該項目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀誘導神經(jīng)元凋亡時，Bim上調的細胞內信號轉導機制。申請者有較好的研究基礎和研究能力，項目的內容設置合適，重點突出，總體方案合理，技術路線可行，可資助。 5. This is a nicely writen proposal with a clear aim and practical approaches. Further, t

38、he group has published results related to the current proposal, indicating the ability of the group to perform the experiments. 第27頁/共59頁獲得資助的決定因素 工作基礎好 學術創(chuàng)新性及學術價值 立項依據(jù)充分 研究內容明確 技術路線清晰 重點突出、方案合理 國際合作第28頁/共59頁祝大家新年快樂！ 在新的一年獲得更多基金！第29頁/共59頁基金答辯 充滿自信、激情 儀表和體語 特點： 專家心理？按提前結束做準備！ 準備充分 幻燈 小道具 口頭表達 準確性、情感性

39、、可信性和簡明性 開門見山、突出主題 做什么？為什么？怎樣做？ 突出特色和創(chuàng)新第30頁/共59頁帕金森病治療的新靶點及靛玉紅衍生物的研究與開發(fā)黎 明 濤中山大學基礎醫(yī)學院第31頁/共59頁 現(xiàn) 狀： 1.發(fā)病情況： 世界性；中國 100萬；美國 100萬 2.病理特征： 黑質多巴胺神經(jīng)元凋亡 紋狀體多巴胺含量 3.治療現(xiàn)狀： 左旋多巴對癥治療：療效不理想、安全性受 到質疑第32頁/共59頁2002年省重點項目（15萬元）資助 MLK JNK SP600125SP600125 c-Jun 凋亡 第33頁/共59頁以JNK為靶治療PD1. 1. 保護多巴胺能神經(jīng)元2. 2. 改善行為學指標3. 3

40、. 提高黑質多巴胺濃度第34頁/共59頁第35頁/共59頁第36頁/共59頁 結題情況1. 四篇SCI文章， 通訊作者2. 人才培養(yǎng)： 1名 博士 2名 碩士第37頁/共59頁以JNK/CDK5/GSK3為靶治療PD JNK Neurosci Res 2004, 48:195-202 Drug News Perspect.2004 17(10):646-54 GSK3 Mingtao Li, et al, unpublished data CDK5 PNAS USA 2003,100(23):13650-5第38頁/共59頁抑制JNK/CDK5/GSK3的方案 1.三種抑制劑聯(lián)合 2.一種抑制

41、劑，“一石三鳥” 第39頁/共59頁 Nat Cell Biol. 1999 1(1):60-7 J Biol Chem. 2001, 5;276(1):251-60第40頁/共59頁靛玉紅直接抑制JNK活性第41頁/共59頁靛玉紅直接抑制JNK, 保護神經(jīng)元第42頁/共59頁 第43頁/共59頁Indirubin-3-oxime prevented loss of dopamine neurons after MPTP administration. (a) vehicle treated (control); (b) MPTP treated; MPTP along with Indiru

42、bin-3-oxime 5mg/kg (c); 10mg/kg (d) and 30mg/kg (e). Note Indirubin-3-oxime rescued the dopaminergic neurons loss in a dose-dependent manner (c-e). 第44頁/共59頁研究目標 以JNK/CDK5/GSK3為明確靶點，以靛玉紅衍生物為抑制劑, 研發(fā)出一類毒性小、特異性高、作用強的治療PD的新藥物 第45頁/共59頁研究內容1. 篩選對JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物 (11個）2. 篩選對黑質多巴胺神經(jīng)元凋亡具有保護性干預作用的靛玉紅衍生物 （

43、8個）3. 篩選對PD具有治療作用的衍生物 （4個）4. 藥理、毒理研究第46頁/共59頁研究基礎1. 首次證實JNK是治療PD的有效靶點2. 證實GSK-3是治療PD的靶點之一3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對PD具有治療作用4. 15篇相關SCI文章第47頁/共59頁發(fā)表文章補充1.Wiedmann M, Wang X, Tang X, Han M, Li M, Mao Z. J Neurosci Res. 2005 Jun 1 Epub ahead of print 2.Wang X, Tang X, Li M, Marshall J, Mao Z. J Biol Chem. 20

44、05, 280(17):16705-13. 3.Li W, Pi R, Chan HH, Fu H, Lee NT, Tsang HW, Pu Y, Chang DC, Li C, Luo J, Xiong K, Li Z, Xue H, Carlier PR, Pang Y, Tsim KW, Li M, Han Y. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88.第48頁/共59頁創(chuàng) 新 點 1. 首次證實JNK是治療PD的有效靶點 2. 證實GSK-3是治療PD的靶點之一 3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑制JNK，對PD具有治療作用 4. JNK/CDK5/ GSK-3為

45、靶治療PD 5. 用一種化合物抑制JNK/CDK5/ GSK-3 第49頁/共59頁我們對完成此項目充滿信心！第50頁/共59頁Fig.6 Mithramycin A, a SP1-DNA binding inhibitor, attenuates bim upreguation by activity deprivation in CGNs. (A) Mithramycin A attenuates the upregulation of BimEL induced by activity deprivation in a dose dependent manner. CGNs were p

46、laced in 25K or 5K media in the absence or presence of mithramycin A at the indicated concentrations for 6 h. BimEL expression was assessed by Western blot as described in Fig.1(A). Results shown are representative of four separate experiments. (B) Mithramycin A inhibits the increase in bim mRNA lev

47、el in a dose-dependent manner. Neurons were treated as described in (A), bim and actin mRNAs were determined by RT-PCR, Results shown are representative of five separate experiments. (C) Mithramycin A suppresses the activation of bim promoter induced by activity deprivation. Neurons were co-transfec

48、ted with bim-Luc and pEF-RL for 8 hr. Luciferase activities were measured as described in Fig.2, The experiments were repeated three times with duplicates for each treatment. The data represent S.E.M. of three experiments. 第51頁/共59頁參 考 文 獻1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling

49、Liu,Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li. Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：712. 2. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinsons disease.