譜圖異常問題與原因

1、天津市天興達科技有限公司譜 圖 問 題液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。a、 峰拖尾原 因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱 b、更換進口篩板 c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長的色譜柱 b、改變流動相或更換色譜柱4、流動相PH選擇錯誤4、調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰5、樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱b、 峰前延原 因解決方法1、柱

2、溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當2、使用流動相作為樣品溶劑3、樣品過載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見A1、A2c、 峰分叉原 因解決方法1、 保護柱或分析柱污染1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。d、 峰變形原 因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量e、 早出的峰變形原 因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當1、a、減少進樣體積 b、運用低極性樣品溶劑f、

3、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解決方法1、柱外效應1、a、調整系統(tǒng)連接（使用更短、內徑更小的管路） b、使用小體積的流通池g、 K增加時，脫尾更嚴重原 因解決方法1、二級保留效應，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d、更換一支柱子 2、二級保留效應，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團化合物） d、試用另一種方法3、二級保留效應，離子對3、加入三乙胺（或堿性樣品）h、 酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因解決方法1、緩沖不合適1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b

4、、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液i、 額外的峰原 因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進樣的洗脫峰2、a、增加運行時間或梯度斜率 b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、檢查流動相是否純凈 b、使用流動相作為樣品溶劑 c、減少進樣體積j、 保留時間波動原 因解決方法1、溫控不當1、調好柱溫2、流動相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應等）3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱k、 保留時間不斷變化原 因解決方法1、流速變化1、重新設定流速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動相選擇不恰當3、a、更換合適的流動相 b、選擇合適的混合流動相l(xiāng)、 基線漂移原 因解決方

5、法1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。）2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。5、流動相配比不當或流速變化5、更改

6、配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成7、檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑8、樣品中有強保留的物質（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調整。9、重新設定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。10、將波長調整至最大

7、吸收波長處m、 基線噪音（規(guī)則的）原 因解決方法1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。2、漏液2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動相混合不完全3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設備5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、泵振動6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器n、 基線噪音（不規(guī)則的）原 因解決方法1、 漏液1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出

8、和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動相污染、變質或由低質溶劑配成2、檢查流動相的組成。3、流動相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動相4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內有氣泡5、用強極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測器內有氣泡6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、檢測器燈能量不足8、更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置o

9、、 寬峰原 因解決方法1、流動相組成變化1、重新制備新的流動相2、流動相流速太低2、調節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。4、檢測器設定不正確4、調整設定5、柱外效應影響a、 柱子過載b、檢測器對反應時間或池體積響應過大c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大d、記錄儀響應時間太長5、a、 小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品b、 減少響應時間或使用更小的流通池c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路d、 減少響應時間6、緩沖液濃度太

10、低6、增加濃度7、保護柱污染或失效7、更換保護柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過7512、檢測器時間常數(shù)太大12、使用較小的時間常數(shù)p、 分離度降低原 因解決方法1、流動相污染或變質（引起保留時間變化）1、重新配置流動相2、保護柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在

11、色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。q、 所有的峰面積都太小原 因解決方法1、檢測器衰減設定過高1、減少衰減的設定2、檢測器時間常數(shù)設定太大2、設定較小的時間常數(shù)3、進樣量太少3、增大進樣量4、記錄儀連接不當4、使用正確的連接r、 所有的峰面積都太大原 因解決方法1、檢測器衰減設定過低1、采取較大的衰減2、進樣過多2、減少進樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀資料由天津市天興達科技有限公司整理提供，天津市天興達科技有限公司是依托天津著名高校建立的專業(yè)服務于科研人員及各個企事業(yè)單位檢測機構的科技公司。目前主要代理美國SCIENTIFIC SYSTEM公司（SSI）的LabAlliance品牌液相色譜儀及各種國內外液相耗材。同時也從事液相色譜柱的生產(chǎn)和銷售、液相色譜檢測方法的開發(fā)。目前SSI儀器及各種液相色譜耗材正在優(yōu)惠熱銷中，歡迎登陸公司網(wǎng)址查詢或來電來