高效液相色譜分析(主要分離類型與原理)

1、2021-10-25第第三三章章高效液相色譜分高效液相色譜分析析一、液一、液- -固吸附色譜固吸附色譜liquid-solid adsorption chromatograph二、液二、液- -液分配色譜液分配色譜liquid- liquid partition chromatograph三、離子交換色譜三、離子交換色譜ion-exchange chromatograph四、離子色譜四、離子色譜ion chromatograph五、離子對(duì)色譜五、離子對(duì)色譜ion-pair chromatograph六、排阻色譜六、排阻色譜size- exclusion chromatograph七、親和色譜七

2、、親和色譜( (AC)AC)Affinity chromatograph第二節(jié)第二節(jié)主要分離類型與原理主要分離類型與原理high performance liquid chromatographbasic principle and main separating types2021-10-25一、一、 液液-固吸附色譜固吸附色譜liquid-solid adsorption chromatography 固定相固定相：固體吸附劑為，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是510m的硅膠吸附劑； 流動(dòng)相流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。 基本原理基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸； 適用于分

3、離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性； 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；2021-10-25二、二、 液液-液分配色譜液分配色譜liquid- liquid partition chromatography 固定相與流動(dòng)相均為液體（互不相溶）； 基本原理基本原理：組分在固定相和流動(dòng)相上的分配； 流動(dòng)相流動(dòng)相：對(duì)于親水性固定液，采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定液的極性（正相正相 normal phase），反之，流動(dòng)相的極性大于固定液的極性（反相反相 reverse phase）。正相與反相的出峰順序相反； 固定相固定相：早期涂漬固定液，固定液

4、流失，較少采用； 化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相：（將各種不同基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠（擔(dān)體）表面的游離羥基上。C-18柱（反相柱）。2021-10-25三、三、 離子交換色譜離子交換色譜ion-exchange chromatography 固定相固定相：陰離子離子交換樹(shù)脂或陽(yáng)離子離子交換樹(shù)脂； 流動(dòng)相流動(dòng)相：陰離子離子交換樹(shù)脂作固定相，采用酸性水溶液；陽(yáng)離子離子交換樹(shù)脂作固定相，采用堿性水溶液； 基本原理基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)； 陽(yáng)離子交換：RSO3H +M+ = RSO3 M

5、+ H + 陰離子交換：RNR4OH +X- = RNR4 X + OH- 應(yīng)用應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。2021-10-25四、四、 離子色譜離子色譜ion chromatography 離子色譜是在20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來(lái)的一中技術(shù)，其與離子交換色譜的區(qū)別是其采用了特制的、具有極低交換容量的離子交換樹(shù)脂作為柱填料，并采用淋洗液抑制技術(shù)和電導(dǎo)檢測(cè)器，是測(cè)定混合陰離子的有效方法。 有關(guān)內(nèi)容將在第十章第六節(jié)中講授。2021-10-25五、五、 離子對(duì)色譜離子對(duì)色譜ion pair chromatography 原理原理：將一種（或多種）與溶質(zhì)離子電荷相反的離子（對(duì)離子或反離

6、子）加到流動(dòng)相中使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水性離子對(duì)化合物，使其能夠在兩相之間進(jìn)行分配； 陰離子分離陰離子分離：常采用烷基銨類，如氫氧化四丁基銨或氫氧化十六烷基三甲銨作為對(duì)離子； 陽(yáng)離子分離陽(yáng)離子分離：常采用烷基磺酸類，如己烷磺酸鈉作為對(duì)離子； 反相離子對(duì)色譜反相離子對(duì)色譜：非極性的疏水固定相(C-18柱)，含有對(duì)離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動(dòng)相，試樣離子X(jué)-進(jìn)入流動(dòng)相后，生成疏水性離子對(duì)Y+ X -后；在兩相間分配。2021-10-25六、六、 排阻色譜色譜排阻色譜色譜size- exclusion chromatography 固定相固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)； 原理原理：按

7、分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。 全部在死體積前出峰； 可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在100-105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離 2021-10-25七、七、 親和色譜親和色譜(AC) Affinity chromatograph 原理原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。 先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂(環(huán)氧、聯(lián)胺等)，再連接上配基(酶、抗原等)，這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改變淋洗液后洗脫。2021-10-25請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器feature and instrument of HPLC第二節(jié)第二節(jié) 基本原理與主要分離類型基本原理與主要分離類型basic principle and main separating type第三節(jié)第三節(jié) 固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相stationary phase and mobile phase 第四節(jié)第四節(jié) 影響分離的因素與操作條件選擇影響分離的因素與操作條件選擇factors influenced separation a