劉海英-過敏變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室檢查

1、 小兒過敏變態(tài)反應(yīng)疾病實(shí)驗(yàn)小兒過敏變態(tài)反應(yīng)疾病實(shí)驗(yàn)室檢查與臨床意義室檢查與臨床意義劉海英廣州市婦女兒童醫(yī)療中心免疫實(shí)驗(yàn)室變態(tài)反應(yīng)（變態(tài)反應(yīng)（allergy)過敏反應(yīng)（過敏反應(yīng)（anaphylaxis)超敏反應(yīng)（超敏反應(yīng)（hypersensitivity) 均指機(jī)體受同一抗原物質(zhì)再次刺激后產(chǎn)生的均指機(jī)體受同一抗原物質(zhì)再次刺激后產(chǎn)生的一種異常或病理性免疫反應(yīng)。機(jī)體防御反應(yīng)的一一種異?；虿±硇悦庖叻磻?yīng)。機(jī)體防御反應(yīng)的一種特殊表現(xiàn)形式。種特殊表現(xiàn)形式。類型類型過敏原過敏原抗體抗體細(xì)胞細(xì)胞相關(guān)介質(zhì)相關(guān)介質(zhì)發(fā)病部位發(fā)病部位I型型食物（魚、蝦、蟹、貝類、食物（魚、蝦、蟹、貝類、蛋白和牛奶等）；蛋白和牛奶等）

2、；植物花粉（法國(guó)梧桐、楊、楓柏、植物花粉（法國(guó)梧桐、楊、楓柏、蔾、律草、黃篙、雪松、豕草的蔾、律草、黃篙、雪松、豕草的花粉、人及動(dòng)物皮屑、動(dòng)物羽毛、花粉、人及動(dòng)物皮屑、動(dòng)物羽毛、昆蟲、真菌、寄生蟲、藥物（青昆蟲、真菌、寄生蟲、藥物（青霉素及其降解產(chǎn)物青霉烯酸）、霉素及其降解產(chǎn)物青霉烯酸）、屋塵和其他化學(xué)物質(zhì)屋塵和其他化學(xué)物質(zhì)IgE肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞嗜堿細(xì)胞嗜堿細(xì)胞嗜酸細(xì)胞嗜酸細(xì)胞組胺組胺LTC4、D4PAFPGECP鼻咽鼻咽扁桃腺扁桃腺支氣管支氣管胃腸粘膜胃腸粘膜II型型ABO血型抗原、血型抗原、Rh抗原抗原被修飾過的自身抗原被修飾過的自身抗原血細(xì)胞碎片、變性血細(xì)胞碎片、變性DNAIgGIgMI

3、gA吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞K細(xì)胞細(xì)胞中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞補(bǔ)體補(bǔ)體Fc受體受體全身全身III型型變性變性IgG、腫瘤抗原、腫瘤抗原病原微生物、異種血清病原微生物、異種血清IgGIgMIgA肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞嗜堿細(xì)胞嗜堿細(xì)胞中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞補(bǔ)體補(bǔ)體腎臟腎臟關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)IV型型微生物（微生物（TB、病毒、真菌）、病毒、真菌）寄生蟲、組織抗原、化學(xué)物質(zhì)寄生蟲、組織抗原、化學(xué)物質(zhì)TDTHTC淋巴因子淋巴因子皮膚皮膚 變態(tài)反應(yīng)類型變態(tài)反應(yīng)類型 過敏原檢測(cè)過敏原檢測(cè)（一）皮內(nèi)特異性診斷（一）皮內(nèi)特異性診斷原理：原理：I型或型或IV型變態(tài)反應(yīng)型變態(tài)反應(yīng)適應(yīng)癥：適應(yīng)癥：速發(fā)型外源性過敏、遲發(fā)型中屬于接觸性過敏；速發(fā)型外

4、源性過敏、遲發(fā)型中屬于接觸性過敏；應(yīng)不在強(qiáng)烈過敏反應(yīng)發(fā)作期；應(yīng)不在強(qiáng)烈過敏反應(yīng)發(fā)作期；近期內(nèi)未使用有關(guān)治療藥物；近期內(nèi)未使用有關(guān)治療藥物；無明顯的皮膚劃痕征；無明顯的皮膚劃痕征；受試皮膚沒有沒有濕疹、蕁麻疹等皮膚損害。受試皮膚沒有沒有濕疹、蕁麻疹等皮膚損害。 1、斑貼試驗(yàn)、斑貼試驗(yàn)前臂，前臂，24-48 h觀察，觀察，72 h報(bào)告陰性。報(bào)告陰性。I度：皮膚呈輕度紅腫、皮疹、皮癢；度：皮膚呈輕度紅腫、皮疹、皮癢；II度：散在小皮疹出現(xiàn)、明顯癢；度：散在小皮疹出現(xiàn)、明顯癢；III度：有成片的皮疹或大泡疹出現(xiàn)；度：有成片的皮疹或大泡疹出現(xiàn)；IV度：皮膚滲出、潰瘍、壞死。度：皮膚滲出、潰瘍、壞死。 注

5、意事項(xiàng)注意事項(xiàng)假陰性：皮膚不能吸收變應(yīng)原假陰性：皮膚不能吸收變應(yīng)原假陽(yáng)性：變應(yīng)原對(duì)皮膚有非特異性刺激；假陽(yáng)性：變應(yīng)原對(duì)皮膚有非特異性刺激；局限性：每次受試品種有限，時(shí)間長(zhǎng)，造局限性：每次受試品種有限，時(shí)間長(zhǎng)，造 成反應(yīng)過重的痛苦成反應(yīng)過重的痛苦使用范圍：化妝品、化學(xué)制劑過敏使用范圍：化妝品、化學(xué)制劑過敏 接觸性過敏接觸性過敏 2、劃痕試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)成人前臂，兒童背心，成人前臂，兒童背心，15-20min。+：皮膚稍隆起，周邊輕度紅斑；：皮膚稍隆起，周邊輕度紅斑；+：丘疹樣隆起超出劃痕范圍，周邊明顯紅斑；：丘疹樣隆起超出劃痕范圍，周邊明顯紅斑；+：丘疹出現(xiàn)偽足，周邊呈寬而不規(guī)則紅斑；：丘疹出現(xiàn)偽

6、足，周邊呈寬而不規(guī)則紅斑；+：丘疹出現(xiàn)：丘疹出現(xiàn)2個(gè)以上偽足、發(fā)癢，周邊紅腫個(gè)以上偽足、發(fā)癢，周邊紅腫 明顯。明顯。 3、點(diǎn)刺試驗(yàn)、點(diǎn)刺試驗(yàn) 劃痕試驗(yàn)的改良，因方法簡(jiǎn)便，近年廣劃痕試驗(yàn)的改良，因方法簡(jiǎn)便，近年廣泛采用，尤其適用于兒童。泛采用，尤其適用于兒童。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化試劑國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化試劑：德國(guó)阿羅格皮膚點(diǎn)刺液：德國(guó)阿羅格皮膚點(diǎn)刺液方法方法：患兒前臂內(nèi)側(cè)皮膚，酒精消毒，間隔：患兒前臂內(nèi)側(cè)皮膚，酒精消毒，間隔 2cm,滴點(diǎn)刺液，滴點(diǎn)刺液，5min吸去，吸去，20min后后 觀察。觀察。 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 變應(yīng)原與組胺風(fēng)團(tuán)直徑之比判定結(jié)變應(yīng)原與組胺風(fēng)團(tuán)直徑之比判定結(jié)果，如風(fēng)團(tuán)出現(xiàn)偽足加一級(jí)。果，如風(fēng)團(tuán)

7、出現(xiàn)偽足加一級(jí)。 + 1：4 + 1：2 + 1：1 + 2：1 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)適應(yīng)癥、強(qiáng)烈反應(yīng)、延長(zhǎng)觀察時(shí)間適應(yīng)癥、強(qiáng)烈反應(yīng)、延長(zhǎng)觀察時(shí)間三歲以下幼兒不適合三歲以下幼兒不適合設(shè)置陰、陽(yáng)對(duì)照設(shè)置陰、陽(yáng)對(duì)照 4、皮內(nèi)試驗(yàn)、皮內(nèi)試驗(yàn) 方法同青霉素皮試方法同青霉素皮試不同變應(yīng)原，濃度不同不同變應(yīng)原，濃度不同其他注意事項(xiàng)、防范措施同青霉素皮試其他注意事項(xiàng)、防范措施同青霉素皮試5、眼結(jié)膜試驗(yàn)、眼結(jié)膜試驗(yàn)6、鼻內(nèi)激發(fā)試驗(yàn)、鼻內(nèi)激發(fā)試驗(yàn)7、支氣管激發(fā)試驗(yàn)、支氣管激發(fā)試驗(yàn)8、離子透入試驗(yàn)、離子透入試驗(yàn)9、舌下試驗(yàn)、舌下試驗(yàn)10、食物激發(fā)、食物激發(fā)（二）、體外特異性診斷（二）、體外特異性診斷放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)

8、（放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)（RAST）Radioallergosorbent test 為一種檢測(cè)異性為一種檢測(cè)異性IgE的固相放射免疫測(cè)定法。的固相放射免疫測(cè)定法。先將食物抗原與溴化氰活化的固相載體結(jié)合，加入先將食物抗原與溴化氰活化的固相載體結(jié)合，加入待檢的血清共同孵育。再經(jīng)洗滌離心后，加入待檢的血清共同孵育。再經(jīng)洗滌離心后，加入125I標(biāo)記的抗標(biāo)記的抗IgE血清，與結(jié)合在變應(yīng)原上的特異性血清，與結(jié)合在變應(yīng)原上的特異性IgE發(fā)生反應(yīng)。孵育后再次洗滌，測(cè)定固相載體的放射發(fā)生反應(yīng)。孵育后再次洗滌，測(cè)定固相載體的放射活性，以其判斷血清中活性，以其判斷血清中IgE含量。含量。變應(yīng)原變應(yīng)原：純化、標(biāo)準(zhǔn)化：純

9、化、標(biāo)準(zhǔn)化載體載體：試管法、紙片法、：試管法、紙片法、CAP 提高靈敏度提高靈敏度 縮短試驗(yàn)時(shí)間縮短試驗(yàn)時(shí)間 增強(qiáng)特異性增強(qiáng)特異性標(biāo)記二抗標(biāo)記二抗：多克隆、單克隆：多克隆、單克隆顯示方法顯示方法：放免法、酶標(biāo)法、熒光酶標(biāo)法：放免法、酶標(biāo)法、熒光酶標(biāo)法 保持靈敏度、特異性，安全性提高保持靈敏度、特異性，安全性提高RAST商品化檢測(cè)系統(tǒng)商品化檢測(cè)系統(tǒng)： CAP、Master、DPC、PXUniCAP100熒光酶標(biāo)法：熒光酶標(biāo)法：T-IgE, S-IgE,ECP變應(yīng)原：變應(yīng)原：?jiǎn)蝺r(jià)單價(jià)多價(jià)，幾種性質(zhì)相似（真菌、花粉）多價(jià)，幾種性質(zhì)相似（真菌、花粉）過篩用變應(yīng)原：吸入性過篩用變應(yīng)原：吸入性Phadia

10、top 食物性食物性Fx5E 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)CAPCAP：T-IgET-IgE羊抗人羊抗人IgEIgE ECP - ECP - 羊抗人羊抗人ECPECPIgEIgE標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品：6 6個(gè)濃度，個(gè)濃度，WHO75/502WHO75/502熒光酶標(biāo)二抗熒光酶標(biāo)二抗：-半乳糖苷酶標(biāo)記抗人半乳糖苷酶標(biāo)記抗人IgEIgE底物底物：4-4-甲基傘桂甲基傘桂- - -半乳糖苷半乳糖苷標(biāo)本采集要求標(biāo)本采集要求： T-IgE,S-IgE: 空腹靜脈血空腹靜脈血3-5毫升，干燥管毫升，干燥管ECP：2-3毫升，硅化真空管（毫升，硅化真空管（SST管）管）嚴(yán)重溶血、脂血標(biāo)本不可用！嚴(yán)重溶血、脂血標(biāo)本不可用！熒光酶法分級(jí)熒

11、光酶法分級(jí)S-IgES-IgE（KU/LKU/L）S-IgES-IgE水平水平臨床意義臨床意義0 0 0.35 0.35無或不能檢出無或不能檢出 無過敏無過敏1 10.350.35低低可疑或輕度過敏可疑或輕度過敏2 20.70.7較低較低輕度過敏輕度過敏3 33.53.5中中中度過敏中度過敏4 417.517.5較高較高中、重度過敏中、重度過敏5 55050高高重度過敏重度過敏6 6100100特高特高特重度過敏特重度過敏特異性特異性IgE(S-IgE)定量結(jié)果分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義定量結(jié)果分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義參考范圍：參考范圍：T-IgE： 60 KU/LECP： 15g/L （SST管）管）影響

12、因素：影響因素：年齡年齡 性別性別 種族種族 寄生蟲感染寄生蟲感染建議建立每個(gè)試驗(yàn)室的正常參考區(qū)間建議建立每個(gè)試驗(yàn)室的正常參考區(qū)間 結(jié)果分析結(jié)果分析 1、T-IgE正常，正常，S-IgE升高升高 S-IgE 18 KU/L IV級(jí) T-IgE 18 KU/L 結(jié)論：結(jié)論：T-IgE高不一定是過敏，過敏者高不一定是過敏，過敏者T-IgE 不一定高，不一定高，S-IgE檢測(cè)有重要意義檢測(cè)有重要意義 結(jié)果分析結(jié)果分析 2、S-IgE與皮試差別與皮試差別區(qū)域差別：豚草區(qū)域差別：豚草國(guó)外多，國(guó)內(nèi)少國(guó)外多，國(guó)內(nèi)少 葎葎草草國(guó)內(nèi)常見，國(guó)外少國(guó)內(nèi)常見，國(guó)外少特殊物質(zhì)：特殊物質(zhì)：S-IgE對(duì)某些小分子變應(yīng)原對(duì)某

13、些小分子變應(yīng)原（青（青 霉烯酸）檢測(cè)靈敏度不高。霉烯酸）檢測(cè)靈敏度不高。S-IgE低或正常并不能排除該項(xiàng)過敏的可能性低或正常并不能排除該項(xiàng)過敏的可能性 結(jié)果分析結(jié)果分析 3、吸入性過篩試驗(yàn)、吸入性過篩試驗(yàn) Phadiatop包含多種吸入性變應(yīng)原，陽(yáng)性者包含多種吸入性變應(yīng)原，陽(yáng)性者分為分為1-6級(jí)，為多種級(jí)，為多種S-IgE的總和，濃度越高，的總和，濃度越高，表明體內(nèi)表明體內(nèi)S-IgE越多。越多。可以是某種可以是某種S-IgE很高，也可能是多種變應(yīng)原很高，也可能是多種變應(yīng)原S-IgE累加的結(jié)果。累加的結(jié)果。未包括我國(guó)重要的變應(yīng)原未包括我國(guó)重要的變應(yīng)原葎葎草花粉、蠶絲及真菌，草花粉、蠶絲及真菌，可能會(huì)漏檢只對(duì)這三種過敏的患兒?？赡軙?huì)漏檢只對(duì)這三種過敏的患兒。 結(jié)果分析結(jié)果分析 4、ECP ECP反映了反映了EOS激活的程度及其分泌激活的程度及其分泌毒性蛋白能力，其含量與活化毒性蛋白能力，其含量與活化EOS數(shù)目呈數(shù)目呈正相關(guān)。但是，活化的正相關(guān)。但是，活化的EOS并非末梢血中并非末梢血中EOS的全部。的全部。 因而因而EOS計(jì)數(shù)不能代替計(jì)數(shù)不能代替ECP檢測(cè)。檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)皮膚試驗(yàn)皮膚試驗(yàn)S-IgE檢測(cè)檢