細胞培養(yǎng)概述課件

1、細胞培養(yǎng)概述細胞培養(yǎng)2003- 4細胞培養(yǎng)概述細胞培養(yǎng)的優(yōu)點細胞培養(yǎng)的優(yōu)點1.活細胞活細胞：能能長時間長時間、直接觀察直接觀察、研究、研究 活細胞活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動細胞培養(yǎng)概述優(yōu)點優(yōu)點 2.可控制可控制：可控制可控制-選擇對象選擇對象：均一性、重復(fù)性：均一性、重復(fù)性 哪一種：類型：上皮？間質(zhì)？哪一種：類型：上皮？間質(zhì)？- 性質(zhì)：正常？腫瘤？性質(zhì)：正常？腫瘤？- 階段：階段：可控制可控制-調(diào)節(jié)條件調(diào)節(jié)條件：各種因素：各種因素 物理、化學、生物等因素物理、化學、生物等因素細胞培養(yǎng)概述優(yōu)點優(yōu)點2.可控制可控制：可控制可控制-利用方法利用方法： 采用各種研究技術(shù)、記錄方

2、法：采用各種研究技術(shù)、記錄方法： 研究：倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、研究：倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、 電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦 顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、 同位素標記同位素標記- 記錄：攝影照片、縮時電影、電視記錄：攝影照片、縮時電影、電視-細胞培養(yǎng)概述優(yōu)點優(yōu)點3.應(yīng)用廣應(yīng)用廣： 學科多學科多： 對象廣對象廣： 各種動物：低等動物各種動物：低等動物-高等動物高等動物-人類人類 一種動物：不同年齡一種動物：不同年齡- 不同組織不同組織- 正?；虍惓＃[瘤正常或異常（腫瘤-）細胞培養(yǎng)概述優(yōu)點優(yōu)點4.較經(jīng)濟較經(jīng)濟：可提供

3、可提供大量大量、同時同時、重復(fù)性好重復(fù)性好的、的、 生物學性狀相似生物學性狀相似的實驗對象的實驗對象細胞培養(yǎng)概述細胞培養(yǎng)的缺點細胞培養(yǎng)的缺點 現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高, 但但, 人工所模擬的條件人工所模擬的條件與與體內(nèi)體內(nèi)實際情況實際情況 仍仍不完全相同不完全相同. 當細胞被置于當細胞被置于體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)后后, 生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中, 久了，必然久了，必然發(fā)生變化發(fā)生變化.細胞培養(yǎng)概述1.與體內(nèi)主要不同與體內(nèi)主要不同 相對相對孤立孤立、相對單一、相對單一 缺乏體內(nèi)的缺乏體內(nèi)的系統(tǒng)作用、失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)系統(tǒng)作用、失去神經(jīng)

4、體液的調(diào)節(jié) 和細胞相互間的和細胞相互間的影響影響 細胞培養(yǎng)概述缺點缺點2.主要表現(xiàn)主要表現(xiàn) 失去原有組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)失去原有組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài) 分化減弱或不顯分化減弱或不顯 細胞趨向細胞趨向單一化單一化； 3.提示提示 要正確認識要正確認識體外培養(yǎng)細胞體外培養(yǎng)細胞 是一種特定條件下生長的細胞群體。是一種特定條件下生長的細胞群體。細胞培養(yǎng)概述生長類型生長類型細胞培養(yǎng)概述體外細胞培養(yǎng)物的生長類型體外細胞培養(yǎng)物的生長類型 按生長方式按生長方式:2型型 粘附型粘附型細胞細胞:附著在某一固相支持物表面才附著在某一固相支持物表面才 能生長的細胞。能生長的細胞。 懸浮型懸浮型細胞細胞:不必附著于固相支持物

5、表面，而不必附著于固相支持物表面，而 在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。 絕大多數(shù)絕大多數(shù)有機體細胞有機體細胞屬粘附型屬粘附型細胞，細胞， 只有少數(shù)細胞類型如某些腫瘤細胞和白細胞只有少數(shù)細胞類型如某些腫瘤細胞和白細胞 可在懸浮狀態(tài)下生長可在懸浮狀態(tài)下生長 細胞培養(yǎng)概述貼附貼附(粘附粘附)型細胞型細胞 粘附粘附:是大多數(shù)有機體是大多數(shù)有機體細胞細胞在體內(nèi)在體內(nèi) 生存生存和和生長發(fā)育生長發(fā)育的的基本存在方式基本存在方式含義含義 兩兩方面方面結(jié)果結(jié)果 基于粘附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組織，基于粘附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組織， 有機體的絕大多數(shù)細胞必須有機體

6、的絕大多數(shù)細胞必須 粘附粘附于一于一固相表面固相表面 才能才能生存生存和和生長生長。細胞培養(yǎng)概述培養(yǎng)時培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某同樣需要粘附于某一固相表面才能生存和生長，因而一固相表面才能生存和生長，因而屬于粘附型細胞屬于粘附型細胞。粘附粘附(錨定或錨著錨定或錨著)依賴型依賴型(性性)細胞：唯有粘附于細胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細胞固相表面才能生存的細胞細胞培養(yǎng)概述 類型類型 細胞在體內(nèi)、外細胞在體內(nèi)、外的的粘附粘附方式方式：存在差異存在差異 體內(nèi)體內(nèi)：粘附粘附是是全方位全方位 外形外形具有具有復(fù)雜的立體特征復(fù)雜的立體特征 體外體

7、外：多數(shù)情況，細胞只有多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面一個附著平面 外形外形一般一般與體內(nèi)時明顯不同與體內(nèi)時明顯不同 按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型幾大類型 細胞培養(yǎng)概述分類分類 根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要2類：類： 上皮樣上皮樣 成纖維細胞樣成纖維細胞樣 其它，不定型其它，不定型細胞培養(yǎng)概述上皮樣細胞型上皮樣細胞型 名稱：名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全等于，實際上不完全等于-來源：來源：來源于外胚層來源于外胚層，內(nèi)胚層細胞，內(nèi)胚層細胞 如：皮膚及其衍生物如：皮膚及其衍生物 消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡 上皮性

8、腫瘤上皮性腫瘤形態(tài)：形態(tài)：類似類似體內(nèi)的體內(nèi)的上皮細胞上皮細胞 扁平扁平，不規(guī)則多角形不規(guī)則多角形，中有圓形核，中有圓形核 細胞培養(yǎng)概述生長特點生長特點 易相連易相連成片成片 相靠相靠緊密相連緊密相連成薄層成薄層 鋪石狀鋪石狀 生長生長時呈時呈膜狀膜狀移動移動 很少很少脫離細胞群而脫離細胞群而單個活動單個活動 細胞培養(yǎng)概述成纖維細胞樣細胞成纖維細胞樣細胞 名稱：名稱：凡在凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似的的來源：來源：由由中胚層間充質(zhì)組織起源中胚層間充質(zhì)組織起源的組織的組織 如：真正的成纖維細胞如：真正的成纖維細胞 心肌，平滑肌，成骨細胞，血管內(nèi)皮心肌，平滑肌，成骨細胞

9、，血管內(nèi)皮形態(tài)：形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)的形態(tài) 胞體梭形胞體梭形或不規(guī)則三角形或不規(guī)則三角形 胞質(zhì)向外伸出胞質(zhì)向外伸出23個個長短不等的突起長短不等的突起 中有卵圓形核中有卵圓形核細胞培養(yǎng)概述生長特點生長特點 排列成排列成放射狀放射狀，漩渦狀漩渦狀 并不緊靠連成片并不緊靠連成片， 細胞細胞細胞接觸易斷開而細胞接觸易斷開而 單獨行動單獨行動 游離的游離的單獨的單獨的成纖維樣細胞，成纖維樣細胞， 常有幾個常有幾個伸長的細胞突起伸長的細胞突起 細胞培養(yǎng)概述貼附生長型-類型1. 與體內(nèi)與體內(nèi)同名的同名的細胞細胞不完全相同不完全相同 如：如：形態(tài)相似形態(tài)相似的成纖維細胞，的成纖維細胞

10、，可不同來源可不同來源 自 同 一 動 物 不 同 組 織 的 成 纖 維 樣 細 胞 相 似 但自 同 一 動 物 不 同 組 織 的 成 纖 維 樣 細 胞 相 似 但 發(fā)展趨向不同發(fā)展趨向不同2. 培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)細胞的形態(tài)不穩(wěn)定形態(tài)不穩(wěn)定 條件改變條件改變，細胞形態(tài)，細胞形態(tài)可有變化可有變化 細胞培養(yǎng)概述培養(yǎng)細胞形態(tài)不穩(wěn)定培養(yǎng)細胞形態(tài)不穩(wěn)定血清血清 Hela 高血清高血清 低血清低血清 成纖維細胞樣成纖維細胞樣 上皮樣細胞上皮樣細胞 pH Hela 太酸或太堿太酸或太堿 標準標準pH 成纖維細胞樣成纖維細胞樣 上皮樣細胞上皮樣細胞 細胞密度細胞密度 3T3 低密度低密度 高密度高密度 成纖維細胞樣成纖維細胞樣 上皮樣細胞上皮樣細胞 生長狀態(tài)改變生長狀態(tài)改變 懸浮或貼附懸浮或貼附 懸浮懸浮 貼附貼附 圓形圓形 成纖維或上皮樣成纖維或上皮樣 轉(zhuǎn)化與否轉(zhuǎn)化與否 未轉(zhuǎn)化未轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)化后 成纖維樣成纖維樣 可成上皮樣可成上皮樣 細胞培養(yǎng)概述懸浮生長型懸浮生長型概念概念 培養(yǎng)時培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長 或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源來源 自自血血，脾或骨髓，脾或骨髓， 尤以血中白細胞尤以血中白細胞 癌腫細胞也可能癌腫細胞也可能特