HPLC法測定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量

1、HPLC法測定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量【摘要】 目的：建立牛黃清胃丸的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（250 mmX4.6 mm,5 um），流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V），流速：1.0ml·min-1，檢測波長：254nm，柱溫：30。結果：大黃素在10.0450.20g·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好（r =0.9998）；平均加樣回收率為97.6%， RSD=3.4%（n=6）；大黃酚在20.0460.12g·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好（r =1.0000）；平均加樣回收率為98.5%

2、， RSD 3.1%（n=6）。結論：該方法簡便易行，結果準確可靠，可適用于牛黃清胃丸的質(zhì)量控制。 【關鍵詞】 高效液相色譜法 牛黃清胃丸 大黃素 大黃酚 含量測定 Determination the content of Emodin and Chrysophanol in Niuhuangqinwei pills by HPLC 【Abstract objective】To establish a HPLC method for determination the content of emodin and chysophanol in Niuhuangqingwei pills. MET

3、HOD: The shimadzu VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 um) was used, the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution(80:20), the column temperature was 30 ,the detection wavelength was 254 nm.the flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS The linear ranges of emodin and chrysophanol were at 10.0

4、4-50.20 ug(r=0.999 8) and 20.4-60.12 ug.ml-1(r=1.000 0) respectively, the average recoveries(n=6) were 97.6% and 98.5% with RSD 3.4% and 3.1% respeclivery. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of Niuhuangqingwei pills. 【Key words】 HPLC; Niuhuangqingwei pil

5、ls; emodin;chrysophanol; determination 牛黃清胃丸為衛(wèi)生部藥品標準第一冊（中藥成方制劑）收載的品種，由牛黃、大黃、菊花、黃芩、黃柏、桔梗、麥冬等17味中藥組成，具有清胃瀉火、潤燥通便之功效。臨床用于心胃火盛，頭暈目眩，口舌生瘡，牙齦腫痛，乳蛾咽痛，便秘尿赤1，療效良好。處方中大黃為君藥之一，大黃素和大黃酚為其主要有效成分，原標準中只有顯微鑒別。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量，以期為該制劑的質(zhì)量提供快速、準確的測定方法，現(xiàn)報告如下。 1 儀器與試藥 LC2010A 高效液相色譜儀，CLASSVP 色譜

6、工作站；大黃素對照品（批號：110756-200110），大黃酚對照品（批號：110796-200310），由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；牛黃清胃丸為市售樣品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，規(guī)格6g/丸，批號： 6015504，7013189，7011172）。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。 2 方法與結果 2.1 色譜條件 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5 um)；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V）；檢測波長：254nm；流速：1.0ml·min-1；柱溫：30。 2.2 溶液制備

7、 2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h以上的大黃素對照品和大黃酚對照品各適量，分別加甲醇制成每1ml各含0.1mg的對照品貯備液；再精密量取大黃素對照品貯備液和大黃酚對照品貯備液各適量，加甲醇制成每1ml含大黃素15g、大黃酚25g的混合溶液，作為對照品溶液。 2.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項下的牛黃清胃丸，剪碎，混勻，取約6g，精密稱定，置燒杯中，加水5ml，置水浴溫熱并攪拌使溶散，加硅藻土5g，拌勻，置100烘箱中，烘干，轉移至錐形瓶中，并用水5ml洗滌燒杯及玻棒，洗液并入錐形瓶中，置100烘箱中，烘干，精密加入鹽酸-乙醇（1：25）混合溶液50ml，

8、稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）10 min，置水浴上加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用鹽酸-乙醇（1：25）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液2。 2.2.3 陰性對照溶液的制備 取除大黃以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成大蜜丸，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。 2.3 專屬性試驗 分別精密吸取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置

9、上，有相同保留時間（1.大黃素：15.692min；2. 大黃酚：20.110 min）的色譜峰，陰性試驗無干擾。 2.4 線性關系考察 精密吸取對照品貯備液（大黃素：0.1004mg·ml-1 ，大黃酚0.1002 mg·ml-1）各適量，分別置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成濃度分別為大黃素：10.04、20.08、30.12、40.16、50.20g·ml-1，大黃酚：20.04、30.06、40.08、50.10、60.12g·ml-1的溶液，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液各10l，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，其濃度（C）為

10、橫坐標，經(jīng)線性回歸，大黃素回歸方程為：A=5.79X107C-2.72X104，r =0.9998；大黃酚回歸方程為：A=43.3X107C-3.74X104，r =1.0000。結果表明，大黃素在10.0450.20g·ml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關系；大黃酚在20.0460.12g·ml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關系。 2.5 精密度 取對照品溶液，重復進樣5次，進樣量10l，在上述色譜條件下求得大黃素峰面積的RSD為0.9%，大黃酚峰面積的RSD為1.1%(n=5)。 2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，在0、6、1、24、48 h分別進行測定，峰

11、面積結果，大黃素峰面積的RSD為0.6%，大黃酚峰面積的RSD為0.8%(n=5)。 2.7 重復性試驗 取供試品（批號6015504）共5份，分別按“2.2.2”方法制備供試品溶液，進行測定，求得大黃素含量的RSD為1.6%，大黃酚含量的RSD為1.3%(n=5)，表明重復性較好。 2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品（批號6015504，大黃素含量0.066mg·g-1，大黃酚含量0.098 mg·g-1，平均丸重2.940g·丸-1）適量，共6份，分別置燒杯中，分別精密加入大黃素對照品貯備液（0.1004mg·ml-1）、大黃酚對照品貯備

12、液（0.1002 mg·ml-1）3.5及4.5 ml各適量，按 “2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，依法測定，結果見表13。表1 大黃素、大黃酚加樣回收率試驗 2.9 樣品含量測定 分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10l，注入液相色譜儀，測定三批樣品中大黃素、大黃酚峰面積，按外標法計算其含量（n=5），結果見表2。 表2 3批樣品含量測定結果（ 3 討論 3.1 試驗中曾試用過流動相：甲醇-0.05%高氯酸溶液（73：27）4，后又反復試用過不同比例的甲醇和不同濃度的磷酸溶液作為流動相進行分離，結果甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V）能使樣品峰與相鄰雜質(zhì)峰達到基線分離。 3.2 通過對3批樣品中大黃素、大黃酚的測定，結果表明大黃素最高含量為0.41mg·丸-1，最低為0.33mg·丸-1；大黃酚最高含量為0.64 mg·丸-1，最低為0.52mg·丸-1。綜合考慮確定限量，每丸含大黃素不得低于0.25mg，含大黃酚不得低于0.30mg。 3.3 本方法結果準確，方法簡便，重復性及回收率均理想，可以作為該制