PTEN基因蛋白與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系

1、PTEN基因蛋白與型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系 作者：徐琳 江敏普蘋 付紅梅 楊映芳【關(guān)鍵詞】 免疫組織化學(xué)SP法【摘要】 目的 研究PTEN基因蛋白在型子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，探討其與型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系。 方法 應(yīng)用現(xiàn)代免疫組化SP染色法檢測PTEN基因蛋白在35例型子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)，采用Kaplan-Meier生存率曲線描述型子宮內(nèi)膜癌中PTEN表達(dá)組和未表達(dá)組的術(shù)后生存率，并采用Log-Rank檢驗分析組間差異。 結(jié)果 35例型子宮內(nèi)膜癌PTEN蛋白表達(dá)缺失率為65.71%。14例患者隨訪資料完整，其中PTEN未表達(dá)組患者的中位生存期576.00天，PTEN表達(dá)組患者的中位生存期918.

2、00天。PTEN表達(dá)組的生存率明顯高于PTEN未表達(dá)組。 結(jié)論 PTEN可能是型子宮內(nèi)膜癌中突變率較高的基因，PTEN蛋白表達(dá)是I型子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后良好的標(biāo)志。 關(guān)鍵詞 型子宮內(nèi)膜癌 PTEN 預(yù)后 免疫組織化學(xué)SP法 Prognostic correlation of tumor-suppressor gene PTEN in type I endometrial carcinoma. 【Abstract】 Objective To determine the potential role of PTEN expression in the prognosis of type I endo

3、me-trial carcinoma.Methods Expression of PTEN was detected by immunohistochemical staining SP method.Results We detected loss of PTEN protein expression in23cases of35type I endometrial carcinoma.The median survival time of PTEN-positive cases was918days，while that of PTEN-negative cases was576days.

4、The survival rate of PTEN-positive cases was significantly higher than that of PTEN-negative cases.Conclusion The loss of PTEN expres-sion is relatively frequent in type I endometrial carcinoma.PTEN-positive staining is a significant prognostic indicator of favorable survival for patients with typee

5、ndometrial carcinoma. Key words type I endometrial carcinoma PTEN prognosis immunohistochemistry SP method 子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道最常見的三大惡性腫瘤之一，其確切病因尚不清楚。根據(jù)子宮內(nèi)膜癌的病理及臨床特征，可分為兩型:雌激素相關(guān)型與非雌激素相關(guān)型。前者分化較好，預(yù)后良，發(fā)病年齡相對年輕（大部分在絕經(jīng)前）;后者分化差，子宮內(nèi)膜多萎縮，發(fā)病年齡相對較大（大部分在絕經(jīng)后） 15 。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們認(rèn)識到癌是一種基因病，有3種特殊的基因（即癌基因、抑癌基因、DNA損傷修復(fù)基因）參與

6、癌的發(fā)生、發(fā)展。其中抑癌基因PTEN與I型子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系是目前研究的熱點。PTEN基因與I型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系，目前國內(nèi)尚未見這方面的報道。我們用SP免疫組化法對型子宮內(nèi)膜癌組織中PTEN蛋白表達(dá)情況進(jìn)行研究，旨在探討PTEN蛋白表達(dá)與型子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的關(guān)系。 1 材料與方法 1.1 病例和標(biāo)本 選取1998年1月2003年8月我院病理科存檔處手術(shù)切除的型子宮內(nèi)膜癌患者35例的石蠟標(biāo)本，35例患者年齡2673歲，平均（52.89±12.20）歲，術(shù)前均未接受放療、化療及性激素類藥物治療。其中14例患者隨訪資料完整，死亡9例，存活5例。同時選取同期因其它原因行子宮切除的10例正

7、常子宮內(nèi)膜組織作對照，年齡3262歲，平均（44.30±10.54）歲。 1.2 試劑和方法 鼠抗人PTEN單克隆抗體、SP試劑盒及DAB KIT染色劑均購自福州邁新公司。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，高壓抗原修復(fù)，血清封閉，滴加1200PTEN鼠抗人單克隆抗體4過夜，生物素標(biāo)記的第二抗體室溫下孵育10min，再以鏈霉菌抗生物素過氧化物酶溶液室溫下孵育10min，最后用DAB顯色，蘇木素復(fù)染，酒精梯度脫水，二甲苯封片，每一步驟間均用PBS（pH7.4）緩沖液沖洗3次，每次3min。每批均設(shè)陰性對照和陽性對照，陽性對照為正常的子宮內(nèi)膜組織切片，陰性對照為未加一抗的PBS緩沖液，實驗條件嚴(yán)格一致

8、。 1.3 結(jié)果判斷和分析 高倍鏡（×400）下綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行半定量測定。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn):不著色0分，黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。陽性細(xì)胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞數(shù)<10%者0分，10%40%者1分，40%70%者2分，70%者3分。兩種評分相加，01分為陰性，2分為弱陽性，34分為陽性，56分為強(qiáng)陽性。統(tǒng)計學(xué)處理采用Kaplan-Meier描繪生存率曲線，Log-Rank檢驗組間差異。 2 結(jié)果 2.1 PTEN蛋白在各類組織中的分布 PTEN蛋白定位于正常子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞漿，陽性細(xì)胞呈彌漫性或局灶性分布;惡性變的細(xì)胞表現(xiàn)為PTEN蛋

9、白表達(dá)減弱或缺失。35例型子宮內(nèi)膜癌中，23例陰性表達(dá)，11例弱陽性表達(dá)，1例陽性表達(dá)，表達(dá)缺失率為65.71%。2.2 PTEN蛋白表達(dá)與型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系 型子宮內(nèi)膜癌組織中，PTEN未表達(dá)組患者的平均生存天數(shù)（619.56±73.87）天，中位生存期576.00天;PTEN表達(dá)組患者的平均生存天數(shù)（1070.50±87.52）天，中位生存期918.00天。PTEN未表達(dá)組的生存率曲線較PTEN表達(dá)組差，經(jīng) Log-rank檢驗，示兩組間生存率差異有顯著性（ 2 =5.54， P=0.0185）。詳見表1，圖1。 表1 14例型子宮內(nèi)膜癌術(shù)后生存天數(shù)略圖1 型子宮內(nèi)

10、膜癌PTEN表達(dá)組與PTEN未表達(dá)組的生存率曲線圖略 3 討論 PTEN基因是1997年Li等 6，7 在人染色體10q 23.3 分離得到一個新的具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因突變或缺失導(dǎo)致磷酸酶活性喪失，使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。PTEN蛋白水平與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系，是近幾年許多學(xué)者關(guān)注的問題。Kanamori等 8，9 對98例I型子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白表達(dá)陽性組的生存率明顯高于PTEN蛋白表達(dá)陰性組分別為62.4%和11.8%，提示PTEN蛋白表達(dá)水平有預(yù)測預(yù)后的價值。I型子宮內(nèi)膜癌PTEN蛋白表達(dá)提示預(yù)后良好，可能與PTEN基因的下列作用機(jī)制有關(guān):（

11、1）PTEN通過對細(xì)胞內(nèi)第二信號分子磷脂酰肌醇（3，4，5）-三磷酸（PIP 3 ）去磷酸化 10 ，抑制依賴PIP 3 的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白磷酸激酶B（PI 3 K/PKB）信號傳導(dǎo)通路的活性，影響其下游通路的作用靶（包括G 1 期細(xì)胞依賴激酶抑制因子P 27kipl 、翻譯抑制因子4EBPl等）的磷酸化水平，從而誘導(dǎo)凋亡，并介導(dǎo)G 1 期停滯，影響基因的表達(dá)，對細(xì)胞生長具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用 1113 。（2）PTEN氨基酸序列與張力蛋白和輔助蛋白高度同源，PTEN基因可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞聚集粘附功能，影響腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移 14，15 。本研究也同樣發(fā)現(xiàn)，35例I型子宮內(nèi)膜癌中，PTEN

12、表達(dá)組的中位生存期為918.00天，PTEN未表達(dá)組的中位生存期為576.00天。同時Kaplan-Meier生存率曲線也非常直觀的反映PTEN表達(dá)組的生存率明顯高于PTEN未表達(dá)組（P=0.0185）。提示PTEN蛋白表達(dá)水平可以作為判斷I型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的分子標(biāo)志物，為臨床治療提供指導(dǎo)。 參考文獻(xiàn) 1 Boyd J.Molecular Biology in the Clinicopathologic Assessment Of En-dometrial Carcinoma Subtypes.Gynecol Oncol，1996，61（2）:163-165.2 Matias-Guiu X，C

13、atasus L，Bussaglia E，et al.Molecular Pathology Of Endometrial Hyperplasia and Carcinoma.Hum Pathol，2001，32（6）:569-577. 3 Sherman ME.Theories Of Endometrial Carcinogenesis:a Multidisci-plinary Approach.Mod-Pathol，2000，13（3）:295-308. 4 蘇勤.婦科腫瘤分子病理研究進(jìn)展的啟示.中華病理學(xué)雜志，2003，32（4）:305-307. 5 樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)，第6版.北京:人民

14、衛(wèi)生出版社，2004，298-303.6 Li J，YenC，Liaw D，et al.PTEN，aPutative Protein Tyrosine Phosphatase Gene Mutation in Human Brain，Breast，and Prostate Cancer.Science，1997，275（28）:1943-1946. 7 Li DM，Sun H.TEPl，Encoded by a Candidate Tumor Suppressor Locus，is a Novel Protein Tyrosine Phosphatase Regulated by Transf

15、orming Growth Factor1.Cancer Res，1997，57:2124-2129.8 Kanamori Y，Kigawai J，Itamochi H，et al.PTEN Expression is Associ-ated with Prognosis for Patients with Advanced Endometrial Carcinoma Undergoing Postoperative Chemotherapy.Iht J Cancer，2002，100（6）:686-689. 9 Terakawa N，Kanamori Y，Yoshida S.Loss of

16、PTEN Expression FoIIowed by Akt Phosphorylation is a Poor Prognostic Factor for Patients with En-dometrial Cancer.Endocr Relat Cancer，2003，10（2）:203-208. 10 Weng LP，Smith WM，Dahia PLM，et a1.PTEN Suppresses Breast Can-cer Cell Growth by Phosphatase Activity-Dependent G1Arrest Fol-lowed by Cell Death.

17、Cancer Research，1999，59:5808-5814. 11 Matsushima-Nishiu M，Unoki M，Ono K，et al.Growth and Gene Ex-pression Pro Of Endometrial Cancer Cells Expressing Ex-ogenous PTEN.Cancer-Res，2001，61（9）:3741-3749. 12 AnHJ，Lee YH，Cho NH，et a1.Alteration of PTEN Expression in En-dometrial Carcinoma is Associated with

18、 Down-Regulation of Cyclin-Dependent Kinase lnhibitor，P27.Histopathology，2002，41（5）:437-445. 13 Hu X，Kwon CH，Schlosshauer PW，et a1.PTEN Induces G（1）Cell Cycle Arrest and Decreases Cyclin D3Levels in Endometrial Carcinoma CelIs.Cancer-Res，2001，6l（11）:4569-4575. 14 Tamura M，Gu JG，Matsumoto K，et a1.Inhibition Of Cell Migration，Sprea