24食品添加劑番茄紅素合成產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

1、食品添加劑 番茄紅素（合成）1 生產(chǎn)工藝由用于食品的其他類胡蘿卜素生產(chǎn)中常用的合成中間體，經(jīng)過維蒂希聚合反應(yīng)制備而成的合成番茄紅素。商業(yè)上用于食品的配方型番茄紅素制劑，是將其配制成懸浮于食用油中的乳液或水溶型的粉末。2 性狀番茄紅素晶體為紅色，幾乎不溶于水，溶于氯仿等有機(jī)溶劑，對(duì)熱、光、空氣和濕度均敏感，容易氧化。項(xiàng) 目指 標(biāo)檢驗(yàn)方法番茄紅素含量，%總番茄紅素96附錄a中a.1全反式 番茄紅素70干燥失重，% 0.5gb 5009.3減壓干燥法鉛（pb），mg/kg1gb 5009.12阿樸-12-番茄紅素醛，%0.15附錄a中a.2三苯基氧膦(tppo)，%0.01附錄a中a.3 3 技術(shù)要

2、求附錄a檢驗(yàn)方法 a.1 總番茄紅素含量和全反式番茄紅素的含量的測(cè)定a.1.1 方法原理用高效液相色譜法在下列條件下測(cè)定總番茄紅素含量和全反式番茄紅素的含量a.1.2 試劑和材料(注意：所有溶劑均應(yīng)為色譜級(jí))a.1.2.1 正己烷。a.1.2.2 用0.025%特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的四氫呋喃。a.1.2.3 n-乙基二異丙胺。a.1.2.4 番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品純度95。a.1.3 儀器和設(shè)備a.1.3.1紫外/可見分光光度計(jì)，配備1cm吸收池。a.1.3.2 高效液相色譜系統(tǒng)，配備合適的泵、進(jìn)樣器、色譜柱恒溫箱和積分儀。a.1.3.3 色譜柱：2根相連的不銹鋼柱（250x4.0 mm）。a

3、.1.3.4 固定相：nucleosil 300-5，5mma.1.3.5 hplc條件流速： 0.8 ml/min進(jìn)樣量： 20 µl柱溫： 20檢測(cè)波長(zhǎng)： 470 nm流動(dòng)相： 0.15% n-乙基二異丙胺的正己烷溶液（v/v）a.1.3.6 hplc測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品5.5-6.5mg，置100ml量瓶中，加入特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的四氫呋喃5ml使溶解，用正己烷稀釋至刻度。作為hplc測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)品溶液。a.1.3.7 分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取上述hplc測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0ml，置100ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度。作為分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶

4、液。a.1.3.8 樣品溶液精密稱取本品4.5-5.5mg，置100ml量瓶中，加入特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的四氫呋喃5ml使溶解，用正己烷稀釋至刻度。a.1.4 分析步驟與結(jié)果計(jì)算a.1.4.1 分光光度法測(cè)定番茄紅素：a.1.4.1.1 分析步驟用1cm吸收池，以正己烷為空白，在最大吸收波長(zhǎng)處（大約470nm）測(cè)定上述分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收值。a.1.4.1.2 結(jié)果計(jì)算： (a.1)式中：cst分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液中番茄紅素的濃度（mg/l）；a最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度；3450全反式番茄紅素在正己烷中的吸收系數(shù)a；10000稀釋系數(shù)。a.1.4.2 hplc分析測(cè)定：a.1.

5、4.2.1 分析步驟重復(fù)進(jìn)樣20mlhplc測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄測(cè)定出的番茄紅素異構(gòu)體的總峰面積（除去溶劑峰），從重復(fù)進(jìn)樣中計(jì)算峰面積平均值，并按下式計(jì)算番茄紅素響應(yīng)因子(rf):(a.2)式中： rf番茄紅素的響應(yīng)因子（au x l/mg）； ast番茄紅素總峰面積的平均值（au）； cst分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液中番茄紅素的濃度（mg/l）； 20由分光光度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液制備hplc測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋系數(shù)；取樣品溶液進(jìn)樣，并記錄所有番茄紅素異構(gòu)體的峰面積。a.1.4.2.2 結(jié)果計(jì)算保留時(shí)間：番茄紅素異構(gòu)體相對(duì)保留時(shí)間*絕對(duì)保留時(shí)間（約）13-順式-番茄紅素9-順式-番茄紅素全-反式-番茄

6、紅素5-順式-番茄紅素0.60.81.01.114min19min22min24min*相對(duì)于全-反式-番茄紅素按下式計(jì)算總番茄紅素的含量：總番茄紅素(%)= (atrans+a5cis+a9cis+a13cis+axcis) ×0.1 × 100 (a.3)rf × ws式中： atrans全-反式-番茄紅素峰面積(au)； a5cis,a9cis,和a13cis5順式，9順式和13順式番茄紅素的峰面積(au)； axcis如檢測(cè)到其它順式異構(gòu)體的峰面積(au)； 0.1樣品溶解的體積(l)； rf番茄紅素的響應(yīng)因子(auxl/mg)； ws樣品取樣量(mg)。

7、按下式計(jì)算全-反式-番茄紅素的含量：全-反式-番茄紅素（） atrans × 0.1 ×100 rf×wsa.2 阿樸-12-番茄紅素醛的測(cè)定a.2.1 方法原理高效液相色譜法a.2.2 試劑(注意：所有溶劑均應(yīng)為色譜級(jí))a.2.2.1 正己烷。a.2.2.2 三乙胺（tea）。a.2.2.3 四氫呋喃（thf）。a.2.2.4 用特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的甲苯（0.5g特丁基對(duì)苯二酚（bht）溶于1000ml甲苯中）。a.2.2.5 阿樸-12-番茄紅素醛（也叫番茄紅素c25-醛）標(biāo)準(zhǔn)品。a.2.3 儀器和設(shè)備a.2.3.1 高效液相色譜系統(tǒng)，配備合適的泵、

8、進(jìn)樣器和積分儀a.2.3.2 色譜柱：不銹鋼柱（200x4.0mm）a.2.3.3 固定相：硅膠 nucleosil si 100 3mma.2.3.4 檢測(cè)器：紫外/可見分光光度計(jì)，或可見分光光度計(jì)a.2.3.5 hplc條件：流速： 2.0 ml/min進(jìn)樣量： 5.0 ml檢測(cè)波長(zhǎng)：435nm流動(dòng)相： a正己烷 b正己烷：三乙胺（99.9:0.1）(v/v) c正己烷：四氫呋喃（80:20）(v/v)梯度：時(shí)間，分鐘a%b%c%080200166020202240204024.580200a.2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)品溶液精密稱取阿樸-12-番茄紅素醛對(duì)照品14.5-15.5mg，置50ml量瓶

9、中，用特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的甲苯溶解并稀釋至刻度。精密量取2ml，置100ml量瓶中，用特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的甲苯稀釋至刻度。a.2.3.7 樣品溶液 精密稱取本品29.0-31.0mg，置10ml量瓶中，用特丁基對(duì)苯二酚（bht）穩(wěn)定的甲苯溶解并稀釋至刻度，將該溶液超聲處理10min。a.2.4 結(jié)果阿樸-12-番茄紅素醛的保留時(shí)間約為14min，其相對(duì)于全反式番茄紅素的相對(duì)保留時(shí)間為1.6。a.2.5 計(jì)算：阿樸-12-番茄紅素醛（） as×wst×10 ×100(a.4) ast×ws×2500式中：as樣品峰面積；ast

10、標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；wst標(biāo)準(zhǔn)品取樣量(mg)；ws樣品取樣量(mg)；10樣品溶解的體積(ml)；2500對(duì)照品溶解體積(50ml)乘以稀釋倍數(shù)(50)。a.3 三苯基氧膦（tppo）的測(cè)定a.3.1 方法原理在下列條件下用hplc方法檢測(cè)。a.3.2 試劑a.3.2.1正己烷。a.3.2.2異丙醇。a.3.2.3 四氫呋喃（thf）。a.3.2.4三苯基氧膦 （tppo）(純度99%)注意：所有試劑均應(yīng)是色譜級(jí)。a.3.3 儀器和設(shè)備a.3.3.1 高效液相色譜系統(tǒng)，配備合適的泵、進(jìn)樣器和積分儀。a.3.3.2色譜柱：不銹鋼柱（150×4.6mm）。a.3.3.3固定相：硅膠基柱 supelcosil lc-si, 5m 或類似的柱。a.3.3.4檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器。a.3.3.5 hplc條件：柱溫： 20。流動(dòng)相：異丙醇:正己烷（1:24 v/v）。流速：1.5ml/min。進(jìn)樣量：50l。檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。tppo的保留時(shí)間大約為8.1min。a.3.4 分析步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取10mg的tppo標(biāo)準(zhǔn)品，用thf（四氫呋喃）溶解，定量移入1000ml容量瓶中，用四氫