依達(dá)拉奉與抑肽酶對兔急性肺損傷的保護(hù)作用比較

1、依達(dá)拉奉與抑肽酶對兔急性肺損傷的保護(hù)作用比較 作者：曹士奇， 陳明智， 劉尊濤【摘要】 目的： 研究并比較依達(dá)拉奉和抑肽酶對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的兔急性肺損傷（acute lung injury, ALI）的保護(hù)作用。方法： 檢測并比較依達(dá)拉奉和抑肽酶對肺損傷模型血液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），IL6以及腫瘤壞死因子（TNF）含量的影響和電鏡下肺組織的病理學(xué)改變。結(jié)果： 依達(dá)拉奉和抑肽酶均能夠顯著減少肺損傷模型血液中的MDA，IL6和TNF的含量，提高SOD含量。與依達(dá)拉奉組比較，抑肽酶組的IL6和TNF下降水平更明顯。結(jié)論： 依達(dá)拉奉和

2、抑肽酶均能減輕LPS導(dǎo)致的兔急性肺損傷，依達(dá)拉奉抗自由基作用顯著，而抑肽酶通過抑制炎性反應(yīng)，對急性肺損傷的保護(hù)作用更顯著。 【關(guān)鍵詞】 依達(dá)拉奉； 抑肽酶； 肺損傷 Abstract Objective: To compare the effects and machanism of edaravone and aprotinin on acute lung injury(ALI) of rabbits induced by lipopolysaccharide(LPS). Methods： The level of MDA，SOD，IL6 and TNF in the blood of mo

3、dels were measured and the pathology of lung tissue were examined. Results： Both edaravone and aprotinin could decrease the level of MDA，IL6，TNF, increase the level of SOD, and the level of IL6，TNF in group aprotinin were more lower than that in group edaravone group. Conclusion： Both edaravone and

4、aprotinin could reduce the ALI induced by LPS, edaravones antioxygen free radical effect was remarkable,but aprotinin could significantly depress the inflammatory reaction， its protective effects was better. Key words edaravone; aprotinin; lung injury 急性肺損傷（acute lung injury, ALI）是指由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素所

5、導(dǎo)致的以急性、進(jìn)行性缺氧為特征的呼吸衰竭，最常見的原因是創(chuàng)傷、感染和休克等，嚴(yán)重者可發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）。臨床上以機(jī)械通氣，呼氣末正壓（PEEP）為主要治療手段，但是病死率仍然在40%左右1，近年來，氧自由基清除劑依達(dá)拉奉和蛋白酶抑制劑抑肽酶已經(jīng)用于急性肺損傷的臨床治療，但是對二者保護(hù)作用的對比研究尚未見報道。本實驗以脂多糖（lipopolysaccharde,LPS）制作兔急性肺損傷模型，研究比較依達(dá)拉奉和抑肽酶在急性肺損傷中的作用和機(jī)制。 1 材料和方法 1.1 動物分組與模型建立 選用健康成年新西蘭

6、大白兔24只（由蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供）,雌雄不限，體質(zhì)量(2.5±0.3)kg。隨機(jī)分成3組：對照組,依達(dá)拉奉組和抑肽酶組。3 組動物用脂多糖（LPS 055:B5,美國Sigma公司提供）以5 mg/ kg 劑量溶解于10 ml 生理鹽水中,于3 min內(nèi)由耳緣靜脈注入;在LPS注入后30 min，對照組由耳緣靜脈注入生理鹽水；依達(dá)拉奉組的依達(dá)拉奉（南京先聲制藥有限公司生產(chǎn)）劑量為10 mg/kg；抑肽酶組的抑肽酶（麗珠集團(tuán)麗寶生物化學(xué)制藥廠）劑量為10萬KIU/ kg，各組溶劑容積總量均用生理鹽水調(diào)整到20 ml。各組于LPS注入4 h后抽取股動脈血后立即開胸取肺，獲取

7、血液和肺組織標(biāo)本待檢。 1.2 檢測指標(biāo)和檢測方法 首先取2 ml動脈血用于便攜式血氣分析儀（ABL500，丹麥雷度公司）做血氣分析，測定氧合指數(shù)（PaO2/FiO2），其余血分離血清。丙二醛（MDA）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒由南京凱基生物科技發(fā)展公司提供；TNF,IL6由北京晶美生物工程有限公司生產(chǎn)。血清中TNF，IL6含量用放射免疫法檢測,按試劑盒說明書進(jìn)行操作。電鏡觀察肺組織的病理學(xué)變化。 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SPSS13.0數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)對定量數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗。比較3組間SOD活力、MDA含量以及TNF

8、，IL6含量，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2 結(jié) 果 2.1 急性肺損傷模型評價 注入LPS后，觀察到實驗兔呼吸加快，其血氣分析示動脈血氧合指數(shù)均在200以上，開胸取肺時可見各組肺組織表面有不同程度的斑片狀充血及水腫等，達(dá)到急性肺損傷的診斷標(biāo)準(zhǔn)2。 2.2 MDA和SOD檢測結(jié)果 和對照組相比，依達(dá)拉奉組和抑肽酶組的MDA明顯降低；SOD含量則明顯增加，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而且依達(dá)拉奉組的SOD含量顯著增加（P<0.01），但是依達(dá)拉奉組和抑肽酶組兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。表1 各組MDA和SOD活性比較 2.3 IL6和TNF檢測

9、結(jié)果 急性肺損傷模型血中的TNF和IL6水平均較高，依達(dá)拉奉能明顯降低兩者的水平，而抑肽酶降低TNF和IL6的作用更為顯著（P<0.01），和依達(dá)拉奉組相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。表2 各組TNF和IL6水平比較 2.4 肺組織觀察 肉眼觀察發(fā)現(xiàn)LPS組肺組織表面有散在紅色斑片、斑點和水腫等。依達(dá)拉奉組和抑肽酶組的肺組織紅色斑片較少，也有散在的紅色斑點樣改變，但范圍較LPS組明顯縮小。透射電鏡觀察：可以看到對照組中肺泡型細(xì)胞微絨毛消失，細(xì)胞質(zhì)中有空泡形成，細(xì)胞核染色質(zhì)邊集、固縮等損傷性改變（圖1a），細(xì)胞間質(zhì)中有白細(xì)胞浸潤（圖1b）；依達(dá)拉奉組

10、可見細(xì)胞微絨毛減少，板層小體排空，細(xì)胞核染色質(zhì)部分邊集，也可見少量白細(xì)胞浸潤（圖1c）；抑肽酶組細(xì)胞微絨毛稍有減少，部分板層小體排空，細(xì)胞核損傷不明顯（圖1d）。 3 討 論 急性肺損傷的發(fā)生機(jī)制目前還不是非常清楚，一般認(rèn)為致病因子誘導(dǎo)的細(xì)胞或體液免疫導(dǎo)致了肺組織內(nèi)過度的或失控性的炎癥反應(yīng)是其發(fā)病的根本原因3,4。 依達(dá)拉奉是一種強(qiáng)效的新型氧自由基清除劑, 主要通過清除羥自由基,抑制脂質(zhì)自由基的生成及細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化而減輕自由基的損傷,還可以通過刺激前列環(huán)素的生成,減少炎癥介質(zhì)白細(xì)胞三烯的生成、保護(hù)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)能等發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用5。抑肽酶是一種活性單鏈多肽，通過抑制炎癥反應(yīng)中多種酶的活性從而

11、減少炎性介質(zhì)的釋放，減少中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附、聚集和釋放反應(yīng)；此外，抑肽酶還有很強(qiáng)的血小板保護(hù)作用，抗纖溶作用顯著6,7。本實驗結(jié)果表明，依達(dá)拉奉和抑肽酶均能夠降低LPS誘導(dǎo)的兔急性肺損傷模型靜脈血中的MDA，TNF和IL6，增加SOD含量，具有減輕急性肺損傷的作用。透射電鏡觀察也同樣證實，兩實驗組的肺組織超微結(jié)構(gòu)損傷較輕，而對照組的細(xì)胞損傷嚴(yán)重。但是兩種藥物對這些指標(biāo)的影響是有明顯差異的。表1中依達(dá)拉奉組SOD活力達(dá)到（82.86±10.50）Nu/ml，抑肽酶組為（71.93±9.07）Nu/ml，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。其原因可能是在肺損傷的早期，首先有SOD活

12、性的反應(yīng)增加，依達(dá)拉奉可以和SOD競爭性消除自由基，使SOD相對過剩。所以，在提升SOD活力方面，依達(dá)拉奉明顯強(qiáng)于抑肽酶。而且，抑肽酶本身就是體內(nèi)多種酶的抑制劑，對SOD也可能有直接的抑制作用。但是抑肽酶減少TNF和IL6水平卻明顯優(yōu)于依達(dá)拉奉，表2中兩項指標(biāo)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)組間均顯示出明顯差異。電鏡圖片也表明，抑肽酶組的肺組織損傷和依達(dá)拉奉組相比相對較輕。這可能是由于抑肽酶抑制了參與急性肺損傷的多種酶的活性（包括TNF和IL6），其作用環(huán)節(jié)較多，抑制炎性反應(yīng)效果更強(qiáng)，所以在急性肺損傷中能更有效地保護(hù)肺組織。 本實驗結(jié)果表明，依達(dá)拉奉和抑肽酶對急性肺損傷均有保護(hù)作用，依達(dá)拉奉能顯著增加SOD活性，減

13、輕自由基的損傷作用；而抑肽酶能抑制參與急性肺損傷的多種酶活性，抑制炎性反應(yīng)，對肺組織的保護(hù)效果更強(qiáng)。【參考文獻(xiàn)】 1 Matthay MA, Zimmerman GA，Esmon C，et al. Future research directions in acute lung injury: summary of a National Heart, Lung, and Blood Institute working groupJ. Am J Respir Crit Care Med,2003,167(7):1027-1035.2 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會. 急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征的診斷

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