f建立孕中期產(chǎn)前篩查孕婦血清ADAM12-S中位數(shù)倍數(shù)參考區(qū)間的初步研究

1、 ·論著·建立孕中期產(chǎn)前篩查孕婦血清ADAM12-S中位數(shù)倍數(shù)參考區(qū)間的初步研究魏魏 梁飛 李曉澤 魏岳峰 胡志鵬 段國和 南洋 【摘要】 目的 建立孕中期唐氏篩查孕婦血清解整合素金屬蛋白酶12分泌型（a disintegrin and metalloprotease, ADAM12-S)中位數(shù)倍數(shù)的參考區(qū)間。方法 隨機(jī)選擇2008-2010年在本院自愿參加孕中期唐氏綜合征( DS)產(chǎn)前篩查并經(jīng)隨訪證實(shí)分娩健康兒的孕婦孕16-20 周血清樣本285份, 用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測血清ADAM12-S濃度。用SPSS 15. 0 軟件構(gòu)建ADAM12-S與孕周間的回歸關(guān)系,

2、 選最優(yōu)模型計(jì)算中位濃度, 得到ADAM12-S中位數(shù)倍數(shù)( multiple of the m edian, MoM )值。探討經(jīng)校正后的ADAM12-S MoM值與孕婦的孕周、體重及年齡的相關(guān)性，選取最優(yōu)模型求出經(jīng)孕周及年齡校正后的MoM 值。將ADAM12-S初始濃度與消除孕周及年齡影響后的最終MoM 值進(jìn)行曲線擬合, 選取最優(yōu)模型最終得到ADAM12-S 初始濃度與校正后MoM 值的關(guān)系方程，最終得出正常人群的MoM值參考范圍。同時(shí)選擇發(fā)生宮內(nèi)呼吸窘迫、先兆子癇、早產(chǎn)的孕婦，測定其孕中期ADAM12-S濃度并轉(zhuǎn)化成MoM值。利用正常人群的ADAM12-S MoM值參考范圍預(yù)測發(fā)生宮內(nèi)呼

3、吸窘迫、先兆子癇、早產(chǎn)的靈敏度和特異性。結(jié)果 ADAM12-S中位數(shù)(Y)與孕周(t)呈正相關(guān), 經(jīng)曲線模型擬合后的方程為：Y=e(5.9668+0.0626*t)。ADAM12-S MoM 值中位數(shù)( Y)與孕婦年齡位數(shù)（z）呈負(fù)相關(guān)，經(jīng)線性模型擬合后的方程為: Y=0.0317*z +1.8613； ADAM12-S MoM值中位數(shù)(Y)與體重中位數(shù)( w )存在負(fù)相關(guān)，但在回歸分析中所有模型的回歸系數(shù)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ADAM12-S初始濃度(x)與孕周、年齡校正后的最終MoM 值(Y)的關(guān)系方程：Y=0.000723*x+0.1351。應(yīng)用ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周和年齡校正后最

4、終MoM值的關(guān)系方程求得正常人群ADAM12-S初始濃度轉(zhuǎn)化為最終MoM值，根據(jù)最終MoM值求的正常人群的MoM值的參考值范圍為（0.53，1.55）。根據(jù)正常孕婦ADAM12-S參考范圍，預(yù)測宮內(nèi)呼吸窘迫孕婦有較高的靈敏度和特異性，分別為84.3%和80.9%，預(yù)測先兆先兆子癇和早產(chǎn)的特異性高，均為80.4%，但靈敏度低分別為13.1%和10%。結(jié)論 根據(jù)ADAM12-S初始濃度（x）與最終MoM 值的關(guān)系方程的建立, 初步探索正常人群ADAM12-S MoM值參考范圍，對臨床開展利用ADAM12-S篩查不良妊娠的研究有重要意義?！局黝}詞】解整合素金屬蛋白酶12分泌型；不良妊娠Prelimi

5、nary study of establishing the reference interval value of the median of ADAM 12-S in second trimester WEI Wei, LIANG Fei, LI Xiao-ze，WEI Yue-feng,HU Zhi-peng,DUAN Guo-he，NAN Yang. Maternal and Child Health Hospital, Changzhi，Shanxi 046011, China Corresponding author: Weiwei, Email: weiwei2006_1【Abs

6、tract】Objective To establish the reference value of the multiple of the median(MoM ) values of a disintegrin and metalloprotease 12 secreting type (ADAM12-S) in the second trimester serum screening for Downs syndrome. Methods The participantsin this study were 285 nomal pregnant women at 16 to 20 we

7、eks gestation from 2008 to 2010.The concentration of ADAM12-S was determined by time resolved fluorescence immunoassay (TRFIA ). The regressiverelationship between concentration of ADAM12-S and gestational age was analyzed with SPSS 15. 0 software and then the optimal regression model was used to ca

8、culate the MoM value of ADAM12-S. We analyze the correlation gestation age between the MoM value and the age as well as body weight of parturients,finally the MoM value was adjusted on the basis of the gestational age and age parturients. The curve fitting of ADAM12-S concentration and the adjusted

9、MoM value were conducted and the model was optimized for the equation by eliminating the influence of gestational age and age of parturients,the we get the ADAM12-S' reference range of normal pregantwomen.We analyze the ADAM12-S concentration of pregnantwomen of second trimester with preeclampsi

10、a 、premature delivery and intrauterine respiratory distress,which were converted into MoM value.Accoding to ADAM12-S' reference range,we caculate the sensitivity and specificity of predicting adverse pregnancy referred to above. Result A positive correlation between the MoM value of ADAM12-S (Y)

11、 and gestational age (t) was shown, and the equation was Y=e(5.9668+0.0626*t), while a negative correlation between MoM value of ADAM12-S (Y) and the median of parturients age(z) was found, and the equation was Y=-0.0317*z+1.8613.A negative correlation between the MOM value of ADAM12-S (Y) and body

12、weight(w) was found, but no statistical significance was shown in regressive analysis. The equation of concentration of ADAM12-S(Y) and the finally adjusted MoM value(x) was Y=0.00007228*+0.1351，and the initial MoM value was converted into final MoM value according to which we estabished the referen

13、ce intervals of the MoM value: (0.53,1.55). According to the ADAM12-S reference range,The sensitivity and specificity of predicting trauterine respiratory distress is 84.3% and 80.9%.,The sensitivity and specificity of predicting preeclampsia is 13.1% and 80.4%,The sensitivity and specificity of pre

14、dicting premature delivery is 10% and 80.4%. Conclusion According to the equation between the initial concentration of ADAM12-S concentration and the adjusted MoM value established, we anlayse the reference range of the MoM value which should be considerably important for screening adverse pregnancy

15、 in second trimester inprimary clinical hospital for newborn.【Key words】ADAM12-S; adverse pregnancyADAM12是ADAM家族成員之一，有兩種形式：一種是膜結(jié)合形式，稱為ADAM12-L；另一種為分泌形式，稱為ADAM12-S。ADAM-12S參與調(diào)解蛋白水解、細(xì)胞粘連、細(xì)胞融合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等一系列過程1。它由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生，在胎盤中呈高水平表達(dá)并能在進(jìn)入血循環(huán)時(shí)檢測到，但在羊水和其它體液中檢測不到2。ADAM12結(jié)合并分解胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3（IGFBP-3）、IGFBP-5而影響IG

16、F的生物利用度，因而有可能在胎盤的生長和功能中起重要作用3。目前ADAM12-S作為一項(xiàng)新的指標(biāo)被建議納入染色體異常疾病的篩查項(xiàng)目中。有報(bào)道證實(shí)，ADAM12-S 在孕中期是一種有效的篩查指標(biāo), 尤其結(jié)合三聯(lián)篩查將大大提高唐氏綜合癥的檢出率, 提高診斷準(zhǔn)確率4。同時(shí)，研究證實(shí)，該標(biāo)記物也可以用于先兆子癇、胎兒生長受限和早產(chǎn)的早期檢測。本研究通過建立孕中期產(chǎn)前篩查孕婦血清中ADAM12-S初始濃度與最終MoM值關(guān)系方程，對正常孕婦孕中期ADAM12-S MoM值參考范圍進(jìn)行了初步探討，同時(shí)選擇發(fā)生宮內(nèi)呼吸窘迫、先兆子癇、早產(chǎn)的孕婦，測定其孕中期ADAM12-S，分析ADAM12-S在預(yù)測孕婦發(fā)生

17、不良妊娠中的作用。1 資料與方法1. 1 研究對象 山西省長治地區(qū)2008-2010年在本院遺傳室自愿參加孕期中期常規(guī)三聯(lián)產(chǎn)前篩查、隨訪分娩健康兒的妊娠1620周的孕婦285例，發(fā)生早產(chǎn)的孕婦30例、先兆子癇30例，宮內(nèi)呼吸窘迫32例。年齡19-37歲，平均25.7歲, 漢族，無糖尿病病史和吸煙史，無唐氏等缺陷兒妊娠史及家族史。孕婦篩查資料保存完整。孕周計(jì)算方法：若月經(jīng)規(guī)律則按末次月經(jīng)時(shí)間推算；若月經(jīng)不規(guī)律則按照早期B超測量胎兒頭臀長推算。1. 2 標(biāo)本貯存 采集空腹靜脈血于不含任何抗凝劑的采血管內(nèi)（EDTA抗凝劑對ADAM12的檢測影響很大5），在2 h內(nèi)以1500 *g 離心分離血清置-

18、70 保存。血清標(biāo)本均室溫下復(fù)融1次, 且為非高脂或高膽紅素血清標(biāo)本。1. 3 ADAM12-S檢測方法 試劑盒及1420型時(shí)間分辨熒光免疫分析儀購自芬蘭Wallac公司, 按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 15. 0統(tǒng)計(jì)軟件, 通過分析血清ADAM12-S中位濃度與孕齡間的回歸關(guān)系，綜合比較曲線擬合模型回歸系數(shù)P 值、校正的擬合優(yōu)度AdjR, 選取最優(yōu)模型計(jì)算ADAM12-S中位濃度, 從而得到ADAM12-S 中位數(shù)倍數(shù)( multiple of the median, MoM )值。探討MoM 值與孕周年齡的關(guān)系，選取最優(yōu)模型求出經(jīng)孕周及年齡校正后的MoM 值。

19、將ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周、年齡校正后的MoM值進(jìn)行曲線擬合，選取最優(yōu)模型得到ADAM12-S初始濃度與校正后MoM 值的關(guān)系方程。最后求出孕中期正常孕婦ADAM12-S MoM值的參考范圍。選擇發(fā)生宮內(nèi)呼吸窘迫、先兆子癇、早產(chǎn)的孕婦，測定其孕中期ADAM12-S，并轉(zhuǎn)化成MoM值，計(jì)算利用正常孕婦ADAM12-S參考范圍預(yù)測上述不良妊娠的靈敏度和特異性。2 結(jié)果2. 1 孕16-20周各孕周ADAM12-S初始濃度分布未校正時(shí),各孕周ADAM12-S 初始濃度的平均值和中位數(shù)值隨孕周的增加而逐漸升高 (表1)。表1 孕16-20周孕婦各孕周ADAM12-S初始平均濃度、中位濃度及預(yù)測

20、中位濃度（ng/ml）孕周 例數(shù) 初始濃度 中位濃度 預(yù)測中位濃度 16 61 1146.44±382.18 1050 1062.40 17 61 1188.98±289.41 1150 1131.03 18 60 1258.85±347.54 1220 1204.09 19 60 1262.11±346.41 1245 1281.87 20 43 1448.02±337.57 1380 1364.682. 2 ADAM12-S 與孕周的回歸關(guān)系 ADAM12-S初始濃度與孕周呈正相關(guān)( r =0.256，P < 0. 01)。校正孕齡時(shí)

21、選取模型的原則為: 模型的回歸系數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0. 05)以及模型校正的擬合優(yōu)度(R2)靠近1。本結(jié)果表明線性曲線模型擬合較好（R2 =0.962,P<0.01），擬合后的方程為：Y=e(5.9668+0.0626*t)，t表示孕周，Y表示曲線模型預(yù)測的ADAM12-S各孕周中位濃度。擬合圖形見圖1，曲線預(yù)測的ADAM12-S孕16-20周中位濃度見表1 圖1 曲線擬合模型擬合后曲線2. 3 孕周與校正后ADAM12-SMoM 值的相關(guān)分析用曲線預(yù)測各孕周ADAM12-S中位數(shù)濃度，求所有標(biāo)本的MoM值與孕周作相關(guān)分析分析顯示無相關(guān)關(guān)系（r=0.056，P>0.0

22、5），原始數(shù)據(jù)見表2。表明以MoM值表示后有效地消除了孕周間變異。 表2孕周與ADAM12-S MoM值相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果codemom孕周codePearson 相關(guān)性1-.056顯著性（雙側(cè)）.351N278278mom孕周Pearson 相關(guān)性-.0561顯著性（雙側(cè)）.351N2782782. 4 ADAM12-SMoM值的孕婦年齡校正 將ADAM12-S MoM值按年齡分組，做年齡與ADAM12-S MoM值中位數(shù)的相關(guān)分析，結(jié)果顯示其呈負(fù)相關(guān)（r=0.19，P<0.01）。擬合方程為：Y=0.0317*t+1.861，t表示中位年齡，Y表示曲線預(yù)測ADAM12-S MoM值。各年

23、齡組擬合后的ADAM12-S MoM值中位數(shù)見表3，擬合后曲線見圖2表3 各體重組擬合前后ADAM12-S MoM值 年齡 例數(shù) 中位年齡 擬合前 擬合后 22 36 22 1.16 1.16 24-26 98 25 1.04 1.07 27-29 105 28 1.00 0.97 30-33 34 31 0.91 0.8834 12 35 0.72 0.75 圖2 年齡曲線擬合模型擬合后曲線2. 5 經(jīng)指數(shù)模型獲得ADAM12-S MoM值中位數(shù)，求出所有標(biāo)本的ADAM12-S MoM值的中位數(shù)倍數(shù)值，并與年齡做相關(guān)分析，結(jié)果顯示年齡與ADAM12-S MoM值中位數(shù)存在相關(guān)關(guān)系（r=0.1

24、64，P<0.01），原始數(shù)據(jù)見表4，表明并沒有完全消除年齡影響?？赡芘c樣本量較小有關(guān)。 表4 年齡相關(guān)性 age年齡momagePearson 相關(guān)性1.164*顯著性（雙側(cè)）.006N278278年齡momPearson 相關(guān)性.164*1顯著性（雙側(cè)）.006N278278 2.6 ADAM12-SMoM值的孕婦體重的相關(guān)性孕婦體重與ADAM12-SMoM值中位數(shù)進(jìn)行相關(guān)分析顯示有相關(guān)性（r=0.177，P<0.01），原始數(shù)據(jù)見標(biāo)5但在回歸分析中所有模型的回歸系數(shù)均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以不對體重進(jìn)行分析。 表5 體重相關(guān)性年齡momweight年齡momPearson 相關(guān)

25、性1-.177*顯著性（雙側(cè)）.003N278278weightPearson 相關(guān)性-.177*1顯著性（雙側(cè)）.003N278278*. 在 .01 水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)。2.7 ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周、孕婦年齡校正后最終MoM 值的關(guān)系方程擬合ADAM12-S初始濃度與最終ADAM12-S MoM值，線性曲線模型擬合較好（R2=0.776，P<0.01），ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周和年齡校正的最終MoM值的關(guān)系方程為：Y=0.0007228*z+0.1351，z為ADAM12-S初始濃度，單位為ng/m，Y為經(jīng)孕周和體重校正后的最終ADAM12-S MoM值。擬合

26、圖見3 圖3 ADAM12-S初始濃度與最終ADAM12-S MoM值模型擬合圖2.8 應(yīng)用ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周、孕婦年齡校正后最終MoM 值的關(guān)系方程求得正常孕婦最終MoM 值。根據(jù)最終MoM 值求得的正常孕婦的MoM 值參考范圍為（0.53，1.55）。其方法為均數(shù)加減1.96倍標(biāo)準(zhǔn)差。2.9 利用正常孕婦ADAM12-S參考范圍預(yù)測發(fā)生宮內(nèi)呼吸窘迫的靈敏度和特異性分別為84.3%和80.9%。 2.10 利用正常孕婦ADAM12-S參考范圍預(yù)測發(fā)生先兆子癇和早產(chǎn)的靈敏度分別為13.1%和10%，特異性為80.4%。3 討論篩查胎兒先天性缺陷及不良妊娠，我們希望時(shí)間提前且敏感度

27、高、特異性高。產(chǎn)前篩查常用的篩查指標(biāo)是母體血清AFP、HCG和游離E3，根據(jù)三者的濃度進(jìn)一步計(jì)算胎兒發(fā)生先天性缺陷的危險(xiǎn)性。通過這種方法，仍然存在一定的漏篩6。而今，一種新的蛋白酶ADAM12-S引起了研究者的關(guān)注。ADAM12是ADAM家族成員之一，有兩種形式：一種是膜結(jié)合形式，稱為ADAM12-L；另一種為分泌形式，稱為ADAM12-S。兩者區(qū)別在于后者只有一較短的34個(gè)氨基酸的C-末端，缺乏跨膜結(jié)構(gòu)域，分子量77775。胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞會(huì)分泌大量的ADAM12，而它的分泌型ADAM12-S只在胎盤組織中表達(dá)，后進(jìn)入血液可被檢測到，而羊水和其它體液中則檢測不到，通過Western印跡在非孕婦

28、血清亦檢測不到，因此它更有特異性2。Laigaard J和Spencer K7,8等以患胎兒染色體缺陷?。ㄌ剖暇C合征和18三體征）的早期和中期孕婦為研究對象，相同孕周的無胎兒染色體缺陷病的孕婦為參考對象，用時(shí)間分辨熒光法檢測她們血清中的ADAM12-S的濃度來進(jìn)行比較分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，早孕期實(shí)驗(yàn)組孕婦ADAM12-S濃度與對照組相比顯著降低，而在中孕期實(shí)驗(yàn)組孕婦ADAM12-S濃度大幅升高。因此認(rèn)為ADAM12-S是未來極有意義的一個(gè)唐氏綜合征和18三體的產(chǎn)前篩查指標(biāo)5。Laigaard等采用ADAM 12 + PAPPA 兩項(xiàng)聯(lián)合篩查，在假陽性率為 5% 時(shí), 篩查檢出率為 91 %; ADA

29、M 12 +PAPPA + FreeHCG+ NT聯(lián)合篩查, 檢出率為 97%9。而且許飛等人在關(guān)于ADAM12篩查胎兒唐氏綜合征中的應(yīng)用價(jià)值的研究中證實(shí)，ADAM12是一種有效的篩查指標(biāo)，結(jié)合三聯(lián)篩查大大提高了唐氏綜合征的檢出率4。先兆子癇作為不良妊娠中的一種，在世界范圍內(nèi)影響著3-7%的孕婦，是造成出生死亡的重要原因之一。Sabine G等人的研究表明與相同孕周正常孕婦比較，發(fā)生先兆子癇的孕婦ADAM12-S表達(dá)明顯升高，ADAM12-S有望成為先兆子癇的早期標(biāo)記物10。同時(shí)，張明等人通過病例對照研究，初步推斷子癇前期孕婦ADAM 12水平自妊娠早期（14-18周）就較正常孕婦明顯降低，并

30、一直持續(xù)到妊娠中期。另外，有研究證實(shí)，ADAM12-S可用于胎兒生長受限11、早產(chǎn)12等不良妊娠的早期檢測。我們選擇了山西省長治地區(qū)2008-2010年在本院遺傳室自愿參加孕期中期常規(guī)三聯(lián)產(chǎn)前篩查、隨訪分娩健康兒的妊娠1620周的孕婦285例，測定ADAM12-S，根據(jù)ADAM12-S初始濃度（x）與最終MoM 值的關(guān)系方程的建立，初步探索正常人群MoM值參考范圍，其它學(xué)者進(jìn)行了相關(guān)方面的研究，但多數(shù)研究對象主要集中于高加索人群，在黃種人尤其在中國開展相關(guān)研究的報(bào)道很少。因此有必要建立本地區(qū)人群的ADAM12-S的中位數(shù)參考范圍。本實(shí)驗(yàn)建立篩查指標(biāo)的中位數(shù)參考范圍考慮了孕周、體重、年齡的影響，

31、研究表明，ADAM12-S與孕周、年齡呈正相關(guān)，與體重呈負(fù)相關(guān)，回歸分析中所有模型的回歸系數(shù)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以不做分析。應(yīng)用ADAM12-S初始濃度與經(jīng)孕周和年齡校正后最終MoM值的關(guān)系方程求得正常人群ADAM12-S初始濃度轉(zhuǎn)化為最終MoM值，根據(jù)最終MoM值求的正常人群的MoM值的參考值范圍。另外，我們選擇山西省長治地區(qū)2008-2010年在本院遺傳室自愿參加孕期中期常規(guī)三聯(lián)產(chǎn)前篩查，發(fā)生先兆子癇、早產(chǎn)、宮內(nèi)呼吸窘迫的孕婦，測定其孕中期ADAM12-S濃度并轉(zhuǎn)化成MoM值。利用正常孕婦ADAM12-S參考范圍預(yù)測發(fā)生宮內(nèi)呼吸窘迫的有較高的靈敏度和特異性（分別為84.3%和80.9%）；

32、預(yù)測先兆子癇和早產(chǎn)有較高的特異性，為80.4%；但是靈敏度低，分別為13.1%和10%。本實(shí)驗(yàn)通過初步探索正常人群MoM值參考范圍，對臨床開展利用ADAM12-S篩查不良妊娠的研究有重要意義。但是本研究也存在一定的局限性：入選者的例數(shù)偏小，篩查不良妊娠的范圍比較窄，還應(yīng)擴(kuò)大篩查不良妊娠范圍，同時(shí)擴(kuò)大樣本量，在下一步的研究中我們會(huì)進(jìn)一步完善該項(xiàng)工作。 參考文獻(xiàn)1 TIAN Bao-ling，WEN Jian-ming.Study of ADAM12(meltrin alpha) geneJ. Foreign Med Sci Sect Pathophysiol Clin Med,2000,5(5)

33、：411-414.2 Makrydimas G，Sotiriadis A，Spencer K，et al. ADAM12-S in coelomic fluid and maternal serum in early pregnancyJ.Prenat Dragn,，2006，26(13)：1197-1200. 3唐婕，周昌菊，谷永紅.解整合素-金屬蛋白酶12在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)及意義J.國際病理科學(xué)與臨床雜志.2007,27(6)：481-484. 4許飛，許婷姝，郭彩琴等.解整合素金屬蛋白酶12在唐氏綜合征產(chǎn)前篩查中的初步研究J.中國優(yōu)生優(yōu)育,2009,15(4):208-209.5