組織培養(yǎng)試驗器材

1、植物組織培養(yǎng)設(shè)備1、高壓消毒鍋：用于培養(yǎng)基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。2、超凈工作臺：用于培養(yǎng)物的無菌操作。3、接種工具：包括雙筒實體顯微鏡、鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈或接種滅菌器（電熱 消毒器）等。4、培養(yǎng)設(shè)備：包括空調(diào)機、定時器、溫度控制器、增濕機或去濕機、培養(yǎng)架、搖床、恒 溫培養(yǎng)箱、人工培養(yǎng)箱等。5、化學(xué)實驗及分析設(shè)備：包括分析天平，天平、酸度計、蒸餾水器、烘箱或玻璃儀器烘干器、電爐、藥品柜、冰箱、晾干架等。6、封口膜，培養(yǎng)瓶，試管，培養(yǎng)皿，專用記號筆，托盤，手術(shù)接種剪，直鑷，槍型接種鑷，手術(shù)刀柄，超凈工作臺，接種滅菌器，不銹鋼接種盤，組織培養(yǎng)架，光照培養(yǎng)箱，人工 氣候箱，生化培養(yǎng)箱，

2、恒溫恒濕箱，照度計，PH計，酸度計，電導(dǎo)率儀，干濕溫度計，玻璃棒溫度計，電子天平，精密電子秤，磁力攪拌器，生物顯微鏡，高壓滅菌鍋，純水器，組 培推車，三角燒瓶，燒杯，量筒，試管架，試管刷，容量瓶，酒精燈，干燥器，吸球及移液 管（0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20ML），容量瓶，試劑瓶（含棕色試劑瓶）。組培試劑類：3.1. 植物生長調(diào)節(jié)劑類 Plant growth regulator :6-芐氨基嘌呤（6-BA） 6-Benzylaminopurine；6-糠氨基嘌呤（KT;激動素）6-Furfurylami nopuri ne（Ki net in）;腺嘌呤（腺素）Adenine

3、；氯吡苯脲（KT-30 ； CPPU）Forchlorfenuron ；反玉米素 Trans-zeatin ;塞苯?。═DZ）Thidiazuron ；生物素Biot in ；a -萘乙酸（NAA）1-Naphthylacetic acid ；3-吲哚乙酸（IAA） 3-Indole acetic acid；3-吲哚丁酸（IBA） 3-Indole butyric acid；2, 4-二氯苯氧乙酸（2 , 4-D）2,4-Dichlorophenoxyacetic acid；赤霉素 GA3 Gibberellic acid ；奈乙酰胺（NAD 2- （1-Naphthyl ） acetamid

4、e ；3 -奈氧乙酸 3 -Naphthoxyacetic acid ；對氯苯氧乙酸（防落素）4-Chlorphenoxyacetic acid ；對溴苯氧乙酸 4-Bromophenoxyacetic acid；對碘苯氧乙酸 4-Iodophenoxyacetic acid；24-表油菜素內(nèi)脂 24-Epibrassi nolide ；蕓苔素內(nèi)酯Brassinolide ；赤霉素 GA4+7 （GA4:GA7=1:2）Gibberellin A4+7；青鮮素 Maleic hydrazide ；丁酰肼（比久）Daminozide ；吲哚-3-丙酸 Indole-3-propanoic aci

5、d；吲哚-3-丙烯酸 3-Indole-propenoic acid；吲哚-3-甲醇 3-Indole-methanol ;吲哚-3-甲醛 Indole-3-carboxylic acid；吲哚-3-甲酸 Indole-3-carboxylic acid ;三十烷醇 Triacontanol;多效唑（PP333）Paclobutrazol ;2, 4-D鈉鹽；縮節(jié)胺 Mepiquat chloride ;矮壯素 Chlormequat ;乙烯利Ethephon。3.2. 有機物類 Organic matter :煙酸 Nicotinic acid ；肌醇 myo-Inositol；鹽酸硫胺（V

6、B1） Thiamine HCL,VB1 ；鹽酸吡哆辛（VB6） Pyridoxin HCL,VB6 ；甘氨酸Glycine ；葉酸 Folic acid ；核黃素（VB2）Riboflavin,VB2；抗壞血酸（VC）Ascorbic acid,VC ；正丁酸 n-Butyric acid；檸檬酸 Citric acid monohydrate；蔗糖 Sucrose ；DL-精氨酸 DL-Arginine ；腺嘌呤硫酸鹽Ade nine sulfate ；葡萄糖 Glucose（Dextrose）；蛋白胨Peptone ；水解酪蛋白 Case in acid hydrolysate ；水解乳

7、蛋白 Lactoalbumin hydrolysate 。3.3. 無機物類：硫酸鐵 Ferric sulfate ；乙二胺四乙酸二鈉鹽Ethyle nediam ine tetraacetic acid disodium salt乙二胺四乙酸鐵鈉鹽Ethyle nediam ine tetraacetic acid mono sodium ferric salt硼酸 Boric acid ；氯化鈷 Cobalt Chloride ；碘化鉀 Potassium lodide ；鉬酸鈉 Sodium molybdate ；無水氯化鈣 Calcium choloride an hydrous；二水

8、氯化鈣 Calcium choloride ；干燥氯化鈣 Calcium choloride （ for drying ）；硝酸鈣 Calcium nitrate ；D-泛酸鈣 Calcium D-pantothenate；磷酸三鈣 Tri-Calcium phosphate ；硫酸銅 Cupric sulfate ；硝酸胺 Ammonium Nitrate ；硝酸鉀 Potassium Nitrate ；結(jié)晶硫酸鎂 Magnesium sulfate ；硫酸亞鐵 Ferrous Sulfate磷酸二氫鉀 Potassium dihydrogen phosphate ;硫酸錳 Manganes

9、e Sulfate ;硫酸鋅 Zinc sulfate ;磷酸二氫鈉 Sodium phosphate mono basic ;三氧化鉬 Molybdenum Trioxide ;氯化鉀 Potassium chloride ;氫氧化鉀 Potassium hydroxide ;硫酸銨 Ammonium sulfate ;二氧化鈦 Titanlum dioxide 。34 日用耗材 Consumptive material of daily expenses:瓊脂粉Agar;冷凝脂 Fungible Agar ；活性炭粉 Carbon Activated ；超細活性炭粉 Wispy Carbo

10、n Activated 。消毒試劑類：甲醛（福爾馬林溶液）Formalin ;高錳酸鉀 Potassium permanganate ；新基爾滅（苯扎溴銨溶液）Ben zalko nium Bromide Solution；安替福民（次氯酸鈉溶液）；過氧化氫30%（雙氧水）Hydrogen Peroxide氯化汞。一、實驗室設(shè)計1. 準備室:（1）進行藥品的保存、配置、消毒、分裝等。（2）器具的洗滌、干燥、消毒。（3）生理生化指標的測定等。2. 接種室：進行材料的接種，內(nèi)置超凈工作臺或接種箱。外設(shè)緩沖間-放置拖鞋、工作服、工作帽等。3. 培養(yǎng)室：植物材料的無菌培養(yǎng)，室內(nèi)主要有培養(yǎng)架和控制溫度及

11、光照的設(shè)備。4. 細胞學(xué)觀察實驗室：進行培養(yǎng)材料的組織學(xué)、細胞學(xué)、觀察照相等。二、玻璃器皿的選擇和清洗1.玻璃器皿的選擇*試管-適合于用少量培養(yǎng)基及試驗各種不同配方時選用。*三角錐瓶-適用于各種培養(yǎng)（如固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、大規(guī)模培養(yǎng)或一般培養(yǎng)）。*L形管和T形管-為專用的旋轉(zhuǎn)式液體培養(yǎng)試管。*培養(yǎng)皿-適于作單細胞的固體平板培養(yǎng)、胚和花藥培養(yǎng)和無菌發(fā)芽。*角形培養(yǎng)瓶和圓形培養(yǎng)瓶-適用于液體培養(yǎng)用，如單細胞和原生質(zhì)體的淺層培養(yǎng)。*果醬瓶-常用作試管苗大量繁殖用的培養(yǎng)瓶。藥品試劑：MS培養(yǎng)基的配制步驟這樣每次使用時，取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將

12、制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使 用。大量元素（母液I ） mg / LNHNO33 000KNO38 000CaCb - 2H2O8 800MgSO 7H2O7 400KHPO3 400微量元素（母液U)KI166HBQ1 240MnSO，4H2O4 460ZnSO - 7H2O1 720NaMoQ 2H2O50CuSQ 5H2O5C0CI2 - 6H2O5鐵鹽（母液川）FeSO - 7H2O5 560Na>- EDTA 2H2O7 460有機成分（母液N）V A肌醇20 000IV B煙酸100鹽酸吡哆醇（維生素B6）100鹽酸硫胺素（維生素B1）100甘氨酸400以

13、上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨配成 1 L的貯備液。其中，母液I、母液U及母液W的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1L。母液川的配制方法是：將稱好的 FeS04 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分別放到450 mL蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混 合，并將pH調(diào)至5?5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各種母液 配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日 期等，保存在冰箱的冷藏室中MS培養(yǎng)基中還需要加入：2，

14、4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6-芐基嘌呤（6-BA）等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液（0?1 mg/mL）。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg將2，4-D和NAA用少量（1 mL） 無水乙醇預(yù)溶，將 6-BA用少量（1 mL）的物質(zhì)的量濃度為 0.1 mol/L的NaOl溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL ,即得質(zhì)量濃度為0?1 mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液I為 50 mL,母液A 和W B 各 5 mL。再取 2, 4?D 5 mL、NAA1 mL,與各種母液一起放入燒杯中。MS培

15、養(yǎng)基配制培養(yǎng)液時的注意事項配制培養(yǎng)液時應(yīng)注意： 在使用提前配制的母液時，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動盛放 母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰 這種母液，重新進行配制； 用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒 或移液管潤洗2次； 量取母液時，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃掉1種，以免出錯。溶化瓊脂用粗天平分別稱取瓊脂 9 g、蔗糖30g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 蒸餾水750 mL，用電爐加熱，邊 加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1 00

16、0 mL，攪拌均勻。需要注意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào)pH用滴管吸取物質(zhì)的量濃 度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨 時用精密的pH試紙（5.47.0）測培養(yǎng)基的pH, 直到培養(yǎng)基的 pH為5.8 為止（培養(yǎng)基的pH必須嚴格控制在 5.8） 趁熱分裝。分裝時，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入 錐形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到

17、瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培養(yǎng)基，可分裝2530瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時封蓋瓶口。用2塊硫酸紙（每塊大小約為9 cmx 9 cm）中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后在錐 形瓶外壁貼上標簽。B5培養(yǎng)基配方成分使用濃度（mg/L）r ,曰人量兒糸硝酸鉀 KNO32500MgSO4 7H2O250CaCI2 2H2O150(NH4)2SO4134微量兒糸KI0.75H3BO43.0MnSO4 4H2O10ZnSO4 7H2O2.0Na2MoO4 2H2O0.25CoCl2 6H2O0.025鐵鹽CuSO4 5H2O0.025Na2

18、-EDTA37.3FeSO4 7H2O27.8有機成分肌醇100煙酸1.0鹽酸吡哆醇1.0鹽酸硫銨10成分分子量使用濃度（mg/L）MS培養(yǎng)基配方酸鉀 KN03101.111900硝酸大量元素磷酸二氫鉀KH2PO4136.09170硫酸鎂MgSO4.7H2O246.47370氯化鈣CaCI2.2H2O147.02440碘化鉀KI166.010.83硼酸H3BO361.836.2硫酸錳MnSO4.4H2O223.0122.3微量元素硫酸鋅 ZnSO4.7H2O287.548.6鉬酸鈉Na2MoO4.2 H2O241.950.25硫酸銅CuSO4.5H2O249.680.025氯化鉆CoCI2.62237.930.025鐵鹽乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA372.2537.3硫酸亞鐵 FeSO24.7H2O278.0327.8肌醇100甘氨酸2有機成分鹽酸硫胺素VB10.1鹽酸吡哆醇 VB60.5銨 NH4NO380.041650煙酸 VB5或VPP0.5蔗糖sucrose342.3130g/L鹽7.3B5培養(yǎng)基的組成和配方組成成2500KNO3大量元CaCI2 2H2O150250MgSO47H2O134(NH4)2SO40.75KI3.0H3BO410MnSO44H2O微量元ZnSO4 7H2O2.00.25Na2MoO42H2O0.025CoCl2 6H2