溯源性和標(biāo)準(zhǔn)化

1、 溯源性和標(biāo)準(zhǔn)化一、基本概念（一）溯源性定義：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測(cè)量結(jié)果或測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性。VIM：1993，定義6.10臨床檢驗(yàn)的目的：對(duì)患者新鮮標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告可靠的結(jié)果。臨床檢驗(yàn)的傳統(tǒng)：對(duì)收集的患者標(biāo)本只做一次檢驗(yàn)，就發(fā)出報(bào)告。因此，發(fā)出報(bào)告的可靠性必須體現(xiàn)兩個(gè)基本要求:精密度：重復(fù)性好；準(zhǔn)確度：和參考方法具有可比性。在臨床檢驗(yàn)中，公認(rèn)：在參考實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，由具有認(rèn)可資格的操作人員使用參考方法、或以參考品為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)新鮮標(biāo)本進(jìn)行的檢測(cè)結(jié)果是參考值結(jié)果。可是，在參考實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的所有參考方法是手工方法；或使用參考品校準(zhǔn)的

2、方法，在實(shí)現(xiàn)參考值的傳遞上非常煩瑣。在日常檢測(cè)中，無法使用這樣的參考方法或參考品進(jìn)行大量病人標(biāo)本的檢測(cè)，出報(bào)告。因此，現(xiàn)實(shí)問題是：是否可以讓常規(guī)的檢測(cè)系統(tǒng)，對(duì)病人標(biāo)本的檢測(cè)，在計(jì)量單位一致的前提下，得到和參考系列相同的檢測(cè)量值。這就是通過一條不間斷的比較鏈，使檢測(cè)結(jié)果或檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來。為此，生產(chǎn)廠商必須對(duì)完成檢測(cè)涉及的檢測(cè)系統(tǒng)各組分（儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序）進(jìn)行嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化程序，實(shí)現(xiàn)溯源性。（二）標(biāo)準(zhǔn)化1972年，由ISO出版，TRBSanders主編的標(biāo)準(zhǔn)化的目的與原理一書對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化下的定義是：“標(biāo)準(zhǔn)化是為了所有有關(guān)方面的利益，特別

3、是為了促進(jìn)最佳的、全面的經(jīng)濟(jì)并適當(dāng)考慮到產(chǎn)品使用條件與安全要求，在所有有關(guān)方面的協(xié)作下，進(jìn)行有秩序的特定活動(dòng)所制定并實(shí)施各項(xiàng)規(guī)則的過程。”可以簡(jiǎn)單理解為：為了實(shí)現(xiàn)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性，檢測(cè)系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商的所有努力的過程為標(biāo)準(zhǔn)化。（三）理解檢驗(yàn)的特點(diǎn)1檢驗(yàn)的檢測(cè)對(duì)象是病人標(biāo)本，而且一定是新鮮的標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)室使臨床和病人滿意的是檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。實(shí)現(xiàn)結(jié)果可靠性的質(zhì)量管理有許多內(nèi)容。在保證收集和處理的標(biāo)本質(zhì)量、在檢驗(yàn)后不存在處理檢測(cè)數(shù)據(jù)和發(fā)出報(bào)告的差錯(cuò)前提下，獲得可靠結(jié)果的主要階段是分析過程的質(zhì)量。2檢驗(yàn)的習(xí)慣是對(duì)每份病人標(biāo)本只做一次檢測(cè)，就發(fā)出報(bào)告；而且，每個(gè)標(biāo)本內(nèi)究竟內(nèi)含多少分析物無法知道。因此，

4、度量檢驗(yàn)的分析質(zhì)量不能以工業(yè)上的多次采樣、多次檢測(cè)或測(cè)量、取均值和預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)比較等方式來觀察。3病人結(jié)果可靠性的含義是準(zhǔn)確度。國(guó)際上準(zhǔn)確度的定義為：檢測(cè)結(jié)果和被檢測(cè)物 /分析物真值間的一致性。（VIM93-3.5）。注：a）作為結(jié)果，在真值和該值間的差異，通常表示為相同的計(jì)量單位；此時(shí)，表示差異的更確切的詞為“不準(zhǔn)確度”。b） 可以使用“可接受的參考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11）c）特別是對(duì)每個(gè)標(biāo)本只作一次測(cè)定時(shí)，差異不僅包括分析過程的不準(zhǔn)確度，也包括了分析過程的不精密度。4檢驗(yàn)質(zhì)量的首要問題是分析過程（即檢測(cè)的）精密度。定義為：各個(gè)重復(fù)檢測(cè)值間的一致性。度量精密度的指標(biāo)是不

5、精密度。也即：臨床要求結(jié)果的重復(fù)性好。5自動(dòng)化在臨床檢驗(yàn)的應(yīng)用，極大地提高了檢驗(yàn)的效率和質(zhì)量。而且，在多年的實(shí)踐中，認(rèn)識(shí)到：保持檢驗(yàn)必需的自動(dòng)化儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序的固定組合，是實(shí)現(xiàn)1 溯源性的前提。否則，一事無成。因此，要使檢驗(yàn)結(jié)果的量值和參考系統(tǒng)結(jié)果一致，也就是對(duì)涉及檢驗(yàn)的檢測(cè)系統(tǒng)各組分的標(biāo)準(zhǔn)化。（四）、如何理解校準(zhǔn)品1衡量一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)（檢驗(yàn)方法）的基本分析性能有 4點(diǎn)：不精密度、不準(zhǔn)確度、病人結(jié)果可報(bào)告范圍、分析靈敏度。使用了自動(dòng)化分析儀，日常檢驗(yàn)的精密度得到了顯著的提高；在優(yōu)良試劑盒的配合下，病人結(jié)果的可報(bào)告范圍也可以滿足臨床要求；大多常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目沒有對(duì)極低濃度的臨床要求。這

6、樣，結(jié)果的可靠性的關(guān)鍵是準(zhǔn)確度，即對(duì)校準(zhǔn)品值的調(diào)節(jié)。因此，實(shí)現(xiàn)新鮮病人標(biāo)本結(jié)果的溯源性，成為使校準(zhǔn)品值實(shí)現(xiàn)溯源性。2認(rèn)識(shí)標(biāo)準(zhǔn)品傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)，要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品 (Standard)。以臨床化學(xué)檢驗(yàn)的比色測(cè)定為例，常作三個(gè)檢測(cè)：空白、標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定。用空白液調(diào)整吸光度為零，讀出測(cè)定比色液和標(biāo)準(zhǔn)比色液的吸光度，分別為 As和 Au；已知標(biāo)準(zhǔn)液濃度為 Cs。在一定范圍內(nèi)，某分析物濃度和吸光度呈良好比例關(guān)系，則樣品內(nèi)某分析物濃度 Cu為：AUCU = AS ×CS一般而言，檢驗(yàn)工作使用的標(biāo)準(zhǔn)品屬應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。配制或供應(yīng)這類標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)室或廠商具有符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的純品。稱取一定

7、量的純品，然后將其溶解，在容量瓶?jī)?nèi)用溶劑稀釋至容積刻度，混勻，標(biāo)準(zhǔn)液配制完成。由稱量法獲得的稱量值和容量法配制的容積，計(jì)算出該標(biāo)準(zhǔn)品濃度。檢定部門抽樣測(cè)定，結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)屬合格。即使測(cè)定檢定結(jié)果在范圍的上、下限，也不能將實(shí)測(cè)值作為標(biāo)準(zhǔn)值。因?yàn)闇y(cè)定值的可靠性取決于檢定方法，一般的分析方法的可靠性不如分析化學(xué)公認(rèn)的稱量法和容量法。所以標(biāo)準(zhǔn)品的定值由稱量和容積計(jì)算確定。檢定不合格即報(bào)廢，決不可將實(shí)測(cè)值替代修正。3校準(zhǔn)品和定值為了克服因純標(biāo)準(zhǔn)液和病人樣品間的基體差異，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)重誤差，20年前開始引用具有與病人樣品基體相似的校準(zhǔn)品替代標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作。可是，盡管校準(zhǔn)品的主要來源是人的血清，為

8、了使校準(zhǔn)品內(nèi)的一些分析物水平達(dá)到某個(gè)程度，而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品，所有的校準(zhǔn)品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新的基體差異。（1）校準(zhǔn)值隨方法而異校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無法由稱量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測(cè)系列。（2）新鮮病人標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品由于所有校準(zhǔn)品都是處理過的樣品，和新鮮病人標(biāo)本有著基體差異。若使用公認(rèn)的參考方法去標(biāo)化測(cè)定校準(zhǔn)品，測(cè)定程序是嚴(yán)密的，測(cè)定值是可靠的。但使用該測(cè)定值去校準(zhǔn)常規(guī)的檢測(cè)系列時(shí)，校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時(shí)的表現(xiàn)明顯不同于新鮮病人標(biāo)本，不能將參考方法系列的準(zhǔn)確度通過校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。

9、須明確的，所有用于檢驗(yàn)中的檢測(cè)方法、儀器、試劑等都是用來檢測(cè)病人新鮮標(biāo)本的，不是用來檢測(cè)校準(zhǔn)品這樣的處理過樣品。如果先用公認(rèn)的參考方法檢測(cè)病人標(biāo)本，再以具有參考值的病人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測(cè)系列（包括方法、試劑、儀器），此時(shí)該檢測(cè)系列再檢測(cè)其他新鮮病人標(biāo)本時(shí)，這些病人標(biāo)本結(jié)果的溯源性可上溯至公認(rèn)的參考方法。也即用新鮮病人標(biāo)本是校準(zhǔn)檢測(cè)系列的最佳校準(zhǔn)品。用這種方式校準(zhǔn)，能使同一個(gè)檢測(cè)系列在不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)新鮮病人標(biāo)本時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間具可比性。一些大公司正是按照這樣的認(rèn)識(shí)為校準(zhǔn)品定值。原則上，以具有參考值的新鮮病人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測(cè)系列（包括方法、試劑、儀器）2 后，檢測(cè)系列再去檢測(cè)候選的校準(zhǔn)品（處理

10、過），得到的檢測(cè)值為初始校準(zhǔn)值。以初始校準(zhǔn)值反過來再校準(zhǔn)組合的檢測(cè)系列后，該檢測(cè)系列又去檢測(cè)病人的新鮮標(biāo)本。觀察病人標(biāo)本的檢測(cè)值是否和參考方法的測(cè)定值具良好的可比性。實(shí)踐說明，只有不斷地調(diào)整校準(zhǔn)值，直至用該校準(zhǔn)值校準(zhǔn)指定的檢測(cè)系列（加上具有校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品，即組合成檢測(cè)系統(tǒng)）后，檢測(cè)系統(tǒng)再檢測(cè)病人標(biāo)本，得到的測(cè)定值和病人標(biāo)本的參考方法測(cè)定值具有滿意的可比性，此時(shí)，校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值可以確認(rèn)。二、公司標(biāo)準(zhǔn)化的大致內(nèi)容和步驟（一） 實(shí)現(xiàn)溯源性的必備條件1建立“公司一級(jí)參考品”：準(zhǔn)備多個(gè)混和血清，經(jīng)離心、過濾等處理后，各個(gè)混和血清分裝成小包裝。-70保存。試驗(yàn)說明，這樣保存的血清復(fù)融后具有的性能和新鮮血清

11、相似。所以，這些血清組是公司產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化的“公司一級(jí)參考品”。由參考實(shí)驗(yàn)室使用參考方法，或采用參考品對(duì)這些血清定值，使血清具有參考值。2設(shè)立公司內(nèi)部使用的“一級(jí)校準(zhǔn)品”：由于參考系統(tǒng)或參考材料的使用常常是很有限的，因此，必須設(shè)立內(nèi)部使用的參考系統(tǒng)（或材料）復(fù)制品即設(shè)立公司一級(jí)校準(zhǔn)品（MasterCalibrator）。對(duì)公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值方案見以下內(nèi)容。除了有公司一級(jí)校準(zhǔn)品外，還需要建立公司生產(chǎn)用的應(yīng)用校準(zhǔn)品（ Working Calibrator）。日常供應(yīng)的校準(zhǔn)品為商品校準(zhǔn)品（Business Calibrator）。所有各種校準(zhǔn)品的原料要求和加工制備工藝一樣。只是在定值方案上有區(qū)別。大致

12、上，定值按照下列兩個(gè)步驟的方法：（i）按照參考標(biāo)準(zhǔn)化方式對(duì)公司一級(jí)校準(zhǔn)品定值，（ii）常規(guī)校準(zhǔn)品（routine calibrator）按照常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化方式定值。3自始至終以方法學(xué)比較實(shí)驗(yàn)為確定、驗(yàn)證、或傳遞定值的手段。因此，除了上述的混和血清組外，隨時(shí)還需要實(shí)際的新鮮病人標(biāo)本，供方法學(xué)比較用。4進(jìn)行定值的實(shí)驗(yàn)室：按照德國(guó)法律規(guī)定，為 Roche診斷公司控制品和校準(zhǔn)品確定定值的實(shí)驗(yàn)室，遵從法律上受委托的質(zhì)量導(dǎo)則，所以完全符合專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定。選擇合適的實(shí)驗(yàn)室是定值質(zhì)量的先決條件。參加定值的實(shí)驗(yàn)室要求見表 1。為了確保實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立完成工作，Roche公司很少參與實(shí)驗(yàn)室為進(jìn)行靶值設(shè)定的實(shí)施，并且確保所

13、有數(shù)據(jù)的及時(shí)返回。對(duì)于公司“一級(jí)參考血清”的參考值定值，由公司選擇國(guó)際上知名的參考實(shí)驗(yàn)室委托定值。這些參考實(shí)驗(yàn)室在國(guó)際上的數(shù)量很少，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室只是對(duì)某一個(gè)或幾個(gè)項(xiàng)目接受定值委托，費(fèi)用昂貴。但是，這是公司校準(zhǔn)品定值的依據(jù)。表 1 外部實(shí)驗(yàn)室參與靶值設(shè)定的質(zhì)量要求組織機(jī)構(gòu)有明確的職責(zé)，有訓(xùn)練有素的檢驗(yàn)人員有明確的操作程序檢測(cè)儀器加樣系統(tǒng)有具體說明和注意保養(yǎng)加樣器的校正（分析天平）有控制圖樣品處理對(duì)凍干樣品的復(fù)溶有具體說明，對(duì)深低溫冰凍樣品的凍融有具體說明有 QC圖內(nèi)部 QC系統(tǒng)室間 QC系統(tǒng)方案參加室間質(zhì)量評(píng)估，有相應(yīng)的反饋有合適的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，用于方案有合適的儲(chǔ)存條件，對(duì)儲(chǔ)存溫度有記錄和檢查儲(chǔ)存實(shí)

14、驗(yàn)室和 Roche診斷公司的聯(lián)系 有反饋，實(shí)驗(yàn)室主任參加會(huì)議，互相聯(lián)系3 5確定公司產(chǎn)品對(duì)病人標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可溯源的參考方法或參考品目前，公司的部分產(chǎn)品指定以表 2中所列的參考方法或參考品為溯源目標(biāo)。表 2羅氏公司校準(zhǔn)品的溯源性項(xiàng)目名稱參考方法或參考品羅氏試劑，手工方法CRM 470ACP酸性磷酸酶（磷酸酚酞）Alb白蛋白（plus）Alb白蛋白（BCP）CRM 470-1-抗胰蛋白酶（免疫透射）ALP堿性磷酸酶（IFCC）ALP堿性磷酸酶（DGKC 1972）ALP堿性磷酸酶（SFBC/AMP）ALT/ALAT丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加 PYP）CRM 470IFCC 1983推薦的

15、手工方法羅氏試劑，手工方法羅氏試劑，手工方法IFCC 1985推薦的手工方法ALT/ALAT丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC）Amy淀粉酶（IFCC）羅氏試劑，手工方法依據(jù) IFCC 1998推薦羅氏試劑，手工方法羅氏試劑，手工方法WHO，國(guó)際參考品 SP1-01WHO，國(guó)際參考品 SP3-07內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)P Amy胰淀粉酶（液體）Apo-A1載脂蛋白 A1（免疫透射）ApoB載脂蛋白 B（免疫透射）ASLO抗鏈球菌溶血素 O（顆粒增強(qiáng)，免疫透射）AST/ASAT天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（IFCC加/或不加 PYP）AST/ASAT天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（DGKC）IFCC 1985推薦的手工方法羅氏試劑，手

16、工方法碳酸氫鹽新標(biāo)準(zhǔn)（純物質(zhì)稱量）Doumas推薦方法TBIL總膽紅素（DPD）TBIL總膽紅素Doumas推薦方法（Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn法）DBIL直接膽紅素羅氏試劑，手工方法（Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn法）C 3-c補(bǔ)體 C3-c（免疫透射）C 4補(bǔ)體 C 4（免疫透射）Ca鈣（鄰甲酚酞絡(luò)合酮 o-CPC）Cl氯（離子選擇電極法 ISE）CHOL膽固醇（CHOD-PAP）CRM 470CRM 470原子吸收電量滴定法a）ID-MSb）Abell Kendall羅氏試劑，手工方法羅氏試劑，手工方法CRM 470CHE膽

17、堿酯酶（丁酰硫代膽堿）CHE膽堿酯酶（乙酰硫代膽堿）CER銅藍(lán)蛋白（免疫透射）CK肌酸激酶（IFCC，DGKC）IFCC 1991推薦的手工方法CK-MB肌酸激酶同工酶 MB（改良 IFCC） IFCC 19854 推薦的改良手工方法ID-MSCREA肌酐（酶比色法 plus）CREA肌酐（Jaffe堿性苦味酸比色法）CRPC-反應(yīng)蛋白（免疫透射）CRPC-反應(yīng)蛋白（顆粒增強(qiáng)，免疫透射）Ferritin鐵蛋白（顆粒增強(qiáng)，免疫透射）果糖胺（NBT）ID-MSCRM 470CRM 470NIBSC人脾精選的檢測(cè)方法Persijn/v.d.Slik（1976），手工方法GGT-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（Szas

18、z）GGT-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（IFCC）IFCC 1983推薦的手工方法羅氏試劑，手工方法ID-MSGLDH谷氨酸脫氫酶（DGKC，1972）GLU葡萄糖（GOD-PAP，HK）1-acid glycoproteinCRM 4701-酸性糖蛋白（免疫透射）HBDH羥丁酸脫氫酶（DGKC，1972）HDL-CHOL高密度脂蛋白膽固醇羅氏試劑，手工方法CDC方法葡聚糖硫酸鹽沉淀，Abell Kendal方法顯色CRM 470Haptoglobulin觸珠蛋白（免疫透射）KappaK輕鏈（免疫透射）應(yīng)用 CRM 470中的 IgG、IgM、IgAIgG免疫球蛋白 G（免疫透射）IgA免疫球蛋白 A（免疫

19、透射）IgM免疫球蛋白 M（免疫透射）FE鐵（ferrozine）CRM 470CRM 470CRM 470一級(jí)參考品（純物質(zhì)稱量）一級(jí)參考品（純物質(zhì)稱量）應(yīng)用 CRM 470中的 IgG、IgM、IgALactate乳酸（酶比色法）LambdaL輕鏈（免疫透射）LDH L-P乳酸脫氫酶 L-P（IFCC）IFCC 1994推薦的手工方法LDH L-P乳酸脫氫酶 L-P羅氏試劑，手工方法（Gay/McComb/Bowers）LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L（DGKC 1972）LDH P-L乳酸脫氫酶 P-L（SFBC）LDL-CHOL低密度脂蛋白膽固醇羅氏試劑，手工方法羅氏試劑，手工方法CD

20、C方法肝素/鎂沉淀（超離心），Abell Kendal方法顯色羅氏試劑，手工方法原子吸收Lipase脂肪酶（比色法）Mg鎂（xylidylblue）Prealbumin前白蛋白（免疫透射）Pi磷（鉬藍(lán)紫外比色法）CRM 470一級(jí)參考品（NERL）（純物質(zhì)稱量）K鉀（離子選擇電極法 ISE）Protein Total總蛋白（雙縮脲）火焰光度法SRM 9275 Salicylate水楊酸（比色法）一級(jí)參考品（純物質(zhì)稱量）火焰光度法Na鈉（離子選擇電極法 ISE）Transferrin轉(zhuǎn)鐵蛋白（免疫透射）TG甘油三酯（GPO-PAP）TG甘油三酯(去除甘油空白)Urea/BUN尿素（脲酶 UV）U

21、ric Acid尿酸（酶比色法 plus）UIBC不飽和鐵結(jié)合力CRM 470以一級(jí)參考品校準(zhǔn)的 ID-MSSRM 909bSRM 909bID-MS一級(jí)參考品（純物質(zhì)稱量）轉(zhuǎn)換為鐵注：CRM歐共體標(biāo)準(zhǔn)局的認(rèn)可參考品SRM美國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)參考品ID-MS同位素稀釋-質(zhì)譜法CDC美國(guó)疾病控制中心NIBSC英國(guó)國(guó)立生物標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照研究院6方法學(xué)比較的標(biāo)準(zhǔn)化（對(duì)公司一級(jí)校準(zhǔn)品定值的過程）這個(gè)方式在臨床化學(xué)中是最常用的。關(guān)鍵概念是：首先，我們要有一批具有參考結(jié)果X參考值（X參考方法的結(jié)果，即 X的參考值）的樣品（即公司準(zhǔn)備的一級(jí)參考品血清）。這些樣品在將成為常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)的組合系統(tǒng)（指定的分析儀試劑操作程序校準(zhǔn)

22、品等）上的檢測(cè)，得到真實(shí)（至少通過轉(zhuǎn)換）的初步結(jié)果 X檢測(cè)值。在第二步中，以方法學(xué)比較分析評(píng)價(jià)參考結(jié)果和初步檢測(cè)值結(jié)果的差異。又用方法學(xué)比較的回歸線來調(diào)整樣品在公司組合的檢測(cè)系統(tǒng)上的初步結(jié)果數(shù)值，向大家公認(rèn)的參考系統(tǒng)（或方法）的參考結(jié)果數(shù)值靠攏。實(shí)際上，是調(diào)整公司組合的檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)品的定值，將它調(diào)整到：公司組合的檢測(cè)系統(tǒng)再次被該校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，對(duì)參考樣品的檢測(cè)結(jié)果盡可能和原有的相應(yīng)參考結(jié)果一致（見圖1）。6 通過方法學(xué)比較確定定值信號(hào)公司組合的檢測(cè)系統(tǒng)和原始校準(zhǔn)品定值（）方法學(xué)比較標(biāo)準(zhǔn)化過程信號(hào)靶系統(tǒng)和最終校準(zhǔn)品定值（）方法學(xué)比較Ctar為具有參考值血清在公司組合的檢測(cè)系統(tǒng)上的檢測(cè)結(jié)果。

23、Cref為參考血清的參考值。圖 1：由圖說明，方法學(xué)比較定值的程序。第一步，在公司組合檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)用初始校準(zhǔn)品定值校準(zhǔn)后，對(duì)系列參考樣品檢測(cè)。第二步，將每個(gè)參考樣品的參考值和公司系統(tǒng)檢測(cè)的值進(jìn)行方法學(xué)比較。第三步，使用在第二步中經(jīng)方法學(xué)比較的回歸式調(diào)整得到的新校準(zhǔn)品的定值，對(duì)公司系統(tǒng)再次校準(zhǔn)，再檢測(cè)參考樣品。第四步，用校準(zhǔn)品新校準(zhǔn)值再次后，再對(duì)參考樣品人血清的檢測(cè)結(jié)果，和相應(yīng)的參考值再進(jìn)行方法學(xué)比較。若最后回歸的截距和斜率分別和 0、1很接近，說明標(biāo)準(zhǔn)化成功地完成了（二） 常規(guī)臨床化學(xué)的校準(zhǔn)品定值過程7 1參加定值的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量：在上世紀(jì)的 80年代，德國(guó)診斷廠商協(xié)會(huì)（German Diagnos

24、ticsManufacturers Association, VDGH）依據(jù)大量研究，提出一個(gè)高效而可靠的定值測(cè)定模式。“VDGH模式”要求每個(gè)校準(zhǔn)品每個(gè)項(xiàng)目的結(jié)果至少由 6個(gè)實(shí)驗(yàn)室做 5個(gè)天間樣品的測(cè)定。這個(gè) 6×5=30個(gè)結(jié)果模式還要求同時(shí)進(jìn)行“未知控制品”的檢測(cè)。只有負(fù)責(zé)靶值設(shè)定 Roche診斷公司，知道“未知控制品”的定值。所有被評(píng)估的參加實(shí)驗(yàn)室必須能回收這個(gè)值。研究說明，確定定值要求的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量為 6個(gè)是最佳安排；盡管使用了相同的檢測(cè)系統(tǒng)，但是，各實(shí)驗(yàn)室同項(xiàng)目的精密度不一致；而且數(shù)據(jù)分布不呈正態(tài)分布。因此，確定靶值的做法是：將所有實(shí)驗(yàn)室結(jié)果合在一起，去除 5的極值后的中位數(shù)

25、為定值。VDGH模式發(fā)表于 1981年的 J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, Vol. 19, pp. 1137-1179。它的基本原理仍然用于今天對(duì)每個(gè)靶值設(shè)定中。歐洲的約 30個(gè)實(shí)驗(yàn)室中，總的有 7個(gè)（至少 6個(gè)）近日參與靶值設(shè)定工作。2公司一級(jí)參考品和一級(jí)校準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)化的目的是確?；颊哐逶诹_氏診斷分析系統(tǒng)上檢測(cè)得到的結(jié)果，和直接用參考方法檢測(cè)、或使用參考品為校準(zhǔn)品的檢測(cè)結(jié)果一致。標(biāo)準(zhǔn)化的各要素見圖 2。標(biāo)準(zhǔn)化的各要素校準(zhǔn)品試劑分析儀圖 2：圖中有三個(gè)要素，它們共同影響患者樣品的結(jié)果的可靠性所以，除非有一些例外，病人樣品總是使用于參考標(biāo)準(zhǔn)化中。依據(jù)

26、方法學(xué)要求，始終使用單一獻(xiàn)血員血清或混合血清。這些血清即為上述的公司一級(jí)參考品。這些人來源的樣品或者直接用參考方法檢測(cè)；或者在羅氏診斷分析系統(tǒng)上，經(jīng)參考品校準(zhǔn)后檢測(cè)得到參考值。以后它們作為參考血清組（公司一級(jí)參考品）服務(wù)于公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值的定值。使用時(shí)，在需要標(biāo)準(zhǔn)化的分析儀上檢測(cè)，用具有初步校準(zhǔn)品值的通常公司一級(jí)校準(zhǔn)品批號(hào)進(jìn)行校準(zhǔn)。然后，通過方法學(xué)比較或使用各個(gè)檢測(cè)平均變異等，為公司一級(jí)校準(zhǔn)品設(shè)定最終值。公司一級(jí)校準(zhǔn)品的基體大致和各批市售校準(zhǔn)品（常規(guī)校準(zhǔn)品）相當(dāng)；另外，這些一級(jí)校準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-70，并定期檢查穩(wěn)定性。在參考標(biāo)準(zhǔn)化中為了避免未處理過人的樣品穩(wěn)定性問題，單一獻(xiàn)血員樣品只使用一次。

27、混合人血清的參考方法值最多被認(rèn)可 6個(gè)月；需要重新用于參考標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)，應(yīng)重確定。對(duì)公司一級(jí)參考血清定值的最高計(jì)量水平是國(guó)際認(rèn)可的參考方法（如： ID-MS）。若沒有參考方法可用，則選擇合適的正式官方參考品（如：CRM 470）。若這個(gè)也沒有，則可使用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的水標(biāo)準(zhǔn)液（如：乳酸鋰）為參考，或者某個(gè)確定的檢測(cè)方法。酶活力檢測(cè)通常以酶催化活力為檢測(cè)量，依據(jù)規(guī)定的檢測(cè)方法，在指定的系統(tǒng)上指示底物的轉(zhuǎn)換速率即為檢測(cè)量。IFCC方法是在正式的研究單位（他們是這些方法的發(fā)表者）進(jìn)行手工檢測(cè)的參考方法，以基本的活力計(jì)算公式得到酶活力。國(guó)家認(rèn)可的方法，是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或各個(gè)實(shí)驗(yàn)室間，使用系統(tǒng)試劑作為參考進(jìn)行手工檢測(cè)

28、的方法。8 幾乎所有的分析物，確定溯源性的程序歸納如下：用參考方法、或以參考品為校準(zhǔn)品，對(duì)人血清的檢測(cè)。公司一級(jí)校準(zhǔn)品以這些參考方法值標(biāo)準(zhǔn)化。市售校準(zhǔn)品和控制品則以公司一級(jí)批號(hào)校準(zhǔn)品（真實(shí)性控制）在羅氏診斷分析系統(tǒng)上作校準(zhǔn)。這樣保證了在這些系統(tǒng)上確定的患者結(jié)果值的溯源性。每個(gè)分析儀平臺(tái)（羅氏/日立、COBAS INTEGRA）對(duì)每個(gè)方法各自都以相同方式，按照該參考標(biāo)準(zhǔn)化。溯源性途徑人血清組“參考組”以參考品（一級(jí)或二級(jí)）對(duì)（參考）方法校準(zhǔn).f.a.s.公司一級(jí)，初步校準(zhǔn)品定值.f.a.s.公司一級(jí)，調(diào)整過的校準(zhǔn)品定值市售C.f.a.s.和真實(shí)性控制品圖 3：臨床化學(xué)的參考系統(tǒng)和產(chǎn)品校準(zhǔn)品、真實(shí)

29、性控制品間的溯源性鏈（1）相對(duì)于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定參考方法值，如 ID-MS參考方法，一定要在認(rèn)可的參考檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，如 ZRI（Reference Institute of Bioanalysis）以參考方法作檢測(cè)，每次對(duì)使用的 510個(gè)混合血清檢測(cè)，但是檢測(cè)費(fèi)用非常昂貴。每個(gè)混合血清由約 100個(gè)供血員血液組成?；旌涎逯械母鱾€(gè)分析物濃度或活力，盡可能分布于整個(gè)相應(yīng)的檢測(cè)范圍?；旌涎鍍?nèi)不可添加任何處理過的材料，也不可用氯化鈉溶液稀釋。以確保在參考標(biāo)準(zhǔn)化中使用的樣品，和天然的患者血清沒有任何差別。另外，使用天然的人材料，我們能對(duì)出現(xiàn)在校準(zhǔn)品的任何基體效應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)償。程序匯總于圖 4。羅氏

30、分析儀方法vs.參考方法參 考方 法分析儀用公司一級(jí)參考品校準(zhǔn)人混合血清C.f.a.s.校準(zhǔn)品（公司一級(jí)校準(zhǔn)品）圖 4：本圖說明相對(duì)于參考方法的參考標(biāo)準(zhǔn)化的程序人混合血清分裝后冰凍于-70，在參考實(shí)驗(yàn)室和 7個(gè)外部實(shí)驗(yàn)室（使用羅氏診斷分析儀系統(tǒng)）同時(shí)對(duì)混合血清平行檢測(cè)。在羅氏/日立或 COBAS INTEGRA系統(tǒng)上檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)模式相當(dāng)于用于確定定值的模式。公司一級(jí)校準(zhǔn)品為具有初步校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品。在進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的分析儀上，每個(gè)樣品在被標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)上所有可接受檢測(cè)結(jié)果的中位數(shù)，和該樣品的參考方9 法值作比較。公司一級(jí)校準(zhǔn)品值的標(biāo)準(zhǔn)化通過方法學(xué)比較（線性回歸）實(shí)現(xiàn)。方法學(xué)比較回歸線的截距若在允許限值內(nèi)，

31、可以從斜率的偏離計(jì)算出新校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值。若截距超出了允許限值，則方法學(xué)比較不能用于公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化。有些項(xiàng)目，如 HDL，參考標(biāo)準(zhǔn)化的整個(gè)過程按照合適的方案在確認(rèn)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)實(shí)施。（2）相對(duì)于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化若以參考品為參考標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)，通常檢測(cè)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)供血員的新鮮血清。一般，在 4個(gè)實(shí)驗(yàn)室總共對(duì) 50例患者血清每份獨(dú)立地進(jìn)行 25次檢測(cè)。這些血清中的分析物濃度盡可能分布于整個(gè)相應(yīng)的檢測(cè)范圍。嚴(yán)格地在分析儀的 2個(gè)通道上進(jìn)行檢測(cè)。一個(gè)通道用參考品校準(zhǔn)，另一個(gè)用公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)；在任何情況下，都使用一個(gè)批號(hào)的試劑。一個(gè)未知樣品和 2個(gè)校準(zhǔn)品，和其他樣品一起在每批中進(jìn)行檢測(cè)。檢

32、測(cè)程序見圖 5。用參考品或一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化通道1公司一級(jí)校準(zhǔn)品通道2分析儀人血清樣品參考品 如：CRM 470圖 5：本圖說明相對(duì)于參考品的參考標(biāo)準(zhǔn)化程序使用方法學(xué)比較（Passing,Bablok回歸統(tǒng)計(jì)）進(jìn)行校準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)化；評(píng)價(jià)時(shí)通常需要 200個(gè)樣品，但是最少為 50個(gè)。新批號(hào)公司一級(jí)校準(zhǔn)品值的計(jì)算方法基本上和用參考方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的方法一樣。另外，在使用公司一級(jí)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，要設(shè)定對(duì)參考品回收的允許限值。3常規(guī)校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)化由于公司一級(jí)校準(zhǔn)品具有和常規(guī)校準(zhǔn)品相同的基體，使用公司一級(jí)校準(zhǔn)品的單獨(dú)校準(zhǔn)，得到的常規(guī)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值預(yù)期不會(huì)和使用人血清校準(zhǔn)得到的值有差異。校準(zhǔn)值的真實(shí)性和檢測(cè)不確定度主

33、要取決于統(tǒng)計(jì)模式和檢測(cè)性能的質(zhì)量。但是，為了確認(rèn)這個(gè)假設(shè)和認(rèn)可常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的程序，對(duì)每個(gè)方法（分析儀平臺(tái)/校準(zhǔn)品/試劑組成）進(jìn)行下列的外部實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)。使用相同批號(hào)的試劑，對(duì)一些患者樣品（分析物含量分布于相應(yīng)范圍），用公司一級(jí)校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品任意批號(hào)分別校準(zhǔn)后進(jìn)行平行檢測(cè)。為了肯定市售校準(zhǔn)品和公司一級(jí)校準(zhǔn)品在這個(gè)程序中的可比性，方法學(xué)比較的直線回歸的截距必須接近 0，斜率和 1.00間的差異在規(guī)定的限值內(nèi)。（1）常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化的趨勢(shì)控制品對(duì)校準(zhǔn)品定值依據(jù)公司一級(jí)校準(zhǔn)品（C.f.a.s.masterlot）。（在生產(chǎn)公司一級(jí)校準(zhǔn)品和市售校準(zhǔn)品中是一樣的。）公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值可以用具有整個(gè)生理相應(yīng)檢

34、測(cè)范圍分析物的人樣品，直接溯源至參考方法或參考品。公司一級(jí)校準(zhǔn)品的儲(chǔ)存溫度為-70，可以使用月 23年。為了確認(rèn)，在 46年后對(duì)一級(jí)校準(zhǔn)品重新用參考方法標(biāo)準(zhǔn)化。為了使參與標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量在連續(xù)的質(zhì)量控制下，要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)市室對(duì)每批市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品的定值時(shí)，同時(shí)檢測(cè) 2個(gè)不同漂移/趨勢(shì)控制品組成監(jiān)視系統(tǒng)。一個(gè)控制品是10 儲(chǔ)存于-70的市售校準(zhǔn)品，以確保在儲(chǔ)存期間有最好的穩(wěn)定性。冰凍的（-70）天然人血清為第二個(gè)漂移控制品。這個(gè)混合血清的來源和羅氏診斷產(chǎn)品過程是獨(dú)立的。兩個(gè)趨勢(shì)控制品至少可以使用 2年以上。如果要變換這些控制品，應(yīng)將近期的和新的控制品在一個(gè)試驗(yàn)中作平行檢測(cè)。依據(jù)不確定度

35、的計(jì)算，確定允許的可接受范圍。若有一個(gè)趨勢(shì)控制品超出了允許范圍，應(yīng)開始重-標(biāo)準(zhǔn)化。若重標(biāo)準(zhǔn)化的 C.f.a.s.值超出了預(yù)定的限值，公司一級(jí)校準(zhǔn)品的定值應(yīng)以此調(diào)整。這些做法的指標(biāo)隨不同分析物而不同，出現(xiàn)顯著差異-這些指標(biāo)和分析物有關(guān) -必須對(duì)所有市售校準(zhǔn)品和控制品進(jìn)行完全的重設(shè)定靶值。對(duì)市售C.f.a.s.校準(zhǔn)品產(chǎn)品的常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化C.f.a.s.一級(jí)校準(zhǔn)品(-70)趨勢(shì)控制品1（-70）趨勢(shì)控制品2（-70）圖 6：在市售 C.f.a.s.校準(zhǔn)品產(chǎn)品校準(zhǔn)值設(shè)定時(shí)的趨勢(shì)控制品（2）對(duì)參與標(biāo)準(zhǔn)化和靶值設(shè)定的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求羅氏診斷公司提供的校準(zhǔn)品和控制品的定值，都以臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)患者臨床化學(xué)項(xiàng)目檢測(cè)值進(jìn)

36、行校正確定的。所以，參與確定控制品和校準(zhǔn)品定值的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量是極其重要的。1）進(jìn)行定值的實(shí)驗(yàn)室的 QC參與標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室通常是獨(dú)立的外部實(shí)驗(yàn)室，也檢測(cè)患者的樣品值，接受國(guó)家機(jī)構(gòu)的質(zhì)量控制。在德國(guó)，例如，質(zhì)量控制包括內(nèi)部質(zhì)量控制，定期參加循環(huán)檢測(cè)，和參加德國(guó)醫(yī)學(xué)委員會(huì)導(dǎo)則要求的室間質(zhì)量評(píng)估。參與定值的實(shí)驗(yàn)室分布于歐洲和美國(guó)，都接受相似的質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室定期接受審核。靶值確定的質(zhì)量要求需要符合 GMP導(dǎo)則，公司和靶值設(shè)定實(shí)驗(yàn)室間按照標(biāo)準(zhǔn)要求簽訂合作協(xié)議。參與的實(shí)驗(yàn)室被要求檢查設(shè)備、人員、檢測(cè)性能、保存記錄等是否符合文件要求。各實(shí)驗(yàn)室獲得的原始數(shù)據(jù)，須進(jìn)行抽樣檢查，然后必須將數(shù)據(jù)送給羅氏診斷公司確認(rèn)。

37、進(jìn)行每個(gè)靶值設(shè)定時(shí)，實(shí)驗(yàn)室將收到詳細(xì)說明，要求按此實(shí)施，例如：關(guān)于樣品穩(wěn)定性（通常較正式說明書考慮的要短）和各個(gè)檢測(cè)的特點(diǎn)。定值的測(cè)定一定在恒定的質(zhì)量控制下。和患者樣品測(cè)定一樣，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)時(shí)應(yīng)同時(shí)檢測(cè) 12個(gè)內(nèi)部質(zhì)量控制樣品。若有任何一個(gè)質(zhì)量控制樣品的回收超出了 2標(biāo)準(zhǔn)差范圍，實(shí)驗(yàn)室必須檢查原因，有必要重做。參與者也會(huì)收到未知樣品，要求像 QC樣品那樣，每批檢測(cè)時(shí)進(jìn)行被檢測(cè)。若這個(gè)未知樣品的回收超出 2標(biāo)準(zhǔn)差，這個(gè)實(shí)驗(yàn)室的所有檢測(cè)結(jié)果將被排除在評(píng)價(jià)以外。若結(jié)果沒有任何不正常，或在分析儀、試劑、或校準(zhǔn)品等有任何問題，參與者應(yīng)寫出報(bào)告和簽署。必須消除檢測(cè)操作中發(fā)生的誤差，如樣品混勻等。2）統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)、試劑、預(yù)處理、重復(fù)靶值設(shè)定的統(tǒng)計(jì)模式依據(jù)德國(guó)診斷產(chǎn)品廠商協(xié)會(huì) VDGH（ German DiagnosticsManufactures Association VDGH）的模式，作下列修改。和 7個(gè)實(shí)驗(yàn)室簽訂協(xié)議，確定校準(zhǔn)11 值（常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)化）和定值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)每個(gè)臨床化學(xué)項(xiàng)目（如：葡萄糖、膽固醇）進(jìn)行 3次獨(dú)立的檢測(cè)，對(duì)每個(gè)均